国家自然科学基金(30271292)
- 作品数：21 被引量：100H指数：8
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- 猪主动脉瓣去细胞基质的制备被引量：1
- 2006年
- 目的完全去除猪主动脉瓣细胞,取得良好的去细胞支架材料。方法用5 g/L胰酶对标本中的某些基质和细胞加以消化后,再应用不同去垢剂(十二烷基硫酸钠、脱氧胆脂酸钠、Triton X-100)加以洗脱,结合溶液渗透压改变等去除猪主动脉瓣细胞;标本进行大体、光镜、电镜观察和热皱缩温度的检测。结果胆脂酸钠无法完全脱除猪主动脉瓣细胞,十二烷基硫酸钠和曲拉通均可完全去除猪主动脉瓣细胞,Triton X-100组的主动脉瓣胶原纤维和弹性纤维得以较好保持。结论Triton X-100可以成功脱除猪主动脉瓣细胞,为组织工程瓣膜的研究提供材料。
- 顾春虎王云雅易定华张近宝刘维永刘洋
- 关键词：瓣膜胰蛋白酶脱细胞基质
- 组织工程心脏瓣膜的医学伦理研究被引量：1
- 2004年
- 简要论述构建组织工程心脏瓣膜材料和方法 ;探讨组织工程心脏瓣膜的伦理问题 ,准确、合理处理先进技术与伦理道德的关系。
- 李悟刘维永郭照江
- 关键词：心脏瓣膜伦理
- 碱性成纤维细胞生长因子对犬隐静脉间质细胞体外培养抗钙化作用
- 2006年
- 目的观察作为组织工程瓣间质种子细胞的犬隐静脉间质细胞体外培养钙化机制,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对犬隐静脉间质细胞体外培养钙化的抑制作用。方法分离培养犬隐静脉间质细胞,分为正常培养对照、促钙化培养和bFGF培养3组。2周后行von kossa染色,检测细胞层钙沉积、碱性磷酸酶(ALP)活性及上清液中骨钙素(OC)含量,细胞ALP、OC mR- NA表达。结果培养2周后,促钙化组及对照组均有细胞结节形成,bFGF组细胞呈极性密集生长,无结节形成。von kossa染色促钙化组呈强阳性,bFGF组及对照组呈弱阳性。促钙化组钙沉积及ALP活性比对照组均明显增高(5．384±0．443比2．198±0.173,P＜0.01),ALP高2．13倍(9．611±0．639比4.819±0．334,P＜0．01),bFGF使两者均显著降低(0．192±0．024比5．384±0.443,P＜0．01,3．069±0．178比9．611±0．639,P＜0．01)。促钙化组上清液OC含量于第6天始升高,至第12天到达高峰,然后有轻度下降。bFGF组及对照组均维持较低水平。结论体外培养的犬隐静脉间质细胞在促钙化条件下具有成骨细胞的表型,有明显的钙化现象发生,bFGF具有抑制其钙化的作用。
- 宿学家刘维永陈文生卫向阳欧阳辉顾春虎
- 关键词：种子细胞钙化碱性成纤维细胞生长因子
- 去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料体外降解的初步观察被引量：5
- 2006年
- 目的观察去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料的体外降解方式和过程。方法将制备好的去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料90片随机分为3组,胶原酶组、弹性蛋白酶组和水解对照组,每组30片,分别用0.05m g/m l胶原酶I、0.05m g/m l弹性蛋白酶和磷酸盐缓冲液(PBS)作为降解液在体外处理去细胞猪主动脉瓣膜。