广西壮族自治区自然科学基金(2012GXNSFAA053074)
- 作品数：6 被引量：28H指数：3
- 相关作者：谢志勤谢丽基庞耀珊谢芝勋范晴更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西特聘专家专项经费资助项目广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒E2结构蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：4
- 2014年
- 根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒囊膜糖蛋白E2基因设计1对特异性引物,以Oregon CV24株为模板,PCR扩增目的片断后与pET-32a原核表达载体连接,转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物,结果表明重组E2蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子量为57.7 ku。可溶性分析表明重组E2蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行western-blot检测。结果表明:E2重组蛋白均具有反应原性,能与BVDV的阳性血清进行反应。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：BVDVE2原核表达
- 牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白的原核表达及鉴定被引量：3
- 2014年
- 旨在制备高纯度的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3蛋白,为建立牛病毒性腹泻ELISA检测试剂盒奠定基础,用于区分疫苗免疫和野毒感染。根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3基因设计一对特异性引物,用PCR扩增1 206bp目的片段,克隆到pET-32a表达载体,成功构建重组质粒pET-32a-NS3。将重组质粒转化大肠埃希菌Transetta(DE3)用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析,结果表明重组NS3蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子质量为61ku。可溶性分析表明重组NS3蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行Western blot鉴定,结果表明表达的NS3重组蛋白能与BVDV的阳性血清反应。说明所制备的NS3蛋白反应性好,可用作ELISA的包被抗原。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒NS3原核表达
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及临床效果评价被引量：2
- 2014年
- 旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的囊膜蛋白E2基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接E2-ELISA检测方法,证实该方法的特异性、敏感性和重复性均较好。用所建立的E2-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份血清样品,检出率为24.8%;与商品化试剂合作比较,符合率为95%。结果表明,建立的E2-ELISA方法简便易行,适用大量样本检测,可用于BVDV的抗体水平监测及牛病毒性腹泻的流行病学调查。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白BOVINE
- 牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立被引量：17
- 2015年
- 用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒ELISA
- 广西牛病毒性腹泻病毒GX4分离株全基因测序及序列分析被引量：2
- 2015年
- 牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)属于瘟病毒属,是养牛业中常见的病原体。通过MDBK细胞首次从广西分离获得1株牛源牛病毒性腹泻病毒,命名为GX4。设计引物对其全基因组进行扩增,获得其全基因序列,测序结果表明,GX4全基因组为12 218bp,编码3 898个氨基酸,GenBank登录号JN704144.1。对全基因序列进行分析,根据其5′-UTR,确定GX4属于BVDV-1b基因亚型;与BVDV其他参考毒株的比对发现,GX4与巴西分离株IBSP4ncp同源性最高,核苷酸同源性为94.4%,推导氨基酸同源性为96.2%,并且P125基因无外源序列插入,属于非细胞病变型。分子流行病学的结果,揭示了目前流行株的差异性,为该病的防控措施的制定提供参考。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：BVDV分子流行病学
- 牛病毒性腹泻病毒E2基因在烟草中的表达被引量：2
- 2014年
- 研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的囊膜糖蛋白E2基因在烟草中表达及其表达产物的反应原性。根据GenBank中BVDV的基因序列设计特异引物,构建含有E2基因的植物表达载体pBI121-E2,农杆菌介导的叶盘法转化烟草,卡那霉素筛选获得抗性植株。结果显示:通过PCR扩增和real-time PCR方法检测获得5株低拷贝的转E2基因的烟草。Western blot检测显示烟草中表达的E2蛋白可以被牛病毒性腹泻病毒的阳性血清识别,具有反应原性。本研究为利用植物作为生物反应器生产E2口服疫苗的研发与应用奠定了基础。
- 王盛谢芝勋范晴谢丽基邓显文黄莉谢志勤刘加波庞耀珊罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2基因植物表达载体烟草口服疫苗
