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自体骨髓单个核细胞移植与缺血心肌血管再生: 2003年; 目的　探讨利用猪急性心肌梗死模型论证自体骨髓单个核细胞 (BM MNCs)移植对缺血性心脏病的治疗潜能和安全性。方法　结扎冠脉钝缘支造成急性心梗 ,分为两组 ,分别注射BM MNCs(BM MNCs组 )和生理盐水 (对照组 ) ,测量左室运动能力。 4周后观察移植区域的血管再生情况 ,并进行安全方面的评价。结果　在BM MNCs移植后 4周 ,左室等容收缩期压力最大变化速率 (LV +dp/dtmax)和左室等容舒张期压力最大变化速率 (LV-dp/dtmax)与心梗 6 0min时相比明显改善 (P <0 .0 5 )。 4周后心梗边缘组织的小血管数目 ,BM MNCs组明显多于对照组 (P <0 .0 5 )。BM MNCs治疗后 4周未发现心电图和心肌酶的异常变化 ,心肌组织学检查也未发现炎症细胞浸润、成骨或钙化等异常现象。结论　BM MNCs移植可明显促进缺血心肌的血管再生。; 凌云鹏赵鸿郑毅贾竹清周春燕李凌松万峰; 关键词：自体骨髓单个核细胞移植心肌梗死

骨髓细胞移植上调血管内皮生长因子及其受体的表达并改善缺血心脏功能被引量：21: 2003年; 目的 :通过骨髓细胞移植对心肌梗死大鼠模型血管内皮生长因子及其受体表达的影响 ,探讨骨髓细胞移植改善缺血心脏功能的可能机制。方法 :利用左前降支冠状动脉结扎术制备大鼠心肌梗死模型 ,然后行异体骨髓细胞移植 ;分别于术后 1d ,3d ,7d ,14d和 2 8d取材 ;利用免疫荧光和RT -PCR技术分析细胞移植对血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (Flk 1)表达的影响和移植细胞的分化情况 ;通过免疫组化计算血管数量 ;应用血流动力学检测大鼠心脏功能在术后各时间点的变化。结果 :VEGF和Flk 1在移植组动物的心肌梗死区残存细胞、梗死周边区细胞以及部分移植细胞内表达。移植组VEGF和Flk 1的mRNA表达明显高于对照组 ,分别于术后 3d和 14d达到高峰 ,以后逐渐减弱。术后 7d ,14d和 2 8d移植组血管数量较同期对照组明显增加 ,移植组心脏功能较对照组明显改善。术后 14d可在部分移植细胞中检测到心肌细胞或血管内皮细胞特异性蛋白的表达。结论 :骨髓细胞移植通过上调移植细胞及受者内源性VEGF和Flk 1的表达 ,促进血管新生 ,进而改善缺血心脏功能。; 张少衡贾竹青郭静萱张马康涛王淑玲刘永刚李凌松北京大学干细胞研究中心周春燕; 关键词：骨髓细胞移植血管内皮生长因子受体

干细胞因子在正常及梗死心肌中的表达被引量：3: 2004年; 目的　通过检测正常心肌组织及心肌梗死后干细胞因子 (SCF)mRNA的表达水平 ,为探讨其在心肌梗死中的作用奠定基础。方法　将成年SD大鼠随机分为正常组、结扎 6h组、结扎 1d组、结扎 3d组 (各时间点均设假结扎组以作对照 ) ,通过结扎左前降支建立心肌梗死模型 ,假结扎组只穿线不结扎。各组取心脏左室前壁同一部位 ,提取总RNA ,用RT PCR的方法 ,以GAPDH基因为内参 ,进行半定量检测正常心脏及梗死后SCFmRNA的表达水平。结果　可溶型SCF和膜型SCF在正常心肌有低水平表达。在心肌梗死后的三个不同时间点 ,结扎组心肌组织中可溶型SCF的表达分别为假结扎组的 1 6 6倍 (P <0 0 5 )、1 5 8倍和 1 30倍 (P <0 0 1) ;而膜型SCF的表达分别为假结扎组的1 80倍、1 5 3倍 (P <0 0 5 )和 1 5 7倍 (P <0 0 1)。结论　心肌梗死可以促使SCF的表达上调 ,提示其在心肌梗死后的病理过程中以及在诱导干细胞的归巢中可能发挥作用。; 余晓燕王春梅姜涛贾竹青马康涛周春燕; 关键词：干细胞因子梗死心肌心肌梗死模型

