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牛源致病性大肠杆菌floR基因的克隆、表达及其抗体的制备被引量：1: 2008年; 将耐氟苯尼考大肠杆菌的floR基因部分基因片段插入pGEX-4T-2原核表达载体中,构建以BL21(DE3)Codon Plus为宿主菌的原核表达体系。通过优化诱导条件,确定了floR1基因能在pGEX/BL21(DE3)codon plus中高效表达,且表达的重组蛋白为包涵体形式。对包涵体进行溶解复性后,将复性融合蛋白过GST亲和层析柱得到纯化的GST-FloR1融合蛋白。并以GST-FloR1融合蛋白为抗原免疫小鼠,成功制备出抗GST-FloR1融合蛋白的抗体。抗体的制备为FloR蛋白定位及其对氟苯尼考药物泵出功能抑制的研究奠定了基础。; 吴蓓蓓沈建忠; 关键词：氟苯尼考基因克隆原核表达

氟苯尼考耐药菌的构建及大肠杆菌中FloR蛋白定位被引量：4: 2008年; 通过对floR基因序列的分析,将扩增的包含floR基因上游调控序列及下游终止序列的约1 550 bp DNA片段克隆到pGEM-T easy载体上,成功构建了pGEM-floR质粒,将质粒转入JM109中,药物敏感性试验显示构建的pGEM-floR/JM109基因工程菌对氯霉素和氟苯尼考高度耐药,对四环素和庆大霉素敏感。本试验成功构建了一个基因背景清楚且对氟苯尼考耐药的细菌模型,排除了细菌中其他氟苯尼考耐药基因或泵出蛋白对floR基因贡献细菌耐药表型及进一步试验的影响。分别提取CVM1841、pGEM-floR/JM109、pGEM/JM109和JM109膜蛋白,运用实验室制备的鼠抗GST-FloR1抗体进行免疫印迹反应,蛋白定位显示FloR蛋白位于细菌的细胞膜上。本试验结果证实floR基因编码的蛋白位于细胞膜,并贡献细菌对氯霉素和氟苯尼考的交叉耐药性。; 吴蓓蓓杜向党; 关键词：氟苯尼考基因克隆蛋白定位

大肠杆菌对氟苯尼考分子耐药机制的研究: 利用原核表达体系对贡献大肠杆菌对氟苯尼考、氯霉素及甲砜霉素交叉耐药的floR基因进行表达研究。将克隆到pGEX-4T-2表达载体的floR基因片段在BL21-coden plus(DE3)-RP中诱导表达。SDS-PAG...; 吴蓓蓓杜向党夏春吴聪明沈建忠; 关键词：氟苯尼考原核表达蛋白定位; 文献传递

牛源致病性大肠杆菌耐氟苯尼考floR基因的克隆与序列分析被引量：10: 2005年; 对临床分离的12株牛腹泻大肠杆菌进行了血清型鉴定,毒力因子分析和MICs值测定。利用PCR方法对上述致病性大肠杆菌进行了floR基因的检测,其中5株floR阳性。对其中的3株大肠杆菌的耐氟苯尼考floR基因进行了克隆和序列分析。结果表明,克隆的floR基因所推倒的氨基酸序列与其他12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与已报道的floR序列间仅存在1个或2个氨基酸替代。; 杜向党吴蓓蓓沈建忠; 关键词：致病性大肠杆菌氟苯尼考血清型鉴定 PCR方法牛腹泻外输泵

氯霉素类药物耐药机制的研究进展被引量：50: 2004年; 氯霉素类药物包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。此类药物抗菌谱广、吸收快、体内分布广泛 ,因而在兽医临床上发挥着举足轻重的作用 ,其耐药性也倍受重视。文章对此类药物耐药的特点、现状、生化机制和分子机理方面的研究进行了综述 ,以便正确理解此类药物耐药性的特点及其进化的规律。; 杜向党阎若潜沈建忠; 关键词：兽药氯霉素类药物耐药性氟苯尼考氯霉素甲砜霉素

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国家自然科学基金(30170715)