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葛根素对Aβ(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响被引量：11: 2008年; 目的:应用Aβ25-35孵育PC12细胞株制作细胞损伤模型,以研究葛根素对模型细胞凋亡的影响。方法:用Aβ25-35和葛根素对PC12细胞进行处理,MTT法检测干预后不同时间点的细胞活性,电镜观察细胞形态的改变,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的AnnexinⅤ及碘化丙锭(PI)双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,以确认药物的保护作用。结果:PC12细胞经过Aβ25-35处理后,细胞生存率下降,且呈现时间依赖性。电镜观察显示Aβ25-35可导致PC12细胞凋亡,使用葛根素后,模型细胞凋亡情况明显改善。流式细胞技术显示Aβ25-35损伤模型组凋亡率明显升高,使用葛根素后,细胞凋亡率下降,具有显著性差异(P<0.05)。结论:葛根素可拮抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。; 张海英胡海涛刘亦恒王洪权冯改丰陈国敏; 关键词：阿尔茨海默病葛根素凋亡

大黄素对过氧化氢诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用被引量：2: 2010年; 目的:应用过氧化氢(H2O2)孵育原代大鼠皮层细胞制作细胞损伤模型,研究大黄素对模型细胞凋亡的影响。方法:H2O2和大黄素对皮层细胞进行处理,MTT和LDH法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,倒置显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达。结果:与正常对照组比较,经150μmol/LH2O2处理后皮层细胞活性显著降低,ROS聚集增加,Hoechst33258荧光染色出现明亮的凋亡小体,大黄素预处理能改善其损害情况。Western blot法显示与正常对照组比较,H2O2可致Bcl-2表达显著减弱,Bax表达显著增强,而大黄素预处理可使其恢复到正常水平。结论:大黄素可拮抗过氧化氢诱导的皮层神经细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。; 刘涛胡海涛孙钦儒; 关键词：过氧化氢大黄素活性氧

β淀粉样前体蛋白裂解酶特异性小干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定被引量：2: 2005年; 目的构建β淀粉样前体蛋白裂解酶(BACE)特异性小干扰RNA真核表达载体。方法用PCR扩增BACE特异性小干扰RNA,转入带有增强型绿荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pUC19质粒,再将重组基因片段导入逆转录病毒真核表达载体pLXSN中,通过限制性酶切对该重组表达载体进行鉴定。结果成功构建了BACE真核表达载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE。结论pLXSN/EGFP-U6-siBACE载体的成功构建对进一步利用基因干扰技术治疗阿尔茨海默病的研究奠定了重要的基础。; 董炜疆胡海涛冯改丰杨广笑王全颖; 关键词：阿尔茨海默病

短干扰RNA对人β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达的影响(英文)被引量：1: 2006年; 目的探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNAs,siRNA)对BACE在神经母细胞瘤细胞中的表达的影响,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA(siBACE),随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN,通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN/ECFP-U6-siBACE进行鉴定;制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE;并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE,并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达,该研究将为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供重要的实验基础。; 董炜疆冯改丰宫惠琳刘苏虎胡海涛; 关键词：RNA干扰 BACE 基因阿尔茨海默病

β淀粉样肽1～42单克隆抗体的制备被引量：1: 2004年; 目的　制备稳定分泌β -淀粉样肽 1～ 4 2 (Aβ1-42 )单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,产生高效价抗体。方法　通过基因工程技术 ,将Aβ1-42 基因融合于乙肝核心抗原 (HBcAg)的主要免疫优势区 (MIR) ,制备Aβ和HBcAg的融合蛋白 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0细胞融合 ,筛选能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果　得到两株能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ1-42 单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 。结论　制备得到的Aβ1-42 单克隆抗体特异性强。; 董炜疆胡海涛冯改丰杨广笑王全颖; 关键词：Β-淀粉样肽单克隆抗体融合蛋白细胞融合

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国家自然科学基金(30300395)