骨髓细胞移植对心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的调节被引量：10: 2004年; 目的　观察骨髓单个核细胞 (BM MNCs)移植对心肌梗死 (MI)后恢复期心肌细胞凋亡及心功能的影响 ,并探讨其可能机制。方法　通过结扎左冠状动脉前降支制成MI模型。 2周后第二次开胸在心外膜下梗死区及周边区多点注射BM MNCs混悬液 2 0 0 μl(5× 10 6 个细胞 )。经超声心动图测定左室射血分数 (EF)、短轴缩短率 (FS)等指标。采用DNA缺口末端标记法 (TUNEL)检测心肌细胞凋亡 ,免疫组化法检测Bcl 2、Bax蛋白在心肌细胞中表达水平。结果　术后 4周 ,移植组EF、FS值均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;8周时EF、FS值升高达 2 2 4 %、2 8 1% (P <0 0 5 )。TUNEL结果显示心肌细胞凋亡指数在移植组明显低于对照组 (4周 :0 0 94 6± 0 0 17vs 0 173± 0 0 18,P <0 0 5 ;8周 :0 0 916± 0 0 14vs 0 182± 0 0 15 ,P <0 0 5 )。免疫组化结果表明 ,移植组Bcl 2蛋白表达高于对照组 (4周 :12 6 6± 3 37vs 5 6 8± 2 5 3,P <0 0 5 ;8周 :13 0 8± 3 0 87vs 5 0 2± 1 91,P <0 0 5 ) ;Bax蛋白表达则降低 (4周 :11 4 8± 3 134vs 2 0 12± 3 91,P <0 0 5 ;8周 :9 98± 3 0 3vs 2 2 74± 3 12 ,P <0 0 5 )。结论　骨髓单个核细胞移植可抑制MI后心肌细胞凋亡的发生 ,从而保护心功能 ,其机制可能与对Bcl 2、; 马东星张永珍谢道银赵蕊张萍毛节明周春燕; 关键词：骨髓细胞移植心肌梗死心肌细胞凋亡 BCL-2 BAX

骨髓间质干细胞在细胞移植治疗缺血性心脏病中的应用: 2004年; 彭斯扬周春燕; 关键词：骨髓间质干细胞细胞移植缺血性心脏病

腺病毒介导超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4过度表达对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响被引量：3: 2006年; 目的观察过度表达超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型(HCN)4对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法分离20只乳鼠的原代心肌细胞并进行培养,用含HCN4基因的重组腺病毒AdHCN4感染心肌细胞,以未感染细胞作为对照组,通过RT-PCR及细胞免疫荧光方法检测心肌细胞中HCN4基因在mRNA和蛋白质水平的表达,用全细胞膜片钳方法测定转染HCN4基因的心肌细胞的动作电位和起搏电流If。结果AdHCN4感染组心肌细胞中HCN4mRNA和蛋白质的表达水平明显高于对照组细胞;感染组心肌细胞自发搏动的频率为(92·5±7·4)次/分,明显高于对照组心肌细胞的(68·9±6·2)次/分(P<0·05);动作电位出现明显的4相自动除极化,其最大舒张电位(-52·8±4·2)mV明显高于对照组细胞(-62·1±2·6)mV(P<0·05);动作电位复极50%和90%的时间两者比较差异无统计学意义;在感染组细胞中,起搏电流If的电流密度为(115·7±7·8)pA/pF,也明显高于对照组细胞的(7·2±0·6)pA/pF(P<0·05)。结论过度表达起搏通道基因HCN4能够明显增强乳鼠心肌细胞的自律性,从而增加心肌细胞自发搏动的频率,这提示HCN4基因有可能成为治疗缓慢性心律失常疾病的目的基因。; 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕; 关键词：离子通道电生理学动作电位心肌细胞

