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国家自然科学基金(30271391)

作品数:16 被引量:68H指数:5
相关作者:柳林沈炜潘欣孙琰曹丹更多>>
相关机构:第二军医大学广州军区广州总医院解放军第411医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金上海市卫生局科研基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 16篇中文期刊文章

领域

  • 15篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 9篇视网膜
  • 9篇网膜
  • 8篇基因
  • 6篇实时荧光
  • 6篇转化生长因子
  • 6篇化生
  • 6篇基因表达
  • 5篇血管
  • 5篇荧光
  • 5篇荧光定量
  • 5篇实时荧光定量
  • 5篇受体
  • 4篇生长因子Β
  • 4篇糖尿
  • 4篇糖尿病
  • 4篇糖尿病大鼠
  • 4篇转化生长因子...
  • 4篇细胞
  • 3篇糖尿病大鼠视...
  • 3篇酶链反应

机构

  • 15篇第二军医大学
  • 1篇广州军区广州...
  • 1篇解放军第41...

作者

  • 14篇柳林
  • 8篇沈炜
  • 5篇潘欣
  • 3篇孙琰
  • 3篇曹丹
  • 2篇满晓波
  • 2篇徐琪
  • 2篇刘银萍
  • 2篇刘志勇
  • 2篇潘东艳
  • 2篇董晓飞
  • 1篇桑延智
  • 1篇王泳
  • 1篇李慎菁
  • 1篇刘心
  • 1篇吴晋晖
  • 1篇陈淑娟
  • 1篇张媛
  • 1篇刘志勇
  • 1篇柳林

传媒

  • 6篇国际眼科杂志
  • 4篇眼科研究
  • 2篇第二军医大学...
  • 1篇眼科新进展
  • 1篇中华眼底病杂...
  • 1篇Journa...
  • 1篇中国临床康复

