广东省中国科学院全面战略合作项目(2011B090300078)
- 作品数：9 被引量：46H指数：6
- 相关作者：高晓霞章卫民王磊吴宏清白玲更多>>
- 相关机构：广东药学院广东省微生物研究所江西农业大学更多>>
- 发文基金：广东省中国科学院全面战略合作项目国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 镰刀菌诱导白木香结香部位总RNA提取方法的研究被引量：2
- 2015年
- 目的白木香树在自然条件下不产生树脂,以自然、微生物或人工方式可使之形成沉香树脂。＂小孔滴注法＂接种镰刀菌人工诱导白木香结香,8个月后野外采集白木香结香部位（分泌黑色树脂的树干组织）,提取其总RNA,为阐明沉香特征产物的代谢途径、揭示人工诱导白木香结香的分子机制奠定基础。方法 ＂小孔滴注法＂人工造香,手工割取白木香结香部位。分别采用CTAB-Li Cl法、Trizol试剂法、RN09试剂盒法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和Qiagen试剂盒法提取总RNA并检测完整性。结果与其它四种提取方法相比,Qiagen试剂盒法提取的RNA条带清晰,OD260/OD280比值在1.8-2.0的范围内。结论 Qiagen试剂盒法适用于镰刀菌人工诱导白木香结香部位总RNA提取,对其它次生代谢物质含量较高的植物中提取总RNA具有一定的借鉴意义。
- 陈晓东周伟平刘少烽陈晓颖钟兆健章卫民高晓霞
- 关键词：白木香RNA提取
- 药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究被引量：6
- 2013年
- 目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重。为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究。方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiCl法、去温浴的改良CTAB-LiCl法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取。结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5 h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的最佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的最佳提取方法。结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S∶18S为1.2～1.4,RIN值为6.8～7.5,并应用于转录组测序。
- 吴宏清王磊郭维高晓霞白玲章卫民
- 关键词：白木香总RNA提取
- 化学诱导后白木香转录组文库的构建与测序被引量：11
- 2013年
- 采用改良异硫氰酸胍-CTAB法对5年生白木香树干经化学诱导后1年的各部分组织进行总RNA提取,提取到的总RNA经富集mRNA、打断、构建测序用cDNA文库后用于转录组测序,测序质量较高,Q20高达97.45%,共获得54 685 634条Clean reads,总测序长度达4 921 707 060 nt,经初步组装,获得190 109条Contigs序列,进一步组装,获得83 467条Unigenes序列,总长度为58 569 625 nt,平均长度为702 nt,N50值高达1 120,大于等于3 000 nt的Unigenes有1 691条,占总Unigenes的2.03%,组装质量较高,使白木香的转录组信息得到较好的保存,为进行白木香结香相关的表达谱分析奠定基础。
- 吴宏清王磊陶美华高晓霞白玲章卫民
- 关键词：白木香化学诱导测序
- 白木香果皮提取物清除DPPH自由基能力及抑制酪氨酸酶活性的研究被引量：2
- 2014年
- 目的:研究白木香果皮不同溶剂提取物清除DPPH自由基的能力及对酪氨酸酶活性的抑制作用,为白木香果皮的应用和开发提供理论依据。方法:以水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚5种极性不同的溶剂,采用回流、超声、冷浸方法提取白木香果皮,采用DPPH法和L-DOPA法分别测定提取物对DPPH自由基的清除能力和酪氨酸酶活性的抑制作用。结果:极性较大的水、乙醇提取物对DPPH自由基均有显著的清除能力,其IC50值分别为26.9、19.9μg/ml;而极性中等的丙酮、乙酸乙酯提取物则对酪氨酸酶活性具有较为明显的抑制作用,其IC50值分别为93.2、122.9μg/ml。结论:白木香果皮提取物具有开发天然有效的自由基清除剂和酪氨酸酶抑制剂的潜力。
- 李浩华章卫民陈玉婵高晓霞严寒静
- 关键词：提取物酪氨酸酶
- 白木香果皮化学成分及其生物活性研究被引量：4
- 2013年
