国家自然科学基金(30600611)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：蒋耀光何勇胡义杰范士志蒋力更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人DeltaNp73α基因重组腺病毒载体的构建及其鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的利用Adeasy腺病毒载体系统构建含人DeltaNp73α cDNA的重组腺病毒并在293细胞中扩增制备重组病毒。方法从pcDNA3-DeltaNp73α-HA中酶切出DeltaNp73α基因,并插入pAdTrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒;pAdTrack-CMV-DeltaNp73α线性化后电穿孔法转化到含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的E.coli.BJ5183菌株内同源重组。筛选正确的重组质粒,PacⅠ线性化后脂质体法转染293T细胞包装成重组病毒颗粒;并在293T细胞中反复扩增;增强离心法转染树突状细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果经限制性内切酶酶切鉴定、PCR筛选、基因测序和GFP表达证实成功构建了携带DeltaNp73α cDNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度的重组病毒;Western blot检测出预期相对分子质量为67×103的特异条带。结论成功构建了携带DeltaNp73α cDNA的重组病毒。
- 胡义杰范士志蒋耀光何勇
- 关键词：重组腺病毒
- Endostar对肿瘤血管内皮细胞生长及功能的抑制作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨Endostar对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制。方法采用A549细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)成为肿瘤血管内皮细胞(tumor-derived endothelial cells,Td-EC),通过MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等检测Endostar对Td-EC细胞生物学特性的影响。结果Endostar在体外对于Td-EC有显著的生长抑制作用,并具有时间和浓度依赖性,但对于HUVEC的生长抑制作用并不显著;一定浓度的Endostar能显著降低Td-EC细胞迁徙活性,促使细胞凋亡数目增加、细胞形态学发生改变,并能显著增加Td-ECS期细胞比例(P<0.01),而同样条件下,Endostar影响细胞迁徙活性及促进细胞凋亡的作用对于HUVEC并不显著(P>0.05)。结论Endostar可以特异性地抑制肿瘤血管内皮细胞的生长及功能。
- 蒋力何勇蒋耀光
- 关键词：ENDOSTAR细胞迁徙
- 人DeltaNp73α基因修饰的树突状细胞抗瘤免疫学效应研究被引量：3
- 2007年
- 目的研究DeltaNp73α重组腺病毒转染树突状细胞诱导的特异性免疫抗瘤作用。方法人脐静脉血经梯度离心及IL-4、GM-CSF诱导培养树突状细胞;DeltaNp73α重组腺病毒增强离心法转染树突状细胞,观察DeltaNp73α对树突状细胞活化、凋亡的影响;同时检测其所诱导的DeltaNp73α特异性细胞毒性T淋巴细胞对不同DeltaNp73α表达水平肿瘤细胞的细胞毒性作用。结果Western blot证实重组腺病毒转染树突状细胞后DeltaNp73α的有效表达;DeltaNp73α修饰的树突状细胞凋亡率显著低于对照组;DeltaNp73α修饰树突状细胞诱导的细胞毒性T细胞可以有效的杀伤DeltaNp73α高表达的A549/DeltaNp73α细胞、K-562细胞;且这种免疫抗瘤作用可能与靶肿瘤细胞DeltaNp73α水平相关。结论DeltaNp73α修饰的树突状细胞,其凋亡率降低;并可以有效诱导针对DeltaNp73α高表达肿瘤细胞的特异免疫抗瘤作用。
- 胡义杰范士志蒋耀光李志平陈建明何勇
- 关键词：树突状细胞重组腺病毒
- 肿瘤源性血管内皮细胞的培养及其细胞生物学特性鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的探讨肿瘤来源血管内皮细胞的诱导和体外培养方法，并对其进行细胞生物学特性鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用肿瘤细胞的培养上清液诱导HUVEC增殖，制备肿瘤衍生的血管内皮细胞（Td—EC）。采用形态学观察和荧光染色Ⅷ因子相关抗原，鉴定血管内皮细胞，用RTPCR检测肿瘤血管内皮细胞标志物（TEM）的表达，采用迁徙试验、透射电镜、流式细胞仪细胞周期分析等方法检测、比较HUVEC和Td—EC的生物学特性。结果原代培养的HuVEC约于24h完全贴壁，4～5d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子荧光染色证实培养的细胞是HUVEC。经肿瘤细胞上清液诱导后，用RT-PCR检测到TEM1和TEM8 mRNA在Td—EC中的表达；Td—EC细胞迁徙能力较HUVEC显著增强；Td—EC细胞增生活跃，G0～S期细胞比例明显增高，具有肿瘤血管内皮细胞特性。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的HUVEC，并可诱导生成肿瘤源性的血管内皮细胞。
- 蒋力何勇蒋耀光
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞迁徙
- 重组腺病毒载体介导人DeltaNp73α转染对树突状细胞凋亡的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的研究人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染人脐血来源树突状细胞(DC)对其成熟状态及其凋亡水平的影响.方法用Adeasy系统构建人DeltaNp73α基因重组腺病毒;并通过增强离心法将其转染至人脐血来源DC;流式细胞仪分析转染后DC的成熟状态以及DC的凋亡水平.结果成功构建了人DeltaNp73α基因重组腺病毒并高效转染DC;人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染提高了DCCD83,HLA-DR的表达,并能显著抑制其凋亡水平.结论人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染DC,促进DC的成熟并抑制其凋亡,将有效地提高DC疫苗的抗原呈递能力.
- 胡义杰范士志蒋耀光李志平陈建明何勇
- 关键词：腺病毒科树突细胞树突细胞疫苗