起搏通道基因亚型HCN4重组腺病毒载体的构建及通道电流检测被引量：23: 2006年; 目的旨在构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4(HCN4)重组腺病毒载体并鉴定其离子通道功能。方法全长人HCN4基因酶切后亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,形成含目的基因和绿色荧光蛋白基因的穿梭载体。穿梭载体和病毒骨架载体pAdEasy-1经电穿孔法在BJ5183大肠杆菌中同源重组,重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用脂质体介导转染到HEK293细胞进行病毒的包装和扩增。用多聚酶链反应(PCR)方法对病毒上清中的HCN4进行检测,并将重组腺病毒感染COS-7细胞,用免疫荧光染色检测HCN4蛋白质的表达,利用全细胞膜片钳方法测定转HCN4基因细胞的电生理功能。结果通过酶切、测序、PCR等证实HCN4通道基因重组腺病毒载体构建正确,免疫荧光检测证实转染AdHCN4的COS-7细胞中HCN4通道基因的表达,膜片钳实验也在转基因细胞中检测到超极化激活的非选择性内向阳离子电流(If)。结论HCN4通道基因重组腺病毒载体的构建成功为进一步研究该离子通道的电生理功能及在心律失常疾病基因治疗方面的潜在应用价值奠定了基础。; 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕; 关键词：超极化激活环核苷酸门控阳离子通道起搏电流腺病毒

Electrophysiology of hyperpolarization-activated cyclic nucleotidegated cation channel 2 and hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel 4 expressed in HEK293 cells被引量：3: 2007年; The action potential of pacemaker cells in thesino-atrial node forms the automatic rhythm of theheart.The automatic depolarization in phase 4 is the basisof the automaticity in pacemaker cells.Many currents areincluded in phase 4,such as calcium current,TTX-sensitive sodium current,sustained inward current(I_(si)),decay of delayed rectifier potassium current,etc.Funny current(I_f)has long been recognized as; LI ChunGUO Ji-hongLI Ji-wenLIU Yuan-weiHAO Xue-meiZHANG PingWANG Shi-qiang; 关键词：钾离子通道

骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死被引量：7: 2005年; 目的探讨自体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对急性心肌梗死后心脏功能及结构的影响。方法中国小型猪16头,随机分为对照组(n=6)及移植组(n=10)。建立急性心肌梗死模型后,分别注入BMMNCs/生理盐水。两组动物于术中监测血流动力学指标,术后进行影像学检查。移植组分别于2、4周后获取心脏标本,检测移植细胞标记物Hoechst33342。结果心梗4周后,移植组心梗范围较对照组显著缩小(P<0.01);血流动力学指标较对照组明显改善;局部室壁运动评分优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。在术后2周获得的心肌标本内,可见多量Hoechst33342和MHC双阳性细胞。结论成体BMMNCs移植后,有可能抑止心室重构的发展,提高心室运动功能。; 赵鸿万峰解基严凌云鹏贾竹青郑毅李凌松周春燕; 关键词：急性心肌梗死心梗骨髓单个核细胞 MNC 细胞标记成体

骨髓细胞移植上调急性缺血心肌HSP32和HSP70的表达被引量：11: 2003年; 目的 :检测骨髓细胞移植在急性心肌梗死大鼠模型中对细胞保护性蛋白HSP32和HSP70表达水平的影响 ,探讨细胞移植早期改善缺血心脏功能的可能机制。方法 :通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型 ,直视下心外膜注射 5× 10 6骨髓单个核细胞 ;利用免疫荧光和RT -PCR技术检测HSP32和HSP70在术后 1d、3d、7d和 14d的表达变化和移植细胞的分化情况 ;通过超声心动图分析心脏功能左室射血分数 (EF值 )和缩短分数(FS值 )。结果 :免疫荧光结果显示 ,缺血心肌中HSP32和HSP70的表达在移植组明显增强 ,并表达于部分移植细胞内。RT -PCR结果表明 ,移植组HSP32和HSP70的mRNA表达明显高于对照组 ,术后 3d达到高峰 ,比对照组分别增加 5 .0倍和 2 .9倍 (P <0 .0 1)。术后 7d ,移植组EF值和FS值明显高于同期对照组 (14 %和 2 2 % ,P <0 .0 5 ) ;术后 14d ,可在移植的骨髓细胞中检测到心肌细胞和血管内皮细胞特异性蛋白的表达 ,EF值和FS值进一步增加。结论 :骨髓细胞移植早期 ,细胞移植能够上调细胞保护性蛋白的表达。; 张少衡郭静萱张萍刘永刚贾竹青冯新恒李照屏李卫虹马康涛周春燕李凌松; 关键词：骨髓细胞移植急性缺血心肌 HSP70 热休克蛋白质类

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国家高技术研究发展计划(2001AA2160313)

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