于处理后第3、6、9、12、15和30d从每组取出5个平行样本观察瓣膜组织形态学改变,测定降解失重率、降解液中蛋白含量、羟脯氨酸含量等指标。结果胶原酶组和弹性蛋白酶组去细胞瓣膜基质支架材料均随降解时间延长逐渐变得菲薄、韧性差、组织疏松、纤维网孔变大、断裂,降解液外观变浑浊,瓣膜失重率增加,降解液蛋白含量和羟脯氨酸含量增加(P<0.01);胶原酶组较弹性蛋白酶组对去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料的降解作用强。结论胶原酶和弹性蛋白酶对去细胞猪主动脉瓣膜基质支架材料均有降解作用,且前者的降解作用强于后者。
- 刘洋刘维永顾春虎李悟张近宝
- 关键词：体外降解细胞外基质
- 不同试剂脱除猪胸主动脉壁细胞的对比研究被引量：7
- 2005年
- 目的:用不同方法去除猪胸主动脉壁细胞,并比较去细胞效果,为组织工程瓣膜或带瓣管道提供良好的实验材料。方法:采用十二烷基硫酸钠、胆脂酸钠、曲拉通(TritonX100)制备猪胸主动脉脱细胞基质。将实验分为十二烷基硫酸钠组、胆脂酸钠、曲拉通组和空白对照组。标本进行大体、光镜、电镜观察,力学性能的检测并做比较。结果:胆脂酸钠无法完全脱除主动脉壁内细胞,十二烷基硫酸钠和曲拉通都能完全脱除猪胸主动脉细胞,曲拉通较好地保持了胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布,并有较好的力学性能。后两者脱细胞时间无显著差别。结论:曲拉通可以成功用于制备大血管脱细胞基质,为组织工程瓣膜或带瓣管道的研究提供材料。
- 顾春虎刘维永张近宝王云雅刘洋谭红梅宿学家
- 关键词：胰蛋白酶脱细胞基质
- 不同试剂脱除猪主动脉瓣细胞的对比研究被引量：14
- 2006年
- 目的用不同方法去除猪主动脉瓣的细胞并比较效果,为组织工程瓣膜提供良好的实验材料。方法采用十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酯酸钠(SD)、曲拉通(Triton)X-100制备猪主动脉瓣脱细胞基质。标本进行大体、光镜、电镜观察,DNA提取、力学性能的检测并比较。结果SD无法完全脱除主动脉瓣瓣根内的细胞。TritonX-100和SDS可以完全脱除瓣膜细胞。TritonX-100较好的保持了主动脉瓣胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布,并有较好的力学性能。而SDS对瓣叶和瓣根血管壁中的纤维支架都造成了一定的损伤。SDS和TritonX-100脱细胞时间无明显差别。结论TritonX-100可以成功脱除猪主动脉瓣细胞,并较好的保持了主动脉瓣的结构和力学性能。
- 顾春虎刘维永刘洋王云雅张近宝谭红梅宿学家
- 关键词：心脏瓣膜胰蛋白酶聚乙烯二醇类脱细胞基质
- 改良去细胞方法对猪源性逆转录病毒的影响被引量：4
- 2005年
- 目的观察改良的去细胞方法对猪主动脉瓣膜的猪源性逆转录病毒的影响。方法用0.1%胰酶消化猪主动脉瓣后,再用TritonX100DNA酶/RNA酶洗脱消化,结合溶液渗透压改变等去除细胞;取新鲜猪瓣、猪外周血标本和去细胞猪瓣各20只,降主动脉内移植去细胞猪瓣后的犬外周血10例,以PK15细胞系为对照,采用PCR和RTPCR法检测猪源性逆转录病毒。结果经去细胞处理后猪瓣内的细胞成分完全去除,纤维支架和力学性能保持良好;新鲜猪瓣及猪外周血标本均检测到219bp的扩增条带,与Medline公布的猪源性逆转录病毒有90%～95%同源性;去细胞猪瓣及移植了去细胞猪瓣犬的外周血,均未测到该病毒。结论改良的去细胞方法可以去除猪心瓣膜的猪源性逆转录病毒,能够有效预防该病毒物种间的交叉感染。