- 目的研究白木香Aquilaria sinensis果皮的化学成分及其细胞毒性与抗菌活性。方法采用正、反相硅胶柱、凝胶柱和薄层制备等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过波谱分析进行结构鉴定;以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460、肝癌细胞HepG-2为供试细胞株,采用SRB染色法对化合物进行体外细胞毒活性研究;以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌株,采用刃天青染色法对化合物进行体外抗菌活性研究。结果从白木香果皮中分离到10个化合物,经波谱数据分析分别鉴定为isorhamnetin 3-O-(6″-O-(Z)-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside(1)、buddlenoid A(2)、7-甲氧基-4′-羟基异黄酮(3)、木犀草素(4)、反式对香豆酸乙酯(5)、木香烃内酯(6)、表木栓醇(7)、豆甾醇(8)、对羟基苯甲酸甲酯(9)、邻苯二酚(10)。结论化合物1～3、5、6、9、10为首次从该植物中分离得到,化合物1～3、5、6为首次从沉香属植物中分离得到;其中化合物6对上述4种肿瘤细胞株表现出较好的抑制作用,化合物1、4对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抗菌活性。
- 张兴陶美华陈玉婵高晓霞谭毓治章卫民
- 关键词：白木香木香烃内酯细胞毒活性抗菌活性
- 白木香倍半萜合成酶基因As-SesTPS的克隆及生物信息学与表达分析被引量：13
- 2014年
- 目的从白木香Aquilaria sinensis总RNA中克隆倍半萜合成酶基因,并对其进行生物信息学及表达分析。方法对白木香总RNA进行反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得完整的开放阅读框(ORF)。运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析。通过半定量PCR检测该基因在白木香树干中不同部位的表达情况。结果获得As-SesTPS基因,ORF长1 629 bp,编码542个氨基酸,与葡萄Vitis vinifera的大根香叶烯-D合成酶[(-)-germacrene D synthas]相似性最高,且包含RRx8W和DDxxD的保守序列。As-SesTPS蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中,且仅在白木香结香部位表达。结论首次从白木香中克隆得到可能编码大根香叶烯-D合成酶的基因,为白木香倍半萜生物合成代谢途径的研究提供参考。
- 吴宏清王磊何欣白玲高晓霞严寒静章卫民
- 关键词：白木香基因克隆生物信息学基因表达分析
- Botryosphaeria rhodinaA13对离体白木香形成沉香组分的作用研究被引量：6
- 2012年
- 采用GC-MS对白木香内生真菌菌株Botryosphaeria rhodina A13接种于离体白木香树枝后产生的化学成分进行分析,寻找沉香组分从而建立一种离体实验方法。将菌株B.rhodina A13接种于已表面消毒的离体白木香枝条中,将接种后的枝条放入已灭菌的、垫有湿润滤纸的培养皿中,在黑暗、27℃环境中放置20 d,长满菌丝的白木香枝条用溶剂浸提处理后进行GC-MS分析。结果表明,实验组(菌株A13+树枝)、沉香对照组能检测到萜类化合物,两者都含有大根香叶烷类倍半萜5,9-二甲基-2-(1-甲基亚乙基)-环癸醇,而树枝对照组和菌株A13对照组中未能检测到沉香组成成分。内生真菌B.rhodina A13能诱导离体白木香树枝产生沉香倍半萜组分5,9-二甲基-2-(1-甲基亚乙基)-环癸醇,本研究建立了一种离体实验方法,能用于真菌诱导白木香形成沉香组分的研究。
- 陶美华王磊高晓霞章卫民
- 关键词：BOTRYOSPHAERIA
- 白木香倍半萜合成酶As-SesTPS1基因的克隆、生物信息学和表达分析被引量：8
- 2015年
- 目的基于前期对白木香Aquilaria sinensis转录组测序结果,从白木香总RNA中克隆白木香倍半萜合成酶基因(As-Ses TPS1),并对其进行生物信息学及表达分析。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从白木香总RNA中获得倍半萜合成酶基因As-Ses TPS1的c DNA全长序列;利用生物信息学手段对该序列进行相似性和同源性分析,并预测其编码蛋白的结构和功能;利用q RT-PCR技术检测该基因在白木香不同样品中的表达水平。结果得到倍半萜合成酶基因As-Ses TPS1,开放阅读框(ORF)全长1 671 bp,编码556个氨基酸,其与多条倍半萜合成酶基因具有较高相似性,并含有RRx8W和DDxx D的保守序列;该基因在白木香的沉香样品中高表达。结论 As-Ses TPS1的克隆及其生物信息学和在白木香不同部位表达差异性分析,为白木香倍半萜生物合成代谢途径的研究奠定基础。
- 何欣叶伟高晓霞王磊章卫民
- 关键词：白木香克隆生物信息学
- 镰刀菌诱导结香对白木香叶内生真菌分布和群落构成的影响研究被引量：6
- 2014年
- 为了研究沉香形成前后白木香叶组织中内生真菌的分布和群落构成,采用石蜡永久制片法观察白木香叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布。通过改良的CTAB法对白木香进行总DNA提取,利用真核生物通用引物同时对植物和内生真菌rDNA ITS序列进行PCR扩增,构建内生真菌rDNA ITS文库,RFLP分析和序列测定,用PUAP软件进行系统发育分析,构建最大简约树。结果表明:镰刀菌诱导结香前后,白木香内生真菌菌丝主要分布于海绵组织和韧皮部,结香后韧皮部内生真菌菌丝相对丰度明显增大;茎点霉是未结香白木香叶内生真菌优势种群,刺盘孢菌是已结香白木香叶内生真菌优势种群;刺盘孢菌是未结香和已结香白木香唯一共有内生真菌,且丰度差异较大。不依赖分离培养的分子生物学方法可快速直观地用于植物组织内生真菌的鉴定。白木香叶内生真菌具有一定的遗传多样性,沉香形成前后白木香内生真菌群落构成差异较大。
- 高晓霞周伟平王磊章卫民严寒静
- 关键词：白木香RDNA
