国家自然科学基金(30271214)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- 贝氏柯克斯体34×10^3重组外膜蛋白的免疫保护性
- 2004年
- 目的 :原核细胞表达贝氏柯克斯体 34× 10 3 外膜蛋白基因 ,评价 34× 10 3 重组外膜蛋白的免疫保护性。方法 :用PCR从我国贝氏柯克斯体分离株的基因组中扩增 34× 10 3 外膜蛋白基因 ,用该基因与原核表达质粒重组 ,构建重组表达质粒 ;用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌细胞内表达重组蛋白。用重组蛋白皮下接种免疫BALB/c小鼠2次 ,在加强免疫后的第 2 8天 ,用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平以及作体外脾淋巴细胞增殖试验检查小鼠的特异性细胞免疫水平 ;用 10ID50 贝氏柯克斯体腹腔注射攻击免疫小鼠 ,攻击后第 7天病理学检查小鼠脏器的组织病变和染色镜检脾脏的贝氏柯克斯体。结果 :SDS PAGE和免疫印迹分析证明重组质粒转化的大肠杆菌产生了 34× 10 3 重组蛋白 ,重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清发生特异性反应。ELISA法检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组蛋白抗体 ,免疫小鼠的体外淋巴细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠。组织病理学检查发现免疫小鼠的肺、肝、脾无明显病变 ,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体 ,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显 ,脾脏肿大并含有大量的柯克斯体。结论 :重组 34× 10 3 外膜蛋白具有的免疫保护性 。
- 魏文进温博海邱玲牛东升陈梅玲高宁
- 关键词：贝氏柯克斯体外膜蛋白基因表达重组蛋白免疫保护性
- 贝氏柯克斯体热休克蛋白B基因的克隆与表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)热休克蛋白B(HspB)基因并在大肠杆菌细胞内高效表达。方法采用PCR方法,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增出HspB的基因片段,鉴定后将目的片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组表达质粒pQE30/hspB,IPTG诱导该重组质粒转化的大肠杆菌产生HspB重组蛋白。结果(1)PCR扩增获得长约1556bp的hspB基因片段。(2)SDS-PAGE证明,HspB重组蛋白的分子量为53.7kDa。(3)经薄层扫描分析,表达蛋白约占全菌体蛋白的71.2%。结论贝氏柯克斯体hspB基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为Q热疫苗的研制提供了一易于获得的候选蛋白分子。
- 李青凤牛东升温博海邱玲陈梅玲
- 关键词：贝氏柯克斯体热休克蛋白基因克隆
- 贝氏柯克斯体30kD外膜蛋白基因表达及免疫保护性的研究被引量：1
- 2004年
- 魏文进温博海牛东升陈梅玲邱玲高宁
- 关键词：贝氏柯克斯体基因表达免疫保护性菌株
- 表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27000外膜蛋白的重组卡介苗构建被引量：2
- 2005年
- 目的:构建能够表达胞壁结合型贝氏柯克斯体 27 000外膜蛋白的重组卡介苗。方法:用PCR技术从卡介苗基因组扩增分枝杆菌 19 000抗原的细胞壁结合区基因和从贝氏柯克斯体基因组扩增 27 000外膜蛋白基因,将它们分别插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒 (pSMT3)的XbaⅠ /BamHⅠ和BamHⅠ /HindⅢ位点。将重组的穿梭质粒转化大肠杆菌并从大肠杆菌提取重组穿梭质粒转化卡介苗。结果:从含潮霉素的培养基筛选到具有该抗生素抗性的重组卡介苗菌落,用免疫印迹分析重组质粒转化的卡介苗,发现一约 27 000的蛋白带与贝氏柯克斯体 27 000重组蛋白免疫兔血清发生特异性反应; 27 000重组蛋白免疫兔血清做间接免疫荧光检测重组卡介苗,结果为阳性。结论:重组卡介苗能表达贝氏柯克斯体 27 000外膜蛋白,表达的 27 000外膜蛋白存在于卡介苗菌体表面,卡介苗菌体表面的 27 000抗原可能诱导抗Q热免疫应答。
- 牛东升温博海邱玲陈梅玲李青凤
- 关键词：贝氏柯克斯体外膜蛋白卡介苗穿梭质粒基因表达
- 贝氏柯克斯体表面抗原基因p1与hspB的融合基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 将贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii)表面抗原P1蛋白基因与热休克蛋白B(HspB)基因片段融合 ,并使该融合基因在大肠杆菌细胞内表达 ,产生P1 HspB融合蛋白。 方法 采用PCR方法 ,从贝氏柯克斯体新桥株基因组DNA中扩增P1蛋白基因 (p1)和HspB蛋白基因 (hspB)片段 ,将两基因片段分别与原核表达载体 pQE30连接 ,分别构建重组表达质粒pQE30 / p1和pQE30 /hspB。用BamHI和SacIDNA内切酶将 p1基因片段从 pQE30 /p1切下并与 pQE30 /hspB的hspB连接 ,构建重组质粒 pQE30 / p1 hspB。用IPTG诱导pQE30 / p1 hspB转化的大肠杆菌表达融合基因 p1 hspB。 结果 SDS PAGE分析发现 pQE30 /p1 hspB转化的大肠杆菌表达一 83kDa融合蛋白 ;经薄层扫描分析 ,该融合蛋白约占到全菌体蛋白的 12 .1% ;免疫印迹分析发现该融合蛋白能被贝氏柯克斯体感染小鼠血清所识别。结论 构建的 p1 hspB融合基因在大肠杆菌中得到了有效表达 ,表达的P1 HspB融合蛋白能与抗贝氏柯克斯体抗体特异反应 ,P1
- 李青凤牛东升温博海邱玲陈梅玲
- 关键词：贝氏柯克斯体表面抗原基因重组融合蛋白
