国家自然科学基金(30170860)
- 作品数：8 被引量：70H指数：4
- 相关作者：范卫新张兴洪李晓凤张卉周乃慧更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科委社会发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 特异性双链RNA对小鼠干细胞和转基因荧光蛋白的抑制作用被引量：1
- 2003年
- 目的研究特异性dsRNA对小鼠ES细胞中对核外基因和核内染色体基因的干扰作用,并对RNA干扰(RNAi)技术在皮肤病基因治疗领域中应用的可能性进行初步探讨。方法选择荧光蛋白基因为靶基因,通过质粒或RNA直接转染技术,将荧光蛋白双链RNA(dsRNA-EGFP)转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞),从而观察该细胞中特异性RNAi作用。并通过皮肤局部注射dsRNA-EGFP和局部外用脂质体包裹的dsRNA-EGFP,观察EGFP转基因鼠皮肤EGFP的表达。结果无论是转染质粒产生的dsRNA-EGFP或是直接转染的dsRNA-EGFP,均明显抑制ES细胞核外或染色体中EGFP基因的特异性表达。局部皮肤注射或皮肤外用脂质体-dsRNA-EGFP均特异性抑制EGFP转基因鼠皮肤EGFP的表达。结论本研究证实了小鼠ES细胞中特异性RNAi的作用。
- 范卫新Shicheng YanKyonggeun Yoon
- 关键词：特异性双链RNA小鼠干细胞ES细胞荧光蛋白
- 某些中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响
- 2005年
- 目的:探讨何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。方法:用MTT法通过比色分析测定吸光度值(OD),检测不同剂量(0、5、10、20)mg/L阿霉素作用24h和10mg/L阿霉素作用不同时间(4、8、12、24、48h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用24h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率,从而找出用于以下研究中阿霉素的最适浓度。用MTT法检测不同剂量中药煎剂和10mg/L阿霉素同时给药共同作用24h以及先给予不同剂量中药煎剂作用24h,然后给予10mg/L阿霉素作用24h两种条件下对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。结果:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强;细胞凋亡率以阿霉素浓度为10mg/L时最高。中药煎剂和阿霉素10mg/L同时给药条件下,前者不能有效升高OD值(P>0.05);如果先给予中药煎剂处理,后给10mg/L阿霉素,则中等剂量的中药煎剂即能有效升高OD值(P<0.001)。结论:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,先给予适当剂量的中药煎剂处理细胞,能在一定程度上减轻阿霉素对细胞的损伤。
- 张兴洪范卫新
- 关键词：中药煎剂流式细胞仪检测阿霉素浓度MTT法检测细胞凋亡率OD值
- 局部寡核苷酸诱导小鼠毛囊角蛋白17基因改变的基因治疗研究被引量：1
- 2004年
- 目 的 研 究 体内 角质 形 成细 胞基 因 修改 的可 能 性。方 法 通 过 RNA -DNA 寡核 苷 酸(RD O )或单 链 D NA 寡核 苷酸 (ssOD N )局部 皮 肤注 射的 方 法,诱导 毛囊 角 蛋白 17(K17)(R 94P)显 性突 变 。注 射的K 17A-RDO 或 K 17A -ssOD N 含 有一 个 单碱 基错 配 (CGC 到 CCC),从 而 引起 该氨 基 酸的 替换 。注射 的 混合物由 上 述寡 核苷 酸 和阳 离子 脂 质体 组成 。分 别于 小 鼠出 生后 第 2 天 和第 5 天进 行皮 内 注射 。第 8 天 取皮肤活 检 。结 果 组织 学检 查 发 现 注射 K 17A -RDO 的 7 只 小鼠 中 有 5 只和 注 射 K17A-ssODN 的 5 只小 鼠全部 有 毛发 生长 明 显异 常。 其 主要 表现 为 毛囊 内毛 干 在 皮脂 腺 水 平 扭曲 盘 绕 或 断裂 ,个别 毛 囊 毛 球部 碎裂 ,黑 素 颗 粒 滴落 到 周 围 真皮 中 , 有 些切 片 中 还 可见 表 皮 囊 肿。 注 射 部 位生 长 期Ⅳ ～Ⅵ期 毛 囊 数 减 少50% 。 阴 性 对 照 组 均 未 显 示 明 显 毛 发 生 长 异 常 。 从 组 织 切 片 上 分 离 异 常 毛 囊 并 提 取 DN A ,PCR 扩 增 后D NA 测 序 和非 限制 性 内切 酶酶 切 证实 ,K17 基因 由 正常 的 CGC 变成 了 CCC。结 论 局 部 注射 K17A-R DO或 K 17A -ssOD N 可 以导
- 范卫新Kyonggeun Yoon
- 关键词：小鼠基因治疗先天性厚甲
