国家自然科学基金(30300312)
- 作品数：9 被引量：55H指数：4
- 相关作者：侯明彭军朱媛媛张海燕初晓霞更多>>
- 相关机构：山东大学临沂市人民医院中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PAIgG初筛不能提高MAIPA的敏感性
- ＜正＞目的:评价血小板相关抗体 IgG（PAIgG）初筛能否提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术（MAIPA）对免疫性血小板减少性紫癜（ITP）诊断的敏感性。方法:用酶联免疫吸附竞争法检测 PAIgG,改良 MAIPA...
- 衣翠华候明朱媛媛秦平
- 文献传递
- 多种血小板特异性抗体联合检测在特发性血小板减少性紫癜诊断中的价值被引量：10
- 2004年
- 张海燕侯明张小红关向宏孙培玉朱媛媛
- 关键词：血小板特异性抗体特发性血小板减少性紫癜ITP细胞免疫
- PAIgG初筛不能提高MAIPA的敏感性
- ＜正＞目的：评价血小板相关抗体 IgG（PAIgG） 初筛能否提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术（MAIPA）对免疫性血小板减少性紫癜 （ITP）诊断的敏感性。
- 衣翠华侯明朱媛媛秦平
- 文献传递
- 特发性血小板减少性紫癜患者血浆及血小板洗脱液对正常人血小板聚集功能的影响被引量：4
- 2005年
- 张怡侯明朱媛媛秦平彭军丛雅琴张茂宏
- 关键词：人血正常人血小板减少ITP血小板聚集功能巨核细胞
- 人源化抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗体库的构建及临床价值被引量：3
- 2005年
- 目的筛选出抑制血小板聚集的血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa自身抗体,用噬菌体表面展示技术构建人源化抗血小板GPⅡb/Ⅲa单链噬菌体抗体(ScFv)库。方法用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)技术和血小板聚集试验筛选出血浆中含有抑制血小板聚集的血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者。从筛选出患者的外周血淋巴细胞中提取mRNA,用RT PCR扩增出人免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片断,用DNA linker将VH和VL连接成ScFv基因片断。用限制性内切酶SfiⅠ/NotⅠ酶切ScFv后克隆到噬菌体载体pHEN2,然后转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13K07援救转化后的TG1,产生ScFv。结果95例慢性ITP患者中41例(43.2%)血浆中抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体阳性,强阳性患者5例(5.3%)。2例(2.1%)明显抑制血小板聚集功能。扩增出380～400bp大小的VH和VL基因,用连接肽(Gly4Ser)3成功地连接成约780bp大小的ScFv片断。ScFv克隆到pHEN2并转化大肠杆菌TG1后,形成2.1×107个克隆。用辅助噬菌体M13K07援救TG1后产生的噬菌体抗体库滴度为1.62×1010cfu/ml。结论少数抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体可抑制血小板聚集功能。用噬菌体表面展示技术构建了ScFv库,可用来筛选人源化抗血小板GPⅡb/ⅢaScFv。
- 冀学斌侯明马道新李丽珍彭军王琳
- 关键词：人源化噬菌体表面展示技术RT-PCR扩增噬菌体M13血小板聚集试验
- 特发性血小板减少性紫癜和骨髓增生异常综合征NRAS与FMS基因突变的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）的发病机制并探讨其与骨髓增生异常综合征（MDS）的鉴别诊断。方法用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）方法检测MDS患者突变频率较高的NRAS基因12、13密码子及FMS基因301、969密码子点突变在中老年ITP患者及MDS患者中的出现频率。结果25例ITP患者中有1例存在NRAS基因突变，1例存在FMS基因301密码子突变；8例MDS患者中有3例出现基因突变，其中2例为NRAS基因突变，1例为FMS基因突变。结论PCR-SSCP方法检测NRAS基因12、13密码子，FMS基因301、969密码子突变有可能用于鉴别诊断ITP与MDS，ITP患者中出现NRAS基因、FMS基因突变者应归入MDS。
- 赵红玉侯明李小芳马道新刘奇迹王频
- 关键词：骨髓增生异常综合征
