浙江省教育厅科研计划项目(Y200906376)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：单培仁黄伟剑黄周青卜军余灵芳更多>>
- 相关机构：温州医科大学上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划国家自然科学基金温州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 类法尼醇X受体拮抗剂可减轻高脂载脂蛋白E基因敲除小鼠心肌缺血再灌注损伤
- 2013年
- 目的探讨类法尼醇x受体（FXR）拈抗剂对高脂载脂蛋白E（ApoE）基因敲除（ApoE_-/-）小鼠心肌缺血再灌注（I／R）损伤的影响及其机制。方法取雄性ApoE_-/-小鼠，分为3组：（1）标准ApoE_-/-组（n=18）：予标准鼠料喂养12周后建立心肌I／R模型；（2）高脂ApoE_-/-组（n=22）：予高脂鼠料（含1．25％胆固醇）喂养12周后建立心肌I／R模型；（3）高脂ApoE_-/-＋FXR拮抗剂组（n=17）：予高脂鼠料喂养12周后建立心肌I／R模型，心肌I／R前30min给予FXR拮抗剂Z—guggulsterone（100mg／kg）。荧光实时定量PCR（RT—qPCR）检测FXR基因变化，伊文斯兰及氯化三苯基四氮唑（TFC）双染色法检测心肌梗死面积，TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定心肌线粒体细胞色素C释放，荧光底物法检测caspase-9、12、8和3的活性，RT—qPCR检测BAX、BCL-2、CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、自杀相关因子（Fas）和自杀相关因子配体（FasL）等基因的表达水平。结果高脂ApoE_-/-组小鼠心肌组织FXRmRNA表达水平显著高于标准ApoE_-/-组（P〈0．01）。高脂ApoE_-/-组小鼠心肌I／R诱导心肌梗死面积显著高于标准ApoE_-/-组[（62．1±7．0）％比（33．8±5．8）％，P〈0．01]，心肌细胞凋亡指数亦显著高于标准ApoE_-/-组[（36．8±5．7）％比（17．2±3．8）％，P〈0．01]。高脂ApoE_-/-＋FXR拮抗剂组小鼠心肌梗死面积则显著小于高脂ApoE_-/-组[（24．4±4．7）％比（62．1±7．0）％，P〈0．01]，心肌细胞凋亡指数亦显著低于高脂ApoE_-/-组[（13．8±2．7）％比（36．8±5．7）％，P〈0．01]，细胞凋亡的线粒体通路激活的标志物（线粒体细胞色素c释放、caspase-9以及BAX／BCL-2表达比例）和内质网应激通路的标志物（caspase-12活性以及CHOP表达）均较高脂ApoE_-/-组低（P均〈0．01），而膜受体死亡通路的标志物（
- 童欢单培仁赵怡超袁安彩何清幺天保应小盈卜军何奔
- 关键词：心肌再灌注损伤
- 激动维甲类X受体抑制心肌细胞缺氧／复氧损伤被引量：5
- 2013年
- 目的探讨激动维甲类X受体（retinoid X receptor，RXR）对大鼠心肌细胞H9c2缺氧／复氧（ hypoxia-reoxygenation, H/R）损伤的保护作用及其机制。方法将心肌细胞缺氧2h／复氧4h，建立H／R损伤模型。以9-顺式维甲酸（9-cis retinoid acid, c-RA）为RXR激动剂，HX531为RXH拮抗剂，实验随机（随机数字法）分4组：健康对照组（N组）、H／R损伤组、H／R＋100nmoL／Lc-RA组（RA组）、I-I／R＋100nmo]／Lc—RA＋2．5ixmoL／LHX531组（HX组），MTT法检测细胞活性，流式细胞技术检测细胞凋亡比例，荧光探针JC-1测定线粒体膜电位，Westernblot印迹法检测Bcl-2、Bax及活性片段Caspase-9蛋白表达。所有计量资料以均数±标准差（i±5）表示，采用单因素方差分析，Dennett-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果c-RA明显抑制H／R损伤引起的细胞活性下降、凋亡增加、线粒体膜电位下降，Westernblot印迹检测发现，H／R损伤组Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达明显增加，Bcl-2表达明显下降，c—RA预处理后能明显下调Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达及上调Bcl-2表达，而所有这些保护作用均被RXR拮抗剂HX531阻断。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞H／R氧化应激损伤，其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。
- 单培仁黄周青卜军黄伟剑
- 关键词：心肌细胞缺氧复氧
- 调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响被引量：6
- 2013年
- 目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧,复氧(H/R)损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h/复氧4h,建立H/R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤(3-MA)为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组:正常对照组(C组)、H/R组、H/R+100 mol/L 3-MA组(M+H/R组)、H/R+100 nmol/L雷帕霉素(R+H/R组),应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果 H/R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加(P<0.01),Western blot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax/Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加(P<0.01);M+H/R组H/R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制(P<0.01);而R+H/R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生(P<0.01)。结论自噬在H9c2心肌细胞H/R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H/R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。
- 单培仁余灵芳黄周青黄伟剑
- 关键词：自噬心肌细胞缺氧复氧
