国家自然科学基金(30700591)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：尹杰超李宁任桂萍傅俊华李德山更多>>
- 相关机构：东北农业大学哈尔滨工程大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 利用SUMO表达系统高效可溶性表达鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因被引量：5
- 2011年
- 为评价SUMO原核表达系统(pHisSUMO Express)对病毒基因的可溶性表达,本研究从人工接种发病的鸡传染性法氏囊病(IBD)的病料组织样品中提取总RNA,通过RT-PCR扩增IBD病毒(IBDV)VP3基因,并将其克隆于pHisSUMO中构建了重组表达质粒pHisSUMO-VP3,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)PlysS,经IPTG诱导,得到可溶性表达的融合蛋白SUMO-VP3。结果表明,该融合蛋白表达量占细菌总蛋白35%,经HisTrapTMFF crude column层析柱纯化后的SUMO-VP3蛋白可被SUMO蛋白酶Ⅰ有效切割,获得无标签的VP3蛋白,经western blot鉴定表明该VP3蛋白具有良好的抗原性。本研究表明pHisSUMO Express表达系统是高效可溶表达外源蛋白的有效工具,所表达的病毒蛋白具有良好的抗原性,为病原诊断抗原的研究和制备提供有效表达系统。
- 曲栗尹杰超李宁刘生伟傅俊华姚文兵谷学佳郝建权任桂萍李德山
- 关键词：SUMO鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因
- 将计算机辅助教学应用于疫苗学课程的初步探索被引量：1
- 2011年
- 疫苗学是一门集微生物、传染病、免疫学、流行病学、生物化学、分子生物学为一体的多学科交叉综合学科,因此,疫苗学涉及的知识面广、涵盖的知识量大、需要掌握的知识点繁多,"一支粉笔、一块黑板、一本教科书"的传统教学方式很难达到教学目的和效果。利用多媒体技术节约了传统的板书时间,可进行高密度的知识传授、大信息量的优化处理,大大提高课堂效率,使学生在有限的时间内获取大量的知识。
- 尹杰超马山刘向宇刘向宇
- 关键词：学科内容计算机辅助教学
- 融合蛋白GST-Ulp1p在大肠杆菌中的高效可溶性表达及其活性鉴定被引量：7
- 2010年
- 利用基因工程技术,体外重组小分子类泛素修饰蛋白酶1(Ulp1)的活性片段,获得高表达、高特异性重组蛋白酶。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisia中提取Ulp1编码第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段(Ulp1p),在其C端加入6×His并连接到大肠杆菌表达载体pGEX中,构建重组表达质粒pGEX-Ulp1p-his6。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。表达、纯化后,以SUMO融合蛋白检测其活性。经过优化,该蛋白可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40.12%。可通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱或Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到纯度98%的蛋白。经酶切分析,比活力为1.375×104U/mg。融合蛋白GST-Ulp1p-His6无需切除谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签,具有很高的活性,制备简易;6×His标签,有利于底物蛋白切割后纯化,减少蛋白损失。本研究为制备高活力的SUMO蛋白酶提供了一个新方法。
- 傅俊华王琪尹杰超刘铭瑶李宁姚文斌任桂萍李璐李德山
- 关键词：活性鉴定
