国家自然科学基金(30172347)
- 作品数：7 被引量：36H指数：4
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- 相关机构：第二军医大学南京医科大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 造血干细胞移植在恶性血液病治疗中的应用被引量：4
- 2004年
- 随着造血于细胞移植(HSCT)技术飞速进展,非清髓性HSCT、供体淋巴细胞输注等新的治疗手段为血液系统恶性肿瘤性疾病患者提供了更多的治疗选择。非血缘关系造血干细胞供体资料库和脐血库的不断扩大,使更多的患者可以找到人白细胞抗原相合的供体,得到治疗的机会。全球接受移植的病人明显增加,已成为治愈白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统疾病的重要方法之一。同时,HSCT又是治疗相关并发症相对较高的治疗方法,尤其是异基因HSCT,移植物抗宿主病等并发症可能使患者生存质量下降甚至死亡。因此,对于不同病种、不同疾病阶段的恶性血液病患者,HSCT的疗效如何,是否需要移植,选择何种移植,移植的时机和预处理方案的选择等,有待于进一步明确。本文综述了HSCT在急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性白血病、恶性淋巴瘤和多发性骨髓瘤等常见血液肿瘤治疗中的应用现状。
- 王健民温宏升
- 关键词：造血干细胞移植恶性血液病急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病慢性白血病
- 粒细胞集落刺激因子联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞对其免疫系统的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞对其免疫系统的影响。方法:根据对供体C57BL/6小鼠动员方案不同分为4组,G-CSF组(250μg/kg,连用4 d),G-CSF(250μg/kg,共4 d)+甲泼尼龙组(100 mg/kg,第3天),G-CSF(250μg/kg,共4 d)+甲泼尼龙(100 mg/kg,第3天)+环孢素A组(100 mg/kg,第3天)和PBS对照组。观测动员后供体小鼠T淋巴细胞对BALB/c小鼠脾细胞的单向混合淋巴细胞反应(MLR),ELISA法测定供体鼠脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γI、L-4、TGF-β1的水平,RT-PCR半定量测定IFN-γI、L-4的mRNA水平。结果:3个实验组MLR刺激效率分别为42%、21%和39%,与PBS对照组的68%相比有显著性差异(P<0.01);各实验组与PBS对照组相比,培养上清中IFN-γ表达明显减低,IL-4、TGF-β1明显增高(P<0.01),而各实验组之间无显著差异;RT-PCR半定量测定发现IFN-γmRNA表达明显减低,IL-4明显增高(P<0.01)。结论:G-CSF联用激素和(或)免疫抑制剂动员供体小鼠外周血造血干细胞可降低其T淋巴细胞异基因反应性,改变其细胞因子分泌类型,可能易于诱导受体免疫耐受。
- 曹永彬王健民解琳娜江千里高磊邱慧颖周虹
- 关键词：粒细胞集落刺激因子造血干细胞移植
- YCD基因修饰对小鼠P388白血病的体内治疗作用研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :以P388/DBA小鼠白血病模型 ,探讨新型自杀基因YCD的体内治疗作用。方法 :用逆转录病毒载体将YCD基因导入 ,筛选P388 YCD eGFP细胞克隆 ,以P388 eGFP和野生性 (wt)P388细胞为对照。 (1) 3组细胞腹腔接种给DBA小鼠 (n =5 ) ,5× 10 6/只 (下同 ) ,观察致病性 ;(2 ) 3组细胞腹腔接种给DBA小鼠 (n =5 ) ,分别以 5 FC治疗 2周 ,观察疗效 ;(3) 2组× 5只小鼠腹腔接种P388 YCD eGFP ,5 FC 5 μmol/L·d-1× 2d或PBS治疗 ,根据小鼠存活时间推算杀伤效率。以流式细胞仪、冰冻切片和HE切片检测各脏器中白血病细胞的分布和变化。结果 :基因导入对细胞的生物学特性影响不显著 ;5 FC治疗 2周 ,YCD组小鼠存活 (17.8± 1.89)d ,而eGFP组和wtP388组分别存活 (7.8± 1.10 )d和 (7.7± 1.15 )d (P <0 0 5 ) ;5 FC治疗 2d的杀伤率达 99.6 %。结论 :YCD转基因细胞在体内可被 5 FC有效杀灭 ,该系统具有应用前景。
- 江千里王健民温丽敏张雨生江汕胡晓霞周虹
- 关键词：修饰小鼠P388白血病
