国家重点基础研究发展计划(G199011902)
- 作品数：14 被引量：81H指数：8
- 相关作者：金宁一李萍龚伟米志强连海更多>>
- 相关机构：解放军军需大学吉林大学第一医院军事医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 新城疫病毒长春株和四平株致细胞死亡方式的研究被引量：4
- 2001年
- 目的 :研究NDV长春株和四平株致细胞死亡的方式。方法 :采用空斑试验、细胞抑制试验、琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法进行研究。结果 :NDV长春株和四平株对鸡胚成纤维细胞 (CEF)、BHK、HeLa、Hep 2、HCT和OS 73 2等肿瘤细胞产生明显的病变 ,而对人的羊膜细胞 (Wish细胞 )无明显影响。结论 :长春株对肿瘤细胞的抑制作用强于四平株 ,长春株对肿瘤细胞的抑制不存在量效关系 ,只有最适剂量才引起最强的抑制作用。长春株和四平株在体外引起细胞死亡的途径不完全一致 ,长春株导致细胞死亡以凋亡为主 ,而四平株导致细胞死亡以坏死为主。
- 龚伟金宁一薛立娟罗琴芳孙大辉葛涛李萍
- 关键词：NDV细胞凋亡细胞坏死肿瘤细胞新城疫病毒
- VP_3诱导骨肉瘤多药耐药细胞凋亡作用机制的初步研究被引量：2
- 2002年
- 目的 研究VP3 对人成骨肉瘤细胞OS 73 2多药耐药株R OS 73 2治疗作用的分子作用机制与途径。方法 VP3 基因经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3 。脂质体法 pIRVP3 转染R OS 73 2细胞 ,RT PCR检测VP3 在细胞中的表达。提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳。流式细胞仪检测凋亡率。Western blot检测p5 3、bcl 2蛋白表达。结果 VP3 基因已在转录水平表达。电泳见转染组DNA呈梯状条带 ,对照组为单一条带。转染组凋亡率明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。转染组与对照组 p5 3及bcl 2蛋白显色带灰度无明显差异。 结论 VP3 可有效诱导R OS 73 2细胞凋亡 ,其分子作用机制与途径可能不依赖 p5 3及bcl 2作用。
- 孙大辉谷贵山金宁一龚伟张新段德生
- 关键词：VP3骨肉瘤多药耐药分子作用机制流式细胞仪
- 鸡新城疫病毒抗肿瘤作用及其机制的研究进展被引量：9
- 2000年
- 鸡新城疫病毒 (newcastlediseasevirus,NDV)感染机体可以诱导产生干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子 ,这些细胞因子能够在患瘤机体内发挥抗肿瘤作用。NDV的附着蛋白 (hemagglutinin -neuramidase ,HN蛋白 )具有增加瘤细胞对淋巴细胞的粘附力、刺激淋巴细胞的分化和改变肿瘤细胞的免疫原性等作用 ,同时NDV可以激活患瘤机体的免疫细胞 ,使免疫细胞发挥细胞毒性功能。NDV免疫机体后可以发挥这些抗肿瘤作用 ,提高机体的免疫力 ,促进机体的抗肿瘤反应 ,减少肿瘤的生长、转移和复发 ,增加肿瘤病人的存活率 。
- 古长庆金宁一
- 关键词：鸡新城疫病毒细胞因子肿瘤生物治疗
- 新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的细胞毒性研究被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的杀伤作用及其机制。方法:以脂质体介导方法在体外转染含新城疫病毒HN基因的质粒pVHN于细胞SMMC7721 24 h后,采用MTT法检测细胞活性;3,5-二羟基甲苯测定其唾液酸含量的变化;丫啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色,荧光显微镜观察细胞形态学改变;以及FCM检测病毒HN基因和HLA-A,B, C的表达。结果:体外转染pVHN能显著地降低细胞表面唾液酸含量(P<0.05),有效地杀伤肿瘤细胞SMMC7721;荧光显微镜观察可见典型的细胞死亡形态学改变;实验组细胞与对照组比较HN表达差异显著,HLA-A,B,C表达上调。结论:HN基因在体外能够显著降低肿瘤细胞表面唾液酸含量,同时,使其高表达HN抗原,上调HLA-A,B,C表达,从而,可能增强了肿瘤细胞的抗原性和免疫识别,诱导了细胞SMMC7721死亡。
- 孙迎春金宁一米志强李霄连海李萍
- 关键词：新城疫病毒HN基因细胞毒性唾液酸MHC-I
- 新城疫病毒HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究被引量：12
- 2003年
- 目的 :探讨HN基因在NDV抗肿瘤上发挥的作用。方法 :以pVAX1为表达载体构建了含NDVHN基因的pVHN核酸疫苗 ,以脂质体介导方法在体外转染OS732细胞 72h后 ,用 3,5 二羟基甲苯法测定OS732细胞膜唾液酸含量的变化。 6周龄BALB/c鼠左后肢皮下接种 2× 10 6个S180肿瘤细胞 ,分别于肿瘤接种后的第 7天 (肿瘤直径为 2～ 3mm)和第 17天瘤内注射 10 0 μg核酸重组体 ,同时设pVAX1对照组和单纯荷瘤对照组。荷瘤鼠经治疗后框窦采血 ,分离血清 ,测定血清唾液酸含量。取脾 ,采用FACS方法测定淋巴细胞亚群数量的变化。结果 :pVHN体外转染OS732细胞后 ,能显著降低细胞表面唾液酸含量 (P <0 .0 5 )。pVHN应用于荷瘤鼠显著降低血清中唾液酸含量 (P <0 .0 5 ) ,引起CD8+ T淋巴细胞亚群数量的增加 (P <0 0 5 )。结论 :单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量 ,体内表达后引起T淋巴细胞亚群数量改变。
