广东省自然科学基金(963011)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：宁云山周明乾王小宁李妍周宏伟更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学华南理工大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人血小板生成素基因cDNA和基因组DNA的克隆和序列测定被引量：2
- 2001年
- 目的研究内含子和5＇非翻译区对血小板生成素(TPO)基因表达的影响.方法以中国人胎肝mRNA为模板,应用RT-PCR和长距离PCR(LD-PCR)技术扩增了约1.1kb的全长人TPO cDNA.6.2 kb的TPO基因组DNA和TPO基因组中的内含子I,内含子Ⅱ～Ⅳ和内含子Ⅴ.结果全序列分析表明,全部的编码序列、所有的内含子/外显子剪切部位序列同已知一致,个别差异发生在内含子中.结论通过PCR扩增技术,成功地从中国人胎肝组织中克隆了全长人TPO cDNA、TPO基因组DNA及其全部的内含子.
- 宁云山周宏伟周明乾陈泽洪方向东富宁王小宁
- 关键词：血小板生成素基因组DNA内含子克隆
- 大鼠WAP启动子指导人TPO在真核细胞中瞬时表达
- 2014年
- 目的构建以大鼠WAP启动子调控的人血小板生成素(TPO)真核表达质粒并进行瞬时表达,探讨TPO基因组中不同内含子对TPO表达影响。方法通过基因工程方法构建以大鼠WAP启动子调控的6种TPO真核表达质粒,并通过酶切和测序进行鉴定,将上述重组质粒分别在HC-11和COS-1细胞上转染48 h后,通过双抗体夹心ELISA定量分析转染上清中TPO表达。结果酶切及测序分析表明构建与设计相符,6种重组质粒在COS-1细胞和HC-11细胞中均获得表达,其表达水平从高到低依次为pTPOWE>pTPOWA>pTPOWD>pTPOWB>pTPOWC>pTPOWF,其中含有TPO IntronⅤ的重组质粒pTPOWE表达量最高,而含有TPO全基因组的重组质粒pTPOWF表达量最低。结论 IntronⅤ可能含有特殊增强TPO表达序列,而TPO基因组中可能存在抑制TPO高水平表达结构元件。
- 李妍陈艳周明乾周宏伟宁云山
- 关键词：血小板生成素内含子基因表达
- 内含子和5'非翻译区对人血小板生成素基因表达的影响被引量：3
- 2004年
- 目的观察人血小板生成素(TPO)基因组中内含子及5'非翻译区对TPO表达的影响。方法分别构建含TPO基因组中不同内含子的各类TPO 真核表达质粒,在cos-1细胞中进行了瞬间表达,并采用高灵敏定量试剂盒检测培养上清中人血小板生成素的含量。结果在转染48 h后,各类TPO重组质粒在cos-1细胞中表达顺序为:TPO intron v> TPOcDNA>ΔTPO intron I> TPO intron I> TPO gDNA。结论在TPO基因组中,最后一个内含子可显著提高TPO的表达水平,表明其可能含有特殊的增强序列;同时进一步证实,在TPO基因组中可能存在抑制TPO高水平表达的结构元件,造成TPO基因组在细胞中不表达或低水平表达。
- 宁云山李妍周明乾李明曾溢滔王小宁
- 关键词：血小板生成素内含子基因表达
- TPO内含子Ⅴ可显著增强人血小板生成素基因在乳腺细胞中的表达被引量：6
- 2007年
- 人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组包括6个外显子和5个内含子,内含子在其表达过程中可能扮演着重要作用.为了研究人TPO基因组中不同内含子对TPO表达的影响,构建可在转基因动物乳腺中高水平表达人TPO的乳腺特异性表达质粒.本研究以65kb的山羊β-casein启动子为调控元件,构建了包括人TPOcDNA(pTPOA)、TPOintronⅠ-TPOcDNA(pTPOB)、ΔTPOintronⅠ-TPOcDNA(pTPOC)、TPOintronⅤ-TPOcDNA(pTPOD)和TPOgDNA(pTPOE)等5种TPO乳腺特异性表达质粒,并在人乳腺细胞HC-11细胞上进行了瞬间表达研究.在转染48h后,通过双抗体夹心的ELISA方法定量分析上述质粒在HC-11细胞上的表达水平.结果表明,含有内含子Ⅴ的pTPOD的表达量最高,而含有整个基因组TPO的pTPOE表达水平最低.为了进一步证实pTPOD可在乳腺细胞中高水平表达,将pTPOD经脂质体包埋后注射到泌乳期山羊的乳腺中.结果显示,在山羊乳汁中可连续14d检测到人TPO的表达.上述实验证实,人TPO基因组中的内含子V可显著提高TPO在HC-11细胞内的表达水平,并提示内含子Ⅴ中可能含有特殊的调控序列.
- 宁云山李妍周明乾周宏伟王小宁曾溢滔
- 关键词：人血小板生成素内含子基因表达
