甘肃省科技支撑计划(0804NKCA115)
- 作品数：8 被引量：22H指数：2
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- PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosawith mannose sensitive hemagglutina-tion pili,PA-MSHA)疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞(dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)的抑制作用。方法:rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3mRNA的表达水平。结果:PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达较对照组明显升高(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β(P<0.05),CD4、CD25的表达及Foxp3mRNA水平均较对照组明显降低(P<0.05)。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。结论:PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。
- 刘媛媛张连生柴晔曾鹏云岳玲玲吴重阳李莉娟
- 关键词：急性髓细胞白血病树突状细胞调节性T细胞
- 香菇多糖促进急性髓细胞性白血病患者DC的成熟并增强其功能被引量：1
- 2010年
- 目的:研究香菇多糖(lentinan,LNT)对急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者树突状细胞(den-dritic cell,DC)成熟及功能的影响,探索白血病免疫治疗的新途径。方法:分离AML完全缓解期患者(AML-complete remis-sion,AML-CR)的骨髓单个核细胞(bone marrowmononuclear cell,BMC),用GM-CSF和IL-4诱导7d培养DC,然后分组:LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48h后以瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态,流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达,ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC,ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。结果:体外实验中,LNT处理后DC呈典型树突状形态;其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调(P<0.05);DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高(P<0.05),且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示,LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高(P<0.05)。结论:LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。
- 王玉虹张连生柴晔曾鹏云宋飞雪岳玲玲李利娟吴重阳易良才刘瑛
- 关键词：香菇多糖急性髓细胞性白血病树突状细胞
- 硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性及其机制被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤敏感性的可能机制。方法:流式细胞术和real-time PCR检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞表面MHCⅠ类链相关分子A(major histocompatibility complex classⅠchain-related molecule A,MICA)蛋白和mRNA的表达,LDH释放法检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果:硼替佐米处理后,K562/ADM细胞表面MICA蛋白表达率上升[(17.03±4.94)%vs(23.77±5.26)%,P<0.05];处理后K562/ADM细胞MICA mRNA的表达水平是处理前的(2.03±0.33)倍。效靶比为10∶1、20∶1时,NK细胞对硼替佐米处理后的K562/ADM细胞的杀伤率上升[(23.22±3.03)%、(30.30±0.74)%vs(33.69±1.28)%、(41.40±1.97)%,P<0.05]。结论:硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与硼替佐米上调K562/ADM细胞MICA表达有关。
- 张虹丽曾鹏云邓黎黎张连生柴晔岳玲玲吴重阳李莉娟郝正栋李亮亮
- 关键词：硼替佐米
- IL-21对慢性粒细胞白血病患者调节性T细胞的影响
- 2012年
- 目的:观察白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的作用,为CML的免疫治疗提供新思路。方法:收集兰州大学第二医院血液科初诊CML患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),免疫磁珠法分选出CD4+T细胞。分别加入50、100、200 ng/ml IL-21与CD4+T细胞共培养72 h后,流式细胞术检测Treg的比例,并设生理盐水空白对照组。Real-time PCR法检测Treg细胞中Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中IL-10、TGF-β的水平。结果:与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml IL-21组CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例均降低[(3.42±0.76)%、(6.81±0.33)%、(7.98±0.76)%vs(12.09±0.91)%,P<0.05];且3组的Foxp3 mRNA均降低[(0.05±0.02)、(0.16±0.02)、(0.25±0.02)vs 1,P<0.05];Treg分泌IL-10量减少[(26.13±7.28)、(44.88±3.72)、(79.77±3.94)vs(133.00±12.32)pg/ml,P<0.05],分泌TGF-β量也减少[(9.25±0.84)、(16.70±1.00)、(20.47±1.60)vs(26.05±1.81)pg/ml,P<0.05]。结论:IL-21在体外可减少CML患者外周血中Treg的比例,并抑制其功能。
- 王东萍张连生曾鹏云易良才
- 关键词：IL-21
- DC-CIK对急性髓细胞白血病干细胞的杀伤作用被引量：9
- 2011年