- 米志强金宁一龚伟薛立娟孙大辉葛涛连海解丽华
- 关键词：新城疫病毒HN基因核酸疫苗抗肿瘤作用
- 人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达
- 2005年
- 目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合基因的p VAX1IL - 18HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染He L a细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。结果:酶切鉴定证实正确地构建了p VAX1IL - 18HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL - 18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。结论:IL - 18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。
- 解丽华金宁一邵国喜米志强连海薛丽娟李萍
- 关键词：新城疫病毒白细胞介素18基因表达
- 联合应用新城疫病毒及其HN基因对小鼠黑色素瘤抑制效应的研究被引量：1
- 2004年
- 背景与目的尽管新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)对多种肿瘤具有抑制作用,但其抑瘤机制尚不完全清楚。以前的研究结果表明,该病毒的血凝素神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因在该病毒的抗肿瘤作用上发挥重要作用且HN蛋白表达后能够定位于肿瘤细胞膜上,以HN蛋白作为肿瘤细胞的外源抗原来研究其抑瘤作用尚未见报道。本研究拟探讨HN蛋白作为外源抗原在新城疫病毒抗肿瘤的作用以及二者联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。方法在C57BL/6小鼠右后肢皮下接种B16黑色素瘤细胞2×105个。荷瘤第2天左后肢肌肉注射含新城疫病毒HN基因的重组质粒,荷瘤第7天,瘤内注射新城疫病毒2×109pfu;同时设单独HN基因或NDV治疗组及注射PBS的对照组。通过抑瘤率观察动物体内的抑瘤效果;通过特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyteCTL)实验,ICAM-Ⅰ、CD48及新城疫病毒HN蛋白在肿瘤细胞表面表达检测,探讨HN蛋白所介导的抑瘤作用。结果联合应用新城疫病毒及该病毒HN基因对肿瘤的抑制效果明显好于单独HN基因及新城疫病毒,抑瘤率达82.8%,特异性CTL反应增强,对靶细胞的杀伤率为18.4%;单独HN基因及新城疫病毒治疗组的抑瘤率分别为56.6%、41.0%,特异性CTL活性分别为4.4%、10.1%;
- 米志强金宁一孙迎春李霄连海李杰管国芳
- 关键词：新城疫病毒新城疫病毒HN基因黑色素瘤
- 凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究被引量：9
- 2001年
- 目的 :研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞OS 732多药耐药株R OS 732的作用。方法 :凋亡素基因VP3 经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法 pIRVP3转染R OS 732细胞 ,RT PCR检测凋亡素在细胞中的表达 ;光镜及电镜下观察瘤细胞 ;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ;流式细胞仪检测凋亡率。结果 :凋亡素基因已在转录水平表达 ;光镜及电镜下 2组细胞形态变化明显 ;电泳见转染组DNA呈梯状条带 ,对照组为单一条带 ;转染组凋亡率明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。结论 :凋亡素可有效诱导R OS 732细胞凋亡。
- 孙大辉金宁一谷贵山龚伟段德生
- 关键词：凋亡素成骨肉瘤多药耐药性凋亡细胞
- pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用被引量：13
- 2003年
- 用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明 。
- 米志强金宁一龚伟薛立娟连海解丽华李萍
- 关键词：鸡新城疫病毒HN基因抗肿瘤
- pIRVP3/pIRHNVP3核酸表达质粒的构建及对肿瘤细胞的影响被引量：10
- 2002年
- 目的 研究应用凋亡素基因 (VP3)和NDVHN基因联合抗肿瘤的可能性。方法 以pIRES1neo为表达载体构建了含鸡贫血病毒VP3基因和长春株HN基因的pIRVP3/pIRHNVP32个核酸重组质粒。将 2个重组质粒在体外转染HeLa和OS 732细胞 ,用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法 ,检测凋亡素基因和HN基因导致细胞死亡的类型。结果pIRVP3和pIRHNVP3转染HeLa和OS 732细胞 4 8h后 ,pIRVP3和pIRHNVP3均具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,且pIRVP3的抗肿瘤作用强于pIRHNVP3。结论 在体外 。
- 龚伟薛立娟孙大辉王宏伟葛涛罗琴芳李萍金宁一
- 关键词：凋亡素NDVHN核酸生物制剂