- 顾春虎刘维永易定华王云雅张近宝卫向阳欧阳辉刘星光谭红梅
- 关键词：逆转录病毒去细胞猪猪主动脉瓣胰酶消化RNA酶主动脉内
- 骨髓CD_(34)^+细胞体外分化为血管内皮细胞的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 研究骨髓CD3 4 + 细胞体外分化为内皮细胞的能力 ,并初步探讨其分化条件。方法 利用免疫磁珠法从骨髓中提取CD3 4 + 细胞 ,体外经血管内皮生长因子 (VEGF)、成纤维生长因子 (bFGF)及胰岛素样生长因子 1(IGF 1)等诱导分化后 ,观察细胞生长及形态变化 ,并通过检测细胞血管内皮生长因子受体 2 (VEGFR 2 )、Ⅷ因子相关抗原抗体表达和摄取乙酰化 低密度脂蛋白(Ac LDL)情况等对分化细胞进行鉴定。结果 用免疫磁珠法从骨髓中可以提取高纯度CD3 4 + 细胞 ,定向诱导后细胞呈卵石形 ,透射电镜显示细胞内具有特征性的W P小体 ,免疫荧光染色检测细胞相关抗原VEGFR 2、Ⅷ /vWF呈阳性 ,同时细胞摄取Ac LDL。结论 骨髓CD3 4 + 细胞是具有多向分化潜能的干细胞 ,经VEGF、bFGF、IGF 1等诱导 ,可以分化为血管内皮细胞 ,是理想的组织工程种子细胞。
- 郑奇军蔡振杰易定华欧阳辉高峰赵建斌刘维永
- 关键词：骨髓CD34^+细胞血管内皮细胞体外分化VEGFR-2免疫磁珠法分化细胞
- 应用犬骨髓间充质干细胞体外构建组织工程心脏瓣膜的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的:将犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离、自然扩增后,体外与去细胞猪主动脉瓣复合构成组织工程瓣膜(TEHV),观察其生长情况,以评价其作为组织工程心脏瓣膜种子细胞的可行性.方法:采用密度梯度离心及贴壁筛选法分离犬的BMSCs,培养扩增,用免疫组化的方法进行鉴定;采用本实验室方法构建的生物材料--去细胞猪主动脉瓣为支架,种植犬的BMSCs,静态培养7～10 d;进行组织学切片及扫描、透射电镜观察,并进行机械力学性能检测.结果:分离的BMSCs细胞免疫组化显示SH2、Vimentin、α-SMA(+),CD34、Ⅷ因子、Laminin(-),生长扩增能力强,2周内经3代培养即可扩增到(5.57±0.34)×107细胞数量级;组织工程瓣组织学示活组织和细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)形成;扫描电镜见细胞贴附均匀,透射电镜可见分泌活性的肌纤维细胞样细胞(含actin/myosin纤维、胶原纤维、弹性蛋白);机械力学性能得到保留.结论:使用本方法可以构建成功组织工程心脏瓣膜;BMSCs与去细胞猪主动脉瓣的相容性良好,可以作为种子细胞之一.
- 欧阳辉刘维永陈文生李悟卫向阳顾春虎宿学家郑奇军
- 关键词：干细胞种子细胞
- 猪主动脉瓣膜去细胞基质体外酶解分析被引量：3
- 2006年
- 目的研究猪主动脉瓣膜去细胞基质的体外降解过程。方法应用胶原酶Ⅰ、弹性蛋白酶体外降解猪主动脉瓣膜去细胞基质,于不同时段观察降解失重率、降解液外观、蛋白及羟脯氨酸含量。结果胶原酶和弹性蛋白酶对猪主动脉瓣膜去细胞基质均有较强的降解作用,胶原酶的作用较弹性蛋白酶强。结论分析了猪主动脉瓣膜去细胞基质体外降解规律,为其可控性降解研究做了一定准备工作。
- 刘洋刘维永顾春虎李悟张近宝谭红梅
- 关键词：体外降解去细胞瓣膜细胞外基质
