浙江省自然科学基金(Y3080158)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
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- 相关机构：浙江省农业科学院山东农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小为699 bp的目的片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果与GenBank中的DHV-Ⅰ的相应基因序列比对分析,同源性均达90%以上,表明为DHV-Ⅰ的基因序列,对NDV,IBDV,DPV和GPV等常见病毒扩增结果为阴性。该方法敏感性检测结果表明,最低RNA模板检出量为24 pg。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于I型鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。
- 邵泽香韦强鲍国连崔言顺刘燕季权安
- 关键词：RT-PCR
- 鸭肝炎病毒浙江分离株全基因组测序及其VP1基因的序列分析被引量：6
- 2010年
- 利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术及RACE方法扩增得到鸭肝炎病毒（DHV）浙江分离株Z10的全基因（5′,3′末端序列用RACE法扩增）及4株DHV分离株的VP1基因。结果表明,分离株Z10的全基因片段长7 689 bp,有1个大的开放读码框（ORF）,ORF位于626~7 326位核苷酸,编码2 249个氨基酸。Z10分离株全基因序列与GenBank登录的6株具有代表性的DHV核苷酸序列比对,同源性94.5%~98.4%;所测得的DHV分离株的VP1基因的序列与目前GenBank上发表的具有代表性的DHV-ⅠVP1基因进行比对分析,结果4株Ⅰ型DHV的VP1基因cDNA长度均为714 bp,编码238个氨基酸。4株DHV-Ⅰ之间VP1基因的核苷酸序列同源性为93%~99.7%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;与参考毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为92.2%~100%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;表明各分离毒株的亲缘关系较近,属于同一基因群。
- 邵泽香韦强鲍国连崔言顺刘燕王春平季权安李建亮
- 关键词：VP1基因RT-PCR
- Race法扩增4株鸭肝炎病毒3′末端序列及其克隆分析被引量：3
- 2009年
- 利用3’RACE方法扩增并克隆了4株鸭肝炎病毒（DHV）（ZYM株、Z05株、Z07株和Z10株）的基因组的3’末端真实序列，包括部分非结构蛋白（3D）基因以及紧接着3D基因下游的3’端非编码区（untranslated region，UTR）和poly（A）尾巴。测序结果表明，扩增的特异性片段长度为597nt（不包括polyA尾巴）。各毒株3’UTR均为315nt，位于终止密码子TGA之后，比对分析结果表明各毒株间的同源性较高；4株DHV 3’末端核苷酸序列（不包括polyA尾巴）之间的同源性为96．3％～100％，而与参考毒株之间的同源性为93．5％～99．7％。在系统发生进化树上，各毒株亲缘关系较近。
- 邵泽香韦强崔言顺鲍国连刘燕季权安
- 关键词：鸭病毒性肝炎病毒POLY(A)
- Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的原核表达及其抗原性被引量：2
- 2011年
- 参考GenBank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)全基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增了DHV-ⅠVP3基因,将VP3基因与pET-28a(+)表达载体连接后,转化宿主BL21(DE3),用0.1 mmol·L-1的IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。电泳结果表明,VP3在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为27 kD。免疫印迹试验表明Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。
- 刘燕庞安娜韦强鲍国连季权安肖琛闻
- 关键词：VP3基因克隆表达