年份

  • 2篇2009
  • 4篇2008
  • 2篇2007
  • 4篇2006
  • 3篇2005
  • 1篇2004
16 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
血管内皮细胞生长抑制因子VEGI_(151)重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用被引量:6
2005年
目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用。方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,WesternBlot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测AdVEGI151对ECV304细胞的抑制作用,缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗。结果VEGI151重组腺病毒在病变细胞内能成功表达相对分子质量为17300的蛋白,体外实验表明,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长,体内实验表明,重组腺病毒对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用。结论以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞抑制因子VEGI151基因治疗角膜新生血管效果显著,为角膜新生血管的基因治疗提供了新的思路。
柳林刘银萍潘欣孙琰徐琪沈炜刘志勇
关键词:血管内皮细胞生长抑制因子腺病毒载体角膜新生血管
Ad-VEGI_(151)对人脐静脉内皮细胞增殖的影响被引量:5
2005年
目的:研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子基因(VEGI151)对静脉内皮细胞的增殖抑制作用。方法:利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western印迹法检测病变细胞内基因的蛋白质表达。X-gal染色测定重组腺病毒载体系统的基因转移效率,结晶紫染色法检测细胞D570/630值,观察Ad-VEGI151对ECV304细胞增殖抑制作用的效果,免疫组织化学检测ECV304细胞内VEGI151基因的蛋白质表达。结果:应用细胞内质粒DNA同源重组法,将脂质体介导质粒pCA13-VEGI151与pJM17共转染293A细胞制备重组腺病毒,所获病毒滴度高,是一种制备重组腺病毒切实可行的方法。Ad-VEGI151在病变细胞内能成功表达蛋白,具有较高的基因转移效率,对静脉内皮细胞的增殖具有强烈的抑制作用,并能在靶细胞内表达有生物学活性的蛋白质。结论:以复制缺陷型重组腺病毒为载体的VEGI151基因能在靶细胞内表达具有生物学活性的蛋白质,抑制体外静脉内皮细胞的增殖,这为进一步肿瘤及新生血管性疾病的基因治疗提供了新的方法。
刘银萍柳林潘欣徐琪潘东艳
关键词:血管内皮细胞生长抑制因子基因治疗腺病毒载体
SARS-CoV S666蛋白与眼部ACE2受体的结合作用被引量:4
2007年
目的研究SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)S666蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)的结合作用。方法构建SARS-CoV S666蛋白融合基因pS666-EGFP,并在哺乳动物细胞(293T细胞)中表达;酶联免疫吸附实验及流式细胞仪检测法进行SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞及心、肺组织的体外结合研究。结果构建了融合基因pS666-EG-FP,琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western Blot分析证明SARS-CoV pS666-EGFP融合基因构建正确,基因表达产物与理论推算值相符,相对分子量约为100.7×103。酶联免疫吸附实验结果经析因方差分析显示:S666-EGFP蛋白与角膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、结膜上皮细胞及结膜、角膜组织的结合能力比EGFP蛋白强(有统计学差异,P<0·001)。流式细胞仪检测结果显示:结膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、角膜上皮细胞与S666-EGFP蛋白结合,但与EGFP蛋白均无结合。上述细胞及组织的结合能力较vero E6细胞及心、肺组织的结合能力稍弱。结合反应能够被ACE2抗体所阻滞,证实其为特异性结合。结论SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞能够结合,对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。
孙琰柳林潘欣
关键词:严重急性呼吸综合征冠状病毒血管紧张素转化酶2结膜角膜
SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达被引量:19
2004年
目的检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能.方法取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4~6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达.取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照.结果在上述各种组织中均检测到了ACE.2的表达.结论眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索.
柳林孙琰潘欣沈炜刘志勇刘银平
关键词:S蛋白功能性受体血管紧张素转化酶角膜结膜
大鼠视网膜Mller细胞受刺激后具有神经干细胞的特性被引量:1
2009年
目的:研究并验证成年哺乳动物视网膜中Mller细胞经刺激后可以产生神经干细胞特性。方法:对6周龄VC大鼠右眼玻璃体腔内注射神经毒素混合液(含NMDA,kainate,FGF2和insulin)刺激Mller细胞,左眼玻璃体内注射PBS作为对照眼。1wk后取眼并分离Mller细胞体外原代纯化培养7d。流式细胞技术鉴定Mller细胞纯度,通过细胞免疫荧光组织化学和流式细胞技术鉴定神经干细胞标志物nestin在Mller细胞上的表达。结果:流式细胞分析结果显示,本实验分离培养的原代Mller细胞纯度可达96%以上;细胞免疫荧光组织化学显示激活后Mller细胞能表达nestin,流式细胞技术证明,激活后培养的细胞中表达nestin的细胞可达总细胞量的53.5%。结论:成年大鼠视网膜Mller细胞经神经毒素在体刺激后可以产生神经干细胞特性。
董晓飞柳林
关键词:干细胞哺乳动物
实时荧光聚合酶链反应定量检测大鼠视网膜中转化生长因子β1和β2的表达被引量:4
2005年
沈炜柳林满晓波刘志勇李慎菁
关键词:TGF-Β视网膜转化生长因子Β1合酶角色
神经生长因子对糖尿病大鼠神经视网膜超微结构的影响被引量:14
2008年
目的:通过观测实验性糖尿病动物的神经视网膜的超微结构变化,从视网膜的神经功能角度来探讨糖尿病视网膜病变的发生机制以及相关药物干预后的影响作用。方法:用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠动物模型,分为正常对照组(CON组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病神经生长因子治疗组(D+N组)。分别于病程3,6,9,12mo取大鼠眼球制备石蜡切片,将视网膜组织行HE染色,并将上述标本制备超薄切片,用透射电镜观察并分析。结果:从病程3mo开始,DM组视网膜血管内皮细胞及周细胞的核变形、线粒体肿胀变性、基底膜增厚。视神经节细胞水肿,胞器减少,线粒体变性。光感受器细胞(视锥、视杆)膜盘间隙扩大,线粒体及核也有病理改变。上述病变随病程延长而逐渐加重。经过NGF治疗后,上述DM改变有所减轻,主要表现在感光细胞外节膜盘间隙较DM组缩小,平行度好转;神经细胞突起水肿减轻,胞器水肿好转。各组DM大鼠的视网膜血管、神经网膜及视神经的糖尿病性病变之间未见明显的先后因果关系。结论:神经生长因子对DM大鼠视网膜形态学上所见的视网膜血管、感光细胞和神经节细胞的超微结构改变有着明确的改善作用。在DR的发病过程中,视网膜血管的病变与视网膜神经组织的病变可能是同时存在、互相促进,共同造成糖尿病视网膜病变和视功能的损害。