- 目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对急性髓细胞白血病细胞株KG-1a中白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用。方法:分离健康人外周血单个核细胞,贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL-2、IL-1、IFN-γ和CD3 mAb诱导培养CIK。将KG-1a细胞冻融物作为抗原负载DC(即Ag-DC),与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK),无抗原负载的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK),单独CIK作为空白对照组,与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+CD38-CD123+白血病干细胞的比例。DC-CIK与KG-1a细胞共培养,流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+CD38-CD123+细胞的凋亡率。结果:外周血单个核细胞成功诱导DC。CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+CD56+细胞比例为(17.36±4.44)%、(28.22±3.66)%和(36.16±5.88)%,依次升高(P<0.05)。与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+CD38-CD123+细胞比例显著降低[(8.78±0.62)%vs(3.95±0.53)%、(3.03±0.62)%,P<0.01〗。DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡,凋亡率由(2.34±0.74)%上升至(12.27±1.01)%,但对其中CD34+CD38-CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用。结论:DC联合CIK能杀伤急性髓细胞白血病干细胞,但无明显的诱导凋亡作用。
- 张阳张连生曾鹏云吴重阳易良才白俊
- 关键词：树突状细胞
- 急性白血病患者外周血Treg细胞与Th17细胞的相关性被引量：9
- 2011年
- 目的:检测急性白血病患者外周血中Treg细胞与Th17细胞的比例以及相关细胞因子如IL-17、IL-6、TGF-β的变化,分析其相关性。方法:选取兰州大学第二医院血液科急性白血病初诊患者15例,另取15名健康志愿者为对照。流式细胞术检测外周血中CD3+CD4+TIL-17+辅助性T细胞(Th17细胞)、CD4+TCD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)占CD4+T细胞的比例,ELISA法检测血清中细胞因子IL-17、TGF-β、IL-6的水平。结果:急性白血病患者外周血中Th17细胞占CD4+T细胞的(1.39±0.24)%,高于对照组的(0.26±0.11)%(P<0.05);急性白血病患者外周血Treg细胞占CD4+T细胞的(11.58±2.17)%,高于对照组的(2.47±0.72)%(P<0.05);且Treg细胞与Th17细胞呈正相关(γ=0.37)。急性白血病患者血清中TGF-β、IL-6、IL-17的水平分别为(26.06±2.43)、(14.66±2.47)、(18.63±2.38)pg/ml,高于对照组的(13.41±1.92)、(1.44±0.29)、(10.34±1.71)pg/ml(均P<0.05)。结论:急性白血病患者外周血中Treg、Th17细胞比例升高,且两者呈正相关;急性白血病患者血清中TGF-β、IL-6、IL-17水平升高,可能影响Treg与Th17细胞的平衡。
- 黄建霞张连生易良才曾鹏云吴重阳白俊
- 关键词：急性白血病调节性T细胞TH17细胞TGF-IL-17
- Toll样受体7及9在慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞内的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:研究Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)mRNA及TLR9 mRNA在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)内的表达及pDC分泌干扰素-α(interferon-α,IFN-α)的能力。方法:收集兰州大学第二医院血液科2010年11月至2011年7月间收治的30例CML患者(初诊未治组15例,缓解组15例)和体检中心的15例健康对照者,运用免疫磁珠法分选外周血pDC,利用real time-PCR检测pDC内TLR7及TLR9 mRNA表达水平。CpG ODN 2216刺激pDC 24 h后,ELISA检测上清液中IFN-α水平。结果:初诊组CML患者外周血pDC内TLR7 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.34±0.11)vs(0.93±0.21),P<0.05],初诊CML患者TLR9 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.44±0.15)vs(0.94±0.18),P<0.05]。CpG ODN 2216刺激后,初诊组pDC产生的IFN-α明显低于缓解组及健康对照组[(408.61±77.11)vs(611.39±84.86)、(651.67±93.39)ng/L,P<0.05]。结论:CML患者pDC内TLR7和TLR9 mRNA明显降低可能是pDC功能缺陷的主要原因,提示TLR7和TLR9可能参与CML的发病。
- 段丽芳张连生岳玲玲柴晔曾鹏云吴重阳李莉娟
- 关键词：慢性粒细胞白血病浆细胞样树突状细胞TOLL样受体7TOLL样受体9
- 重组可溶性MICA蛋白负调控NK细胞对白血病细胞的杀伤活性
- 2012年
- 目的:体外研究重组可溶性MHCⅠ类分子相关A(soluble MHC classⅠchain-related gene A,sMICA)蛋白对自然杀伤细胞(natural killer cell,NK cell)表面活化性受体NKG2D(natural killer group 2 member D)的表达、杀伤白血病细胞的活性和分泌IFN-γ的影响。方法:免疫磁珠分选健康人外周血NK细胞,分为空白对照组、重组sMICA组(200、500、800μg/L三亚组),相互作用24 h后,流式细胞术检测NK细胞NKG2D表达水平,LDH释放法检测NK细胞对白血病细胞K562的杀伤活性,ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平。结果:200、500、800μg/L sMICA作用组与对照组相比,NK细胞表面NKG2D的表达均下调[(68.79±6.87)%,(55.75±9.31)%、(45.14±5.70)%vs(92.75±6.91)%,P<0.05或P<0.01],均抑制NK细胞杀伤白血病细胞K562的活性[(18.67±2.35)%、(15.01±2.25)%、(7.33±2.52)%vs(36.33±2.51)%,P<0.05或P<0.01],均抑制IFN-γ的分泌[(164.48±22.48)、(112.71±10.89)、(70.23±9.64)vs(313.72±16.06)pg/ml,P<0.05,P<0.01]。结论:急性白血病细胞表面脱落的sMICA可下调NK细胞NKG2D的表达和IFN-γ的分泌,抑制了NK细胞对白血病细胞的杀伤活性。
- 杨新蔚张连生柴晔曾鹏云吴重阳岳玲玲李莉娟郝正栋李亮亮
- 关键词：NK细胞NKG2D杀伤
