国家自然科学基金(30600527)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析被引量：1
- 2008年
- 初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。
- 李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳
- 关键词：HIV-1CTL表位
- 表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价
- 2009年
- 建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+)。在阳离子聚合物作用下重组真核质粒转染的p815(H-2d)细胞,以G418压力筛选,RT-PCR检测mRNA表达,间接免疫荧光检测蛋白表达。通过PCR获得了HIV-1p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG融合基因,成功构建了p24MEG基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/p24MEG。转染p815细胞后,RT-PCR检测到融合蛋白mRNA表达,间接免疫荧光显示p815细胞内有融合蛋白的表达。结论:建立了稳定表达HIV-1p24MEG融合蛋白的p815细胞克隆,为评价多表位抗原p24MEG在BALB/c小鼠体内诱导的细胞免疫应答奠定基础。
- 张宁李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳
- 关键词：HIV-1
- HIV—1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备
- 2008年
- 为表达HIV—1复合多表位基因并制备其多克隆抗体。设计引物,以HIV—1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌。将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET32a并诱导表达。采用Ni2+-NTA亲和柱纯化目的蛋白,以p24抗体对纯化蛋白进行Western-blot分析。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体。通过PCR成功获得长度为651bp的HIV—1的p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG基因,通过诱导表达,显示在相对分子量约45000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白。经此纯化的融合蛋白免疫的家兔能产生特异性抗体,其滴度达到1∶3200。纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型HIV疫苗奠定一定的理论和实践基础。
- 李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- HIV-1 pol抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析被引量：1
- 2009年
- 目的:初步筛选HIV-1pol抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。方法:采用超基序、蛋白酶解、HLA结合力等预测相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞检测HLA-A*0201分子与肽的亲和力和稳定性来评价修饰后表位。结果:筛选出的低亲和性CTL候选表位,经修饰后与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。其中,YVSLSFPQI(pol52-60Y1),YVSQIIEQL(pol673-681Y1),YIQKETWEA(pol548-556Y1)HLA-A*0201呈高亲和力结合,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(Dissociation Complex50,DC50)均大于8h。结论:预测的pol抗原表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。
- 黄豫晓李英辉赵亚韩荣霞刘忠湘毛张翔薛采芳
- 关键词：HIV-1CTL表位