- 流式微球技术检测糖蛋白Ⅱb／Ⅲa自身抗体在特发性血小板减少性紫癜诊断中的应用被引量：9
- 2008年
- 目的建立流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（GPⅡb／Ⅲa）特异性自身抗体的方法，比较该方法和改良间接单克隆抗体俘获血小板抗原技术（MAIPA）在特发性血小板减少性紫癜（ITP）与非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值。方法应用抗人血小板GPⅡb／Ⅲa单抗（CD41a）包被微球。分离血小板，将血小板裂解后与包被过的微球孵育，再加入PE标记的羊抗人IgG多克隆抗体，流式细胞术分析。分别用该方法和改良间接MAIPA检测血小板表面和血浆中的糖蛋白特异性自身抗体，并将检测结果进行比较。结果将样本的平均荧光强度值（MFI）与正常对照MFI的均值比较，计算比率。该比率均值及范围在ITP组为3．36（0．84～22．94），非免疫性血小板减少组为1．16（0．67～5．59），正常对照组为1．08（0．72～1.76）。非参数检验得ITP组荧光强度比率与非免疫性血小板减少组及正常对照组存在显著差异（P〈0．01）。若将正常对照组上限作为界值，比率大于1．76定为阳性，则流式微球技术诊断ITP的敏感性为71．43％，特异性为94．28％，阳性预测值为95．24％，其敏感性高于改良间接MAIPA的测定值（51．79％）（x^2=4．57，P〈0．05）。由ROC曲线得流式微球法区分ITP患者与正常人的鉴别效度为0．916。结论流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体，耗时短、重复性好，敏感性高于改良间接MAIPA，对提高ITP的实验诊断水平及指导临床治疗有一定的价值。
- 刘新光王燕铭侯明张锑朱媛媛彭军
- 关键词：流式微球技术
- 人类血小板分子免疫学研究进展被引量：4
- 2004年
- 自身免疫性血小板减少性紫癜 (AITP)中血小板自身抗体通过其Fab段特异性结合血小板膜GP ,CD5 + 和CD5 - B细胞共同参与AITP发病过程 ,慢性AITP患者自身抗原决定簇的数量有限 ,部分患者GP特异性自身抗体源于寡克隆B淋巴细胞增生。在AITP中通过阻断共刺激信号能够诱导血小板抗原特异性T细胞免疫耐受 ,其耐受机制为T细胞免疫无能。霉酚酸酯治疗激素耐药AITP的有效性与其对患者细胞和体液免疫功能的有效调节有关。血浆TPO水平测定有助于鉴别血小板破坏增多、骨髓增生低下或严重受抑所致的血小板生成减少 ,且对难治性贫血与慢性再生障碍性贫血的鉴别诊断具有重要意义。TPO检测可作为原发性与继发性血小板增多的实验室鉴别诊断指标。奎宁和肝素能够诱导药物相关自身抗体 ,引起血小板减少。PCR SSP方法可用于新生儿HPA基因的产前检测及大规模研究不同人群HAP的基因分型。人类血小板糖蛋白上存在红细胞A、B、H血型抗原 ,A2亚型血小板可以作为O型血小板输注而不致引起抗血型A免疫反应。生物素可干扰标记血小板的功能。
- 侯明彭军
- 关键词：血小板分子免疫学自身免疫性血小板减少性紫癜
- 冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制(英文)被引量：16
- 2005年
- 目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。
- 刘加军李桥潘祥林彭军吴祥元李铭权林东军林曲黄仁魏
- 关键词：冬凌草甲素CASPASE-3细胞凋亡NB4细胞白血病
- 利妥昔单抗治疗糖皮质激素无效的特发性血小板减少性紫癜疗效观察被引量：9
- 2008年
- 目的探讨利妥昔单抗治疗特发性血小板减少性紫癜（ITP）的疗效、安全性及治疗前后B细胞、血小板膜糖蛋白（GP）特异性自身抗体的变化。方法利妥昔单抗（375mg／m^2，每周1次，连用4周）治疗12例糖皮质激素治疗无效的ITP患者，监测治疗前后的血常规、血清免疫球蛋白定量（IgG、IgM、IgA）、血小板GPⅡb／Ⅲa和（或）GPⅠb／Ⅸ特异性自身抗体、CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD19^＋、CD20^＋细胞数。结果4例完全有效，3例部分有效，2例微效，3例无效。随访中位时间5（0．5～12）个月，疗效均维持较好。有效患者治疗后血小板自身抗体均转阴。治疗前后血清IgG、IgM、IgA无明显变化，CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞数无明显变化。治疗后CD19^＋／CD20^＋细胞数（4．1±2．2）×10^6／L与治疗前（295．0±86．4）×10^6／L比较明显下降（P〈0．01）。无严重不良反应。结论利妥昔单抗治疗糖皮质激素无效的ITP患者安全、有效。
- 王文俞庆宏张海燕初晓霞陈峰张春青周郁鸿侯明
- 关键词：利妥昔单抗
