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应用nanoLC／MS／MS对人羊水的蛋白质组学分析被引量：2: 2008年; 建立应用nano LC/MS/MS技术寻找羊水特异性表达蛋白质的蛋白质组学方法.羊膜穿刺获取两份正常妊娠晚期的羊水,通过Cibacron blue和Protein A吸附去除血清白蛋白和IgGs,样品经变性、还原和烷基化后酶解,nano LC/MS/MS分析,鉴定了62种蛋白质.通过与已有的羊水和血浆蛋白质表达数据库比对,从中新发现22种只在羊水中表达的蛋白质,其中4种已知是子宫或妊娠特异的.本研究建立了nano LC/MS/MS对羊水进行蛋白组学分析的方法并发现了一些可能的羊水特异表达蛋白.; 季煜华曾耀英周坚何贤辉邢飞跃肇静娴朱斌; 关键词：羊水蛋白质组学

活化大鼠肝星状细胞的蛋白质表达谱被引量：1: 2009年; 目的用在线二维纳升高效液相结合串联质谱（2D nanoLC—MS／MS）技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞（HSC）的蛋白质表达谱。方法分离培养大鼠原代HSC，取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质，通过2D nanoLC—MS／MS对酶解所获肽段进行分离和鉴定，并对鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果从50μg HSC总蛋白质中鉴定出1014种蛋白质，相对分子质量范围为7832～588364；主要分布于细胞核、细胞骨架、线粒体、内质网，分别占25％、17％、13％、13％。蛋白质功能主要与核酸代谢、细胞器组装、信号传导、能量代谢等生理进程有关，分别占17％、14％、10％、9％；其中细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和结蛋白是活化大鼠HSC特异性表达的蛋白质。结论本研究获得了目前较为全面的活化大鼠原代HSC的蛋白喷表达谱，为深入研究HSC的活化机制奠定了基础。; 季菊玲张锦生王雪晴季煜华; 关键词：肝星状细胞蛋白质组

激光对细胞内反应氧、钙离子浓度及细胞膜完整性的影响被引量：3: 2007年; 目的探讨在激光扫描共焦显微镜(LSCM)观测活细胞的过程中,激光对细胞内反应氧(ROS)、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞膜完整性的影响。方法用H2DCFDA、Fluo-4AM和Calcein-AM/PI分别检测488nm激光对脐静脉内皮细胞株(ECV-304)细胞内ROS、[Ca2+]i和细胞膜完整性的影响,Ultra view LCI(live cell image)共聚焦成像系统采集并分析结果。结果激光照射后细胞内DCF的荧光强度迅速上升,约80s达到峰值,随后下降并逐渐回到基础水平;Fluo-4的荧光强度在70min内持续平缓地上升;Calcein的荧光强度明显下降,少量细胞PI阳性染色。结论488nm激光照射可引起细胞内ROS和[Ca2+]i的增加,但对细胞膜的完整性没有显著影响。; 季煜华曾耀英钱中清; 关键词：激光细胞内钙离子浓度细胞活性脐静脉内皮细胞株

PDBu对大鼠生长板软骨细胞增殖和分化的影响: 2007年; 目的探讨蛋白激酶C(PKC)对生长板软骨细胞增殖、细胞外基质合成和转录因子SOX9表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGC),分别采用倒置显微镜、同位素掺入、RT-PCR和Western blot方法检测1、10和100nmol/L的PKC激动剂PDBu对第一代无血清培养RGC的细胞形态、增殖、胶原和蛋白多糖的合成及COL2A1和AGGRECAN的转录及转录因子SOX9表达的影响。结果100nmol/LPDBu的处理,使无血清培养RGC的细胞形态接近于血清组(10%FBS);抑制增殖并促进胶原和蛋白多糖的合成,3H-TdR、3H-proline和35S-sulfate掺入量分别是无血清对照组的83%、152.6%和146.5%(P<0.05);促进COL2A1和AGGRECAN的转录和SOX9的表达。结论PKC的活化抑制了生长板软骨细胞增殖,促进其分化。; 季煜华曾耀英季秋虹; 关键词：蛋白激酶C 生长板软骨细胞分化 SOX9

nanoLC-ESI/MS/MS在ECV304细胞蛋白质组学研究中的应用被引量：2: 2009年; 目的:应用纳升液联用技术(nanoLC-ESI/MS/MS)对ECV304细胞蛋白质组学进行初步分析。方法:提取ECV304细胞总蛋白,经变性、还原、烷基化和酶解,nanoLC-ESI/MS/MS对酶解后的肽段进行分析,数据库(Swissprot)检索鉴定蛋白质,生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果:从8μg细胞总蛋白中鉴定了120种蛋白质,所鉴定蛋白质的分子质量(MW)范围从6 648 D至280 739 D,MW<20 kD的蛋白质占24.2%,MW>100 kD的蛋白质占5.0%;主要位于细胞质、细胞骨架、细胞核和细胞膜,分别为27.8%、19.0%、15.2%和10.1%;大多为结构蛋白质和催化活性的蛋白质,分别为36.4%和34.1%,具有信号转导活性的占11.4%;其中角蛋白8、18和vimentin等为内皮细胞特异表达的蛋白质。结论:本研究建立了nanoLC-ESI/MS/MS分析ECV304细胞的蛋白质组学方法,为内皮细胞及内皮细胞损伤机制的蛋白质组学研究奠定了实验基础。; 李菊玲曾耀英季煜华杜彬; 关键词：ECV304细胞蛋白质组

α-SMA的表达与软骨细胞的去分化被引量：2: 2007年; 目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原的表达.结果:随着传代次数的增加,前3代RGCs的每日倍增指数逐渐增加,随后不断下降.原代RGCs的阿尔新兰和Ⅱ型胶原染色均呈强阳性,仅个别细胞α-SMA弱阳性染色.随着传代次数的增加,阿尔新兰和Ⅱ型胶原阳性染色的细胞比例迅速下降,第3代以后的RGCs阿尔新兰染色均为阴性,第5代RGCs也仅有圆形细胞仍保持了Ⅱ型胶原阳性染色,而α-SMA阳性染色细胞的比例则不断增加.蛋白质印迹所揭示的Ⅱ型胶原和α-SMA蛋白表达的变化趋势与免疫细胞化学染色的结果一致.结论:α-SMA从无到有并随着RGCs去分化程度的增强而增加的表达模式,提示它是引起软骨细胞“去分化”的重要原因.; 季煜华曾耀英肇静娴; 关键词：生长板软骨细胞去分化 Α-平滑肌肌动蛋白

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国家自然科学基金(30600587)