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3-磷酸甘油酸脱氢酶及其抗体对自身免疫性肝炎的诊断意义被引量：3: 2009年; 目的克隆D-3-磷酸甘油酸脱氢酶（Phgdh）的cDNA，构建重组表达质粒，纯化重组蛋白，初步探讨Phgdh抗体在自身免疫性肝炎诊断中的意义。方法血清蛋白质组学方法鉴定差异蛋白，构建重组表达载体，在大肠杆菌中表达，融合蛋白经NiNTA树脂柱亲和层析纯化，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot法进行免疫鉴定；应用表达蛋白建立间接酶联免疫吸附法，检测60名健康体检者、65例自身免疫性肝炎（AIH）、122例原发性胆汁性肝硬化、56例慢性乙型肝炎、117例慢性丙型肝炎患者血清中抗Phgdh抗体。组间率的比较用χ^2检验。结果经重组质粒测序和酶切鉴定结果证实，Phgdh目的基因已正确插入原核表达载体中，基因序列正确，符合表达框架。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达产物在相对分子质量约6．0×10^4附近有一明显的蛋白表达带，Westernblot分析结果显示重组蛋白具有Phgdh抗原反应性。酶联免疫吸附法检测血清标本结果显示，AIH、原发性胆汁性肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及正常人抗Phgdh抗体阳性检出率分别为66．15％、21．42％、12．50％、6．83％和3．30％。AIH组Phgdh自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较，差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论本研究成功克隆了Phgdh的cDNA，并将其在大肠杆菌中成功表达。该抗体主要在AIH患者中检出，此抗体的检测有助于提高AIH的临床诊断水平。; 向代军闫惠平夏晴卢锋冯霞赵艳刘妍杨建轩; 关键词：蛋白质组自身抗体自身抗原

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国家自然科学基金(30600559)

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