- 西司他丁钠+亚胺培南消除细胞培养中细菌污染的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究西司他丁钠 +亚胺培南 (泰能 )清除细胞培养中细菌污染的可行性。 方法 :将 1 5批细胞培养中已发生细菌污染的细胞 ,用含泰能 1 0～ 1 0 0 μg/ ml的 PBS洗涤 3次 (PBS用量逐次递增 ) ,第 3次洗涤之前将细胞悬浮于含 1 0 0 μg/ m l泰能的完全培养液 1 .5 ml中 37℃孵育 30 min;然后细胞移入含 1 0 0 μg/ m l泰能的完全培养液中培养 ,更换含 1 0 0 μg/ ml泰能的完全培养液 1次 / d,共 3d。结果 :成功消除 1 4批细菌感染 ,另 1批加用万古霉素后亦获成功。结论 :泰能可以有效消除细胞培养中的细菌污染 。
- 江千里王健民江汕许育温丽敏周虹闵碧荷
- 关键词：西司他丁钠亚胺培南细胞培养细菌污染细胞生长
- 经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究被引量：17
- 2003年
- 目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;
- 江千里王健民江汕温丽敏周虹
- 关键词：绿色荧光蛋白
- eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用被引量：4
- 2006年
- 目的:以携带绿色荧光蛋白基因(eGFP)的重组逆转录病毒(RV)标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用。方法:制备高滴度eGFP-RV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP+的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效。结果:eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP+率>99.2%。P388-eGFP细胞体外传代3个月后eGFP+率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)%(n=3)。eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性。多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP+细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eG-FP+细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性。结论:成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域。
- 江千里王健民江汕温丽敏胡晓霞周虹许小平
- 关键词：绿色荧光蛋白基因标记逆转录病毒载体灌注固定
- 异基因造血干细胞移植后共刺激分子LIGHT／HVEM的表达与GVHD的关系被引量：3
- 2010年
- 目的探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后共刺激分子LIGHT和HVEM的表达与移植物抗宿主病（GVHD）发生的关系。方法26例allo-HSCT患者中，预处理方案采用环磷酰胺＋足叶乙甙＋全身照射11例，采用氟达拉滨＋阿糖胞苷＋白消安12例，采用环磷酰胺3例。移植时，输注单个核细胞（5．89±3．36）×10^8／kg，CD34^＋细胞（3．29±1．29）×10^6／kg。预防急性GVHD（aGVHD）的方案采用环孢素A＋短程甲氨蝶呤＋吗替麦考酚酯，HLA半相合及非血缘关系者加用抗胸腺细胞球蛋白。GVHD的诊断与分级采用西雅图标准。在预处理前、移植后15d、发生aGVHD时及aGVHD经治疗好转后分别采集患者外周血2ml，采用三色流式细胞术进行检测，同时以15名健康志愿者的血液标本作为正常对照。结果所有患者均获得造血功能重建，移植物均完全植活。移植后共发生aGVHD9例，发生率为35％，其中Ⅲ～Ⅳ度者3例，8例经治疗后好转，1例治疗无效死亡；发生慢性GVHD（cGVHD）7例，发生率为26．9％。患者预处理前和移植后15d及正常人外周血T淋巴细胞几乎不表达LIGHT，组成性表达HVEM；发生GVHD时，LIGHT表达显著上调，HVEM表达下调；GVHD好转后，LIGHT和HVEM的表达恢复正常。移植后158时，发生aGVHD者LIGHT的表达高于未发生aGVHD者，而HVEM的表达较低（P〈0．05）。Ⅲ～Ⅳ度aGVHD者LIGHT的表达明显高于I～II度者（P〈0．05）。结论LIGHT／HVEM在allo-HSCT后GVHD的发生和发展过程中起重要作用，通过监测该共刺激分子的表达对aGVHD的发生有一定预示作用。
- 郑晓丽章卫平杨建民宋献民周虹高磊包晓辰王健民
- 关键词：移植物抗宿主病
