海南省自然科学基金(812202)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 细胞增殖抑制基因对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖与凋亡的影响
- 2014年
- 目的 观察细胞增殖抑制基因（HSG）对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖与凋亡的影响.方法 制备携带HSG基因的重组腺病毒载体,瞬时转染至大鼠肝星状细胞HSC-T6,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测细胞中HSG信使核糖核酸（mRNA）及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析HSG对细胞周期和凋亡状态的影响,Western blot检测HSG对细胞周期蛋白激酶抑制剂p21、p27及细胞增殖核抗原（PCNA）的作用.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染组HSG的mRNA（14.93 ±1.10比1.03±0.33,14.93±1.10比1.00 ±0.15）和蛋白表达量明显增加（P＜0.05）;转染后细胞生长减缓,细胞增殖活性明显受到抑制（P＜0.05）;转染组G0/G1期细胞比例和凋亡率分别为[（66.57±1.29）％、（23.88 ±0.96）％],与空白对照组[（49.32±2.86）％、（3.38±0.16）％]和阴性对照组[（52.46±3.17）％、（3.54±0.24）％]比较明显增高（P＜0.05）;转染后细胞周期调控蛋白p21、p27表达升高,PCNA表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 HSG基因过表达可有效的抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6的增殖,使其阻滞于G0/G1期并诱导其凋亡,并可能是通过参与细胞周期的调节发挥作用.
- 吴潇林泽宇陈治平翁杰杨青壮万云乐陈涛贾长库
- 关键词：肝纤维化瞬时转染细胞周期细胞凋亡
- 大鼠线粒体融合蛋白基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的 构建并鉴定携带大鼠线粒体融合蛋白（rMfn2）基因的重组腺病毒AdS-mCMV-增强绿色荧光蛋白（EGFP）-CMV-rMfn2表达载体.方法 设计含有Not Ⅰ和HindⅢ酶切位点的引物,应用聚合酶链反应（PCR）法扩增目的基因rMfn2,将扩增产物连接到穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-CMV-rMfn2.测序鉴定重组穿梭质粒后,与腺病毒骨架质粒pAd5在JM109感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒AD-rMfn2,而后感染HEK293细胞进行包装、扩增、纯化,并测定病毒滴度;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测目的基因rMfn2在HEK293细胞中的转录及表达.结果 腺病毒穿梭质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,目的基因rMfn2正确克隆至腺病毒骨架质粒中;在HEK293细胞中包装、扩增获得了高滴度的重组腺病毒AD-rMfn2,其滴度为4×1013 TU/L;AD-rMfn2感染HEK293细胞48 h后,可检测到目的基因rMfn2的转录和蛋白表达.结论 成功构建重组腺病毒AD-rMfn2.
- 李文滨林泽宇陈亚进龙天柱万云乐贾长库
- 关键词：重组腺病毒
