国家自然科学基金(30271217)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
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- ω-6脂肪酸脱氢酶基因在乳腺癌细胞内的表达和作用被引量：8
- 2005年
- 为探讨ω- 6脂肪酸脱氢酶基因fat -1在人类乳腺癌细胞MCF- 7中表达和对其生长的作用,将fat -1基因插入到腺病毒载体中,构建腺病毒重组载体(Ad·GFP·fat1) .通过包装细胞系(2 93)产生重组腺病毒,感染MCF 7细胞.用核糖核酸酶保护性分析技术,检测fat -1基因在MCF- 7细胞内的表达,细胞增殖试剂盒(MTT)和凋亡染色试剂盒染色分析fat 1基因对MCF- 7细胞增殖和凋亡的影响,用酶联免疫分析花生酸类(eicosanoids)前列腺素E2 (prostaglandinE2 )的含量.结果显示,腺病毒介导的fat- 1基因能在MCF- 7细胞内有效异源表达,抑制MCF -7细胞的增殖且导致凋亡,前列腺素的含量也明显地减少.结果说明,fat- 1基因在乳腺癌的基因治疗中具有良好利用价值.
- 葛银林耿芳宋张金玉张峥李馨田润华徐文华
- 细胞膜脂肪酸组成改变促进乳腺癌细胞凋亡的研究被引量：2
- 2006年
- 目的:研究n6脂肪酸脱氢酶fat1基因在人乳腺癌细胞内的表达,改变细胞膜脂肪酸组成,对乳腺癌细胞的凋亡作用。方法:构建含有fat1基因的重组腺病毒载体(Ad.GFP.fat1),通过包装细胞系(293)产生的腺病毒,感染人乳腺癌细胞MCF7。提取细胞的总RNA,以fat1的反义mRNA作探针,用Northernblot检测fat1基因在MCF7细胞内的表达。MTT法分析fat1基因对MCF7细胞增殖的影响,凋亡染色试剂盒检测细胞的凋亡。气相色谱仪分析对MCF7细胞的n6PUFAs/n3PUFAs含量影响。结果:通过基因重组技术,得到预期的重组病毒;fat1基因在人乳腺癌细胞MCF7中能有效异源表达,2d后,可检测到fat1mRNA的条带。与对照细胞相比,fat1基因有效地抑制了MCF7细胞的增殖(23%,p<0.05),促进了凋亡(增加35%);同时降低了人乳腺癌细胞MCF7细胞膜n6PUFAs/n3PUFAs的比率。结论:腺病毒介导的fat1基因能在人乳腺癌细胞MCF7内有效异源表达,且抑制了MCF7细胞的增殖。机理为降低了细胞膜的n6PUFAs/n3PUFAs的比率。
- 侯琳葛银林耿芳宋薛美兰
- 关键词：多不饱和脂肪酸乳腺癌基因治疗
- fat-1转基因小鼠的构建与鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的构建和鉴定携带有外源fat-1基因的转基因小鼠。方法将fat-1基因的cDNA与动物表达载体pEF-neo连接,构建pEF-fat-1重组质粒,酶切、测序鉴定正确后,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、Southern blot杂交等方法确立阳性整合有目的基因的G0代小鼠。结果成功构建了pEF-fat-1重组质粒,将其显微注射到小鼠受精卵中,得到G0代小鼠,PCR、Southern blot杂交确立了4只整合有fat-1基因的首建鼠。结论fat-1基因可整合到小鼠体内,得到的转基因小鼠为研究fat-1基因的生物学功能提供了动物模型。
- 刘晓蕾侯琳蒋正尧葛银林
- 关键词：小鼠转基因DNA