- 何首乌、女贞子等中药煎剂对体外培养的猪毛囊毛发生长的影响被引量：37
- 2005年
- 目的探讨何首乌、女贞子等中药混合煎剂对体外培养的猪毛囊毛发生长的影响。方法将离体培养的猪毛囊分为对照组(Williams E培养基)和中药组(Williams E培养基+中药煎剂),显微镜下观察各组毛囊毛发生长和毛球部形态变化,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测各组毛囊中的凋亡细胞。结果培养第7天,对照组毛囊毛发生长长度低于中药组(P<0.001);对照组毛囊TUNEL阳性细胞数明显高于中药组(P<0.001);毛球形态观察,对照组毛囊出现退行性变化,而中药组毛囊仍维持生长期毛囊形态。结论何首乌、女贞子等中药煎剂能在一定程度上抑制猪毛囊细胞内凋亡,延缓生长期毛囊进入退行期。
- 张兴洪范卫新
- 关键词：毛发生长中药煎剂药组女贞子何首乌体外培养
- 苯甲酸雌二醇及UVA辐照对体外培养的人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响被引量：6
- 2006年
- 目的探讨苯甲酸雌二醇对体外培养的人成纤维细胞增殖、胶原合成及其对UVA抑制胶原合成的影响。方法在培养的人成纤维细胞中分别加入不同剂量的苯甲酸雌二醇,继续培养48 h,用MTT法测定细胞的增殖情况,同时应用RT-PCR方法检测经不同剂量苯甲酸雌二醇及10 J／cm^2 UVA处理后人成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达情况。结果MTT法检测结果显示,苯甲酸雌二醇对体外培养的成纤维细胞增殖无明显促进作用。RT-PCR结果提示,苯甲酸雌二醇处理组两型前胶原的表达水平明显上调(P＜0．05),而UVA照射后两型前胶原的表达显著下降,苯甲酸雌二醇可在一定水平对抗其作用(P＜0．05)。结论苯甲酸雌二醇对体外培养的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原的合成有一定的促进作用,并可对抗紫外线抑制胶原合成的作用。
- 李晓凤范卫新张卉
- 关键词：雌二醇成纤维细胞
- 拉坦前列素对体外培养的猪毛囊生长的影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨拉坦前列素对体外培养的猪毛囊生物学特性的影响。方法采用猪毛囊体外培养模型,记录体外培养的猪毛囊生长速度和毛球部形态学改变,评价拉坦前列素对毛发生长的作用。结果与阴性对照组比较,拉坦前列素质量浓度达到0．8ng/mL时即能使培养的猪毛囊生长速度加快(P＜0．05),并持续生长达8 d,且毛囊毛球部仍然呈现生长期样形态,而对照组则表现为退行期／休止期样外观。结论拉坦前列素对体外培养的猪毛囊生长具有明显的促进作用。能够延长毛囊的生长期。
- 张卉李晓凤范卫新
- 关键词：毛囊组织培养技术拉坦前列素米诺地尔生长调节素类
- 中药黄芪、女贞子、人参促毛发生长的在体研究被引量：25
- 2003年
- 目的:以C57BL/6小鼠为动物模型,探讨中药黄芪、女贞子、人参混合煎剂促进C57BL/6小鼠毛发生长的可能机制。方法:中药组小鼠给予中药混合煎剂口饲,对照组给予等量生理盐水,观察小鼠背部皮肤颜色变化和毛发生长情况。同时在光镜下观察小鼠毛囊组织学变化及毛囊内细胞的凋亡的状况。结果:中药组小鼠饲饮中药煎剂后背部皮肤颜色由粉红色变为黑色比对照组提前了1d,背部皮肤颜色由黑色变为灰黑色比对照组延长了1.5d。组织学上,拔毛后第18天对照组小鼠毛囊处于退行中晚期,而中药组仍为生长Ⅵ期和退行早期毛囊。中药组小鼠毛囊内凋亡细胞数量比对照组减少(P<0.001)。结论:黄芪、女贞子、人参混合煎剂促毛发生长作用可能与抑制退行期毛囊内细胞凋亡,诱导和延长C57BL小鼠毛发的生长期有关。
- 赵玉磊范卫新
- 关键词：女贞子人参毛发生长C57BL/6小鼠
- 血管内皮细胞生长因子真核表达载体在HaCaT细胞中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的探讨外源性人VEGF165基因在HaCaT细胞中表达的可行性及其对体外培养的猪毛囊的影响。方法通过脂质体将与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因共表达的血管内皮细胞生长因子(VEGF)真核表达载体PIRES2-EGFP-VEGF165瞬时转染HaCaT细胞,应用激光共聚焦显微镜观察EGFP 在HaCaT细胞内的表达,同时利用ELISA法检测VEGF在培养细胞被转染的上清液中的表达。进一步将该上清液加至体外培养的猪毛囊中,显微镜下测量毛囊的平均生长长度,并观察毛囊的形态学变化。结果成功地将VEGF真核表达载体PIRES2-EGFP-VEGF165瞬时转染了HaCaT细胞,以激光共聚焦显微镜观察可见细胞内EGFP的表达,同时用ELISA法证实了上清液中VEGF呈高水平表达,并且该上清液可以明显促进体外培养的猪毛囊生长,延缓其进入退行期。结论应用脂质体能够成功地将外源性人VEGF165基因转染HaCaT细胞,并进行有效表达,其表达的VEGF在体外具有促进猪毛囊生长的生物学话性。
- 周乃慧范卫新
- 关键词：血管内皮细胞真核表达HACA毛囊
