云南省自然科学基金(2010ZC228)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 相关作者：许琳覃袖伟朱建波李华春李富祥更多>>
- 相关机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金云南省农业科技创新工程项目国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及16SrRNA序列分析被引量：11
- 2012年
- 从云南省和四川省规模化养鸡场鸡传染性鼻炎疑似病例鸡鼻窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,并对其进行生化鉴定、PCR鉴定和16SrRNA序列比对鉴定。16SrRNA分析表明两分离株与GenBank中的其他副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum,HPg）参考株核苷酸同源性为94.2%~99.2%。两分离菌株鉴定为副鸡嗜血杆菌,分别命名为YNAN20120110和SCPZH20120120株。16SrRNA遗传进化关系表明：分离株与NAD非依赖型副鸡嗜血杆菌血清A型代表株GU951543（HP105strain）的16SrRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性为99.2%;与副鸡嗜血杆菌血清A型参考株AY498867（0083株）核苷酸同源性为96.9%。致病性实验表明分离菌株对成年产蛋鸡有强致病性。抗生素药物敏感试验表明：分离菌株对头孢吡肟、头孢噻吩、氯霉素、卡那霉素和氧氟沙星高敏,对四环素中敏,对磺胺甲唑耐药。
- 李富祥李华春许琳覃袖伟杨仕标朱建波
- 关键词：副鸡嗜血杆菌
- 鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A克隆表达及纯化
- 2014年
- 为了制备鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)外膜蛋白A(Outer membrane protein-A,OmpA)。本研究将RA云南流行株外膜蛋白OmpA基因PCR克隆至质粒pET32a,构建重组表达质粒pET32a-OmpA,将其转化大肠杆菌TransB感受态细胞,用IPTG诱导表达,并将表达产物进行初步纯化。结果表明OmpA基因在大肠杆菌原核表达系统中获得了高效表达,表达的OmpA重组蛋白分子量为61 kDa,表达量占菌体蛋白的40%。OmpA重组蛋白经纯化后纯度达90%。本研究为RA的ELISA抗原的制备奠定了基础。
- 李富祥王传禹胡骑苗海生李华春
- 关键词：纯化
- 云南鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A及16S rRNA序列分析被引量：3
- 2012年
- 为了探讨鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)云南流行株的外膜蛋白A(OmpA)的基因序列差异及其与16SrRNA序列的相关性,PCR扩增18株云南流行株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因及16SrRNA核苷酸序列,分别构建其系统进化树,分析其系统进化关系。结果表明,18株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因分为2个群,其同源性分别为86%～99.2%和92.6%～100%。18株鸭疫里默氏杆菌16SrRNA基因同属1个群,同源性高达96.1%～100%。RA-1、RA-2、RA-11和RA-39 4株分离株的OmpA基因位于进化树的同一个亚群,其16SrRNA基因也位于进化树的同一亚群,两者呈现出明显的相关关系,其他14株分离株的OmpA基因系统进化树与16SrRNA基因系统进化树无明显的相关关系。
- 李富祥王传禹常志顺杨斌李华春
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌RRNA基因
- 肉鸡和蛋鸡鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及其新生物学特性分析被引量：7
- 2014年
- 为了确诊疑似肉鸡和蛋鸡鼻气管鸟杆菌（0RT）感染并研究其病原的新生物学特性，对其病原进行分离鉴定并分析其16SrDNA序列特征、溶血活性、凝血活性和药物敏感性。从云南省有鼻炎症状的蛋鸡和肉鸡中分离到5株革兰氏阴性多形性杆菌，分别被命名为YNll061、YN12071、YN12072、YN12091和YN12092。生化试验表明，5株分离株氧化酶阳性，过氧化氢酶阴性，发酵葡萄糖、乳糖、半糖、麦芽糖、甘露糖和果糖，产酸不产气；16SrDNA序列分析表明，5株分离株与GenBank上12株国外代表株之间的核苷酸序列同源性为99．39／6～100％，进一步鉴定为ORT。溶血试验和凝血试验表明，5株分离株具有p溶血性，能够凝集戊二醛醛化的绵羊红细胞。5株分离株同时对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、红霉素、氧氟沙星、诺氟沙星显示多重耐药性。结果证实，云南省存在ORT感染。本研究首次报道了ORT的溶血性和凝血性，为ORT的分离鉴定和新型诊断检测方法的建立奠定了基础。
- 李富祥李华春杨仕标许琳覃袖伟朱建波赵文华
- 关键词：鼻气管鸟杆菌RDNA溶血性
- 鼻气管鸟杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 为建立鼻气管鸟杆菌(ORT)TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据ORT 16S rRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件、特异性、敏感性、重复性试验和临床样品的检测,建立了ORT TaqMan荧光定量PCR检测方法。实验结果表明:该方法具有良好特异性;最低可以检测到1.09×102拷贝/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%;23份临床样品检测的阳性率为48%。该方法可以用于鸡ORT感染的早期诊断及ORT的快速鉴定和定量分析。
- 李富祥段志华赵文华信爱国杨仕标李华春
- 关键词：鼻气管鸟杆菌RRNA基因
