国家自然科学基金(30271395)
- 作品数：7 被引量：8H指数：3
- 相关作者：彭绍民张中宇丛丽丹孙大卫宁静更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院北京大学哈尔滨医科大学更多>>
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- 活体染料标记原代IPEC眼内移植的研究
- 2007年
- 目的探讨应用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记原代的兔自体虹膜色素上皮细胞(iris pig-ment epithelial cell,IPEC),并移植于视网膜神经上皮层下的可行性。方法取原代兔眼自体虹膜色素上皮细胞消化分离,经CFDA-SE染色后移植到视网膜神经上皮层下。术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜(SLO)、光学相干断层扫描(OCT)进行活体观察,不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化,用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价。结果自体移植术后观察显示移植区界限清晰;SLO可观察到移植区内荧光分布;OCT和HE染色均显示移植区神经上皮层下有移植物堆积,并随时间推移逐渐变平。免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点,有规律地间断分布在Bruch膜上,IPEC嵌插在原始的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPEC)间,且形成完整的单层。结论CFDA-SE作为活体染料标记自体IPEC进行移植时,是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,可作为理想的标记物应用。
- 孙大卫鲍延丽焦万秋彭绍民
- 关键词：虹膜色素上皮细胞细胞移植原代细胞
- 活体染料羧基荧光素乙酰乙酸对兔眼虹膜色素上皮细胞体外染色的研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记兔眼虹膜色素上皮（IPE）细胞的可行性。方法使用酶消化加机械分离的方法分离培养兔眼IPE细胞，将传3～4代的IPE细胞用2．5、5、10、20、40μmol／L浓度的CFSE分别作用1、5、10min进行染色，通过观察染色后的细胞荧光强度和细胞贴壁率筛选出最理想的标记条件。采用流式细胞术追踪检测标记的IPE细胞的荧光强度变化。用免疫荧光抗体标记法检测此染色剂有无渗漏以及是否对周围细胞着染。结果浓度为20μmol／L的CFSE 37℃下水浴作用1min为IPE细胞染色、观测、研究的最适条件。流式细胞仪和荧光显微镜观察结果显示，CFSE对IPE细胞染色可持续4周以上，未发生染料渗漏或转染其它细胞，且此浓度的CFSE不影响细胞的性状。结论活体染料CFSE是一种染色率高，追踪时间长，应用简便安全可靠的标记兔IPE细胞的新方法。
- 彭绍民张中宇黎晓新丛丽丹
- 关键词：荧光染料虹膜
- 活体染料羧基荧光素乙酰乙酸标记视网膜色素上皮细胞的体外研究被引量：3
- 2006年
- 彭绍民丛丽丹张中宇黎晓新
- 关键词：视网膜色素上皮细胞体外研究淋巴细胞增殖移植细胞继发性改变视力丧失
- 视网膜色素上皮细胞移植中CFDA-SE及免疫组化研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨新型染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-(and-6)-carboxyfluresceindiacetate,succinimidylester,CFDA-SE]与免疫组化方法相结合在视网膜色素上皮细胞(retinalpig-mentepithelialcells,RPECs)移植中应用的可行性。方法用CFDA-SE(10μmol·L-1)标记供体RPECs,37℃下孵育1min,通过玻璃体视网膜显微手术将细胞悬液植入同种异体青紫蓝兔视网膜下腔,分别在30d和60d时处死实验兔,荧光显微镜下观察标记的供体细胞,同时作紧密连接的结构蛋白ZO-1和细胞骨架蛋白Actin的免疫组化分析。结果荧光显微镜下观察到标记的供体RPECs可嵌插于宿主RPECs之间,铺成单层结构,并形成新的细胞间紧密连接,ZO-1、Actin的免疫组化结果经统计分析表明与原位RPECs之间的表达无显著差异(ZO-1:︱t︱=2.05,P<0.05;Actin:︱t︱=2·14,P<0.05)。结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,可作为理想的标记物应用于RPECs移植中。
- 刘春艳孙大卫宁静彭绍民
- 关键词：视网膜色素上皮细胞免疫组化
- CFDA-SE标记虹膜色素上皮细胞的自体移植被引量：3
- 2007年
- 目的探讨兔眼自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelial cells,IPECs)羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记后,采用单通道内路移植方法将传代的IPECs移植于视网膜神经上皮层下的可行性。方法取兔眼自体虹膜细胞分离培养并传代,于第3代经CFDA-SE染色后移植到自体视网膜神经上皮层下。术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜、光学相干断层扫描进行活体观察,不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化,用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价。实验数据采用两均数的等效检验,以0.5倍标准差作为等效界值观察移植前后ZO-1和Actin表达情况。结果移植术后观察显示移植区界限清晰;激光扫描检眼镜可观察到移植区内荧光;光学相干断层扫描和HE染色均显示移植区神经上皮层下有色素上皮细胞堆积,并随时间推移堆积逐渐变平。经免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点,有规律的间断分布在Bruch膜上,IPECs嵌插在原始的RPECs间,且形成完整的单层。结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,在IPECs移植中可作为理想的标记物应用;我们首次使用的单通道内路移植方法具有手术快捷简单、安全、并发症少等优点。
- 孙大卫丛丽丹彭绍民宁静鲍延丽张中宇
- 关键词：虹膜色素上皮上皮细胞细胞移植
- 体外培养的成年兔眼色素上皮细胞屏障功能的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究体外培养的成年兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的血-视网膜外屏障功能。方法对成年兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组织化学通过MNF116和S-100鉴定细胞纯度。将细胞接种于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上,分别于培养过程中不同时间点进行跨膜电阻测定,待电阻达到平台期后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况。结果成功原代培养了兔眼RPE细胞并且无其他细胞污染。接种于Transwell后,RPE细胞TER值3周达到最高值约88.14Ω·cm2,维持1周并开始下降。透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接。ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成。结论成年兔眼RPE细胞通过培养于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上可以成功建立细胞屏障功能模型。
- 丛丽丹孙大卫焦万秋张中宇彭绍民
- 关键词：视网膜色素上皮细胞培养血-视网膜屏障
- 一种体外培养兔眼色素上皮细胞的新方法
- 2009年
- 目的建立一种体外培养的兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的新方法。方法采用Dispase对兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组化通过MNF116和s-100鉴定细胞纯度。将细胞接种于铺有laminin的Transwell滤膜上,观察到细胞融合后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况。结果成功培养了原代兔眼RPE细胞并且无其它细胞污染。透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接。ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成。结论兔眼RPE细胞能够用Dispase成功分离并培养。
- 代丽丽丛丽丹孙大卫焦万秋张中宇彭绍民
- 关键词：视网膜色素上皮细胞培养
