浙江省重点科技计划(2005C12019-02)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：曹家树余小林向珣叶纨芝王华新更多>>
- 相关机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省重点科技计划宁波市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 芜菁花粉发育相关基因Bc MF2r的分子克隆及其生物信息学分析
- 2006年
- 根据白菜花粉特异的多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF2的全长序列设计引物,通过PCR直接扩增的方法从温州盘菜芜菁(Brassica campestrisL.spp.rapiferacv.Wenzhoupancai)中克隆到了BcMF2的同源基因,命名为BcMF2 r.经与白菜BcMF2基因序列比较,DNA全长序列相似性高达90%.Blast搜索结果表明,BcMF2 r与拟南芥外切多聚半乳糖醛酸酶在氨基酸水平的的相似性为87%,推测BcMF2 r属于多聚半乳糖醛酸酶基因.BcMF2 r基因最大开放阅读框为1263 bp,编码420个氨基酸序列,编码的蛋白质分子量为43.8 kDa,等电点为8.108;碱性氨基酸(K,R)36个;酸性氨基酸(D,E)32个;疏水氨基酸(A,I,L,F,W,V)152个;极性氨基酸(N,C,Q,S,T,Y)113个.推导的氨基酸序列通过Prosite数据库查询,发现该序列包括3个N-糖基化位点,4个蛋白激酶C磷酸化位点,6个酪蛋白激酶II磷酸化位点,12个N-豆蔻酰化位点,1个多聚半乳糖醛酸酶活性位点(257RVTCGPGHGLSVGS)等.通过PROFsec预测BcMF2r蛋白质的二级结构,表明该蛋白含7.86%helix,46.90%sheet和45.24%loop.将BcMF2 r基因氨基酸序列与数据库中的其他植物PG序列进行同源序列比对,构建系统进化树,发现该基因具有所有PG基因特有的4个保守结构域,并且与花粉中特异表达的PG基因聚为一类,进一步证明了该基因可能是与花粉发育相关的多聚半乳糖醛酸酶基因,在花粉萌发和花粉管伸长中起作用.
- 张弢向珣叶纨芝余小林曹家树
- 关键词：芜菁花粉发育克隆生物信息学
- 白菜花药特异基因BcPRO的克隆及表达分析被引量：2
- 2008年
- 根据基因数据库已有的Profilin 4序列设计简并引物,在白菜花蕾cDNA中成功克隆到前纤维蛋白基因,命名为BcPRO,在基因库中的登陆号为EF492988.BcPRO基因编码区由405个核苷酸组成,编码134个氨基酸,推导的氨基酸序列与甘蓝型油菜和拟南芥的花粉前纤维蛋白分别有95%和92%的同源性.RT-PCR表明,BcPRO基因仅在保持系的Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级花蕾及Polima雄性不育系的Ⅲ级和Ⅳ级花蕾中表达,并且表达量逐级增大,而在莲座叶、花茎叶、茎、根及Ogura雄性不育系的所有部位均未能检测到.进一步研究发现,BcPRO基因在花药中表达,在萼片、花丝、雌蕊、花瓣等部位均未见表达.这些实验结果表明,BcPRO基因为花药特异基因,可能在花粉发育过程中起着重要作用,并且在相同核背景下,有着不同的细胞核-细胞质互作模式.文中还就不同植物花粉前纤维蛋白氨基酸序列进行了比对、分析.
- 蒋明曹家树
- 关键词：白菜雄性不育
- pBI121表达载体及其转化植株的快速鉴定被引量：8
- 2008年
- 以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体.根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达载体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamHⅠ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达载体的重组克隆.这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致.此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达载体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变.本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法.
- 王华新曹家树向珣余小林叶纨芝
- 关键词：植物表达载体转基因植株