桑延智刘心柳林吴晋晖张媛潘东艳
关键词:糖尿病大鼠神经视网膜神经生长因子超微结构
Müller细胞对大鼠光感受器变性及视功能的保护作用被引量:4
2009年
目的以RCS视网膜色素变性大鼠为模型,研究经诱导产生神经干细胞特性的Müller细胞视网膜下腔移植对光感受器变性的保护作用。方法向6周龄VC大鼠玻璃体腔内注射神经毒素混合液(包含NMDA、kainate、FGF2和胰岛素)刺激视网膜Müller细胞。1周后取材分离Müller细胞体外原代培养。将细胞标记后,以每眼1×105个细胞密度移植到6周龄RCS大鼠右眼视网膜下腔,左眼分组注射正常Müller细胞和PBS作为同型对照及阴性对照。术后分别于第1、3、5、7周,行视网膜铺片、组织病理学及视觉电生理检查。结果培养的Müller细胞纯度可达96%以上,其中表达神经干细胞标志物的细胞占总细胞量的53%以上。组织病理学观察显示,在相同时间点移植眼保留的光感受器细胞数量明显较同型对照眼多,同型对照移植眼保留的光感受器细胞数量明显较阴性对照眼多。视网膜电图(ERG)检查结果与病理学结果相符。结论视网膜下腔移植经诱导产生神经干细胞特性的Müller细胞可以有效延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性,为治疗视网膜变性疾病提供了新的途径。
董晓飞柳林严良陈淑娟
关键词:视网膜变性细胞移植MÜLLER细胞干细胞
Combined use of Ad-hENDO-VEGI_(151) and Dexamethasone for prevention and treatment of keratoplasty rejection:an experimental study被引量:1
2006年
Objective:To evaluate the probability and efficacy of endostatin-vascular endothelial growth inhibitor (VEGI) recombinant adenoviruses combined with dexamethasone on suppressing heterolamellar corneal transplantation rejection. Methods: Heterolamellar corneal transplantation models were established in 64 New Zealand rabbits, which were randomized into 4 groups of 16 rabbits each. After the transplantation, all the 64 right eyes were injected subconjunctively with 0.2 ml saline (saline group), 0. 1 ml AdCA13-hENDO-VEGI151 plus 0. 1 ml saline (AdCA13-hENDO-VEGI151 group), 0. 1 ml Dexamethasone (DXM) plus 0.1 ml saline (DXM group), 0. 1 ml AdCA13-hENDO-VEGI151 plus 0. 1 ml DXM (AdCA13-hENDO-VEGI151 combined with DXM group) with one time each 3 days for 10 times. Graft survival and ocular surface were observed for 6 weeks. The fusion protein expression was detected by immunohistochemistry 6 weeks after transplantation. Results: Both the CNV index, rejection index and the xenograft rejection rate in the AdCA13-hENDO-VEGI151 combined with DXM group were statistically lower than those in other groups. AdCA13-hENDO-VEGI151 combined with DXM group: 1. 375 0±0. 500 0, 2. 750 0 ±1. 843 9 and 6.25% respectively 6 week after keratoplasty; Saline group: 3. 437 5±0. 512 3, 8. 812 5± 1. 108 7, 100. 00%; AdCA13-hENDO-VEGI151 group: 2. 312 5±0. 478 7, 5. 625 0±0. 957 4, 62.50%; DXM group: 3. 000 0±0. 816 5, 5. 562 5±1. 315 0, 56.25% (P〈0.01). Immunohistochemical staining showed the fusion protein expressed mainly in corneal epithelium. Conclusion: The fusion protein expressed by the recombinant adenovirus has significant effect on inhibiting neovascularization after heterolamellar corneal transplantation. The topical application of AdCA13-hENDO-VEGI151 combined with DXM suppressed effectively the postoperative xenograft rejection rate of heterolamellar corneal transplantation.
刘银萍柳林潘东艳孙琰沈炜刘志勇
实时荧光定量PCR检测糖尿病大鼠视网膜中转化生长因子β受体-1和受体-2基因表达(英文)被引量:2
2006年
目的:定量检测转化生长因子β受体-1(TransformingGrowthFactor-βreceptortype1,TβR1)和转化生长因子β受体-2(TransformingGrowthFactor-βreceptortype2,TβR2)编码基因在糖尿病大鼠视网膜中不同时相点的动态表达水平,以探讨转化生长因子β及转化生长因子β受体在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用。方法:选择健康成年SD大鼠28只,随机分为正常对照组(CON)和糖尿病组(DM)。利用链尿佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病视网膜病变模型,制备RNA并逆转录,实时荧光定量PCR技术分析TβR1和TβR2在不同时相点相对于内参照基因18s的相对mRNA含量。结果:TβR1在4,12wk时相对于18s的mRNA含量分别为0.000493±0.000133和0.000608±0.000232。TβR2在4,12wk时相对于18s的mRNA含量分别为0.000166±0.000057和0.000113±0.000049。TβR1基因表达水平随着病变进展呈上升趋势,TβR2在4wk时表达量较正常增加,到12wk时表达量又减少,逐渐恢复到正常水平。结论:糖尿病大鼠视网膜中TβR1和TβR2基因表达水平变化可能影响TGF-β信号的转导过程,TGF-β及其受体介导的信号转导通路在糖尿病视网膜病变中具有重要作用。
曹丹柳林沈炜
关键词:受体链尿佐菌素基因表达
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