江苏省高校自然科学研究项目(07KJA23021)
- 作品数：19 被引量：88H指数：7
- 相关作者：秦爱建金文杰钱琨邵红霞陈欣虹更多>>
- 相关机构：扬州大学河南科技学院如东县畜牧兽医站更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立被引量：3
- 2010年
- 牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研究结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91.3%。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。
- 钱琨尹天燕赵士学黄大卢金文杰秦爱建
- 关键词：牛结核病单克隆抗体胶体金免疫层析
- 商品蛋鸡血管瘤和髓细胞瘤型J亚群禽白血病的分子诊断及病理学研究被引量：7
- 2009年
- 对江苏商品蛋鸡6个鸡场临床表现严重血管瘤鸡群的送检样品进行了病理学分析，结果发现，送检的6只商品蛋鸡均可见体表血管瘤，内脏主要在肝、脾、肌胃和肠系膜表面的大小不等的血管瘤，引起严重的肝破裂、脾脏失血和肌胃失血，6个病例中有4个病例出现血管瘤和髓样细胞瘤并存。追踪检测父母代蛋鸡表明，父母代蛋鸡场的各个日龄鸡群均存在不同程度的丁亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Vivus SubgroupJ，ALV-J感染；而送检商品病鸡均呈现病毒血症而抗体阴性，提示垂直传播的可能；ALV-J特异性RT-PCR结果显示，6个样品均存在ALV-J感染；对扩增克隆的部分序列分析可见，此六株病毒之间同源性为97．9％～99．6％，而与原型毒HPRS103之间的同源性则较低（94．6％～95．2％），与同为蛋鸡分离毒株AY360088和SD07LK1同源性为94．2％～95．0％。
- 吴晓平钱琨沈海玉王平平邵红霞金文杰秦爱建
- 关键词：血管瘤J亚群白血病
- J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立、优化与初步应用
- 为检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的感染,本研究用ALV-J感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立了检测ALV-J的降落PCR(Touchdown PCR,TD-PCR)方法,并对反应体...
- 杭柏林秦爱建钱琨金文杰沈海玉吴晓平仇钰
- 关键词：J亚群禽白血病病毒降落PCR病毒检测
- 文献传递
- 致鹅卵黄性腹膜炎E.coli fimFGH基因序列分析
- 2011年
- 为研究致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)fimFGH基因的变异情况,本实验根据GenBank中登录的序列设计引物,PCR扩增了3株致鹅卵黄性腹膜炎性E.coli E0238、E0239、E0240Ⅰ型菌毛的fimFGH基因并测序。序列比对分析结果表明,3株细菌的fimF、fimG和fimH基因及其所编码的蛋白序列同源性达96%以上,其中fimH编码蛋白的序列同源性达98%以上。序列变异分析结果显示,FimH蛋白的变异主要集中分布在FimH粘附素N末端的4个氨基酸位点N91(S)/S91N99、A48V以及N156K,仅有E0239菌株发生了A48V变异;FimF、FimG蛋白各有一个多变区域,分别位于FimF蛋白的111位～124位氨基酸和FimG蛋白的4位～16位氨基酸之间,其中E0238、E0239菌株FimF蛋白发生了A111S的变异,E0238和E0240菌株FimG蛋白发生了C4R/V9L的变异,但变异的具体意义还需要进一步研究。
- 钱琨张永志金文杰秦爱建
- 关键词：鹅卵黄性腹膜炎E.COLI
- 致蛋鸡血管瘤J亚群禽白血病病毒cDNA全序列分析被引量：7
- 2010年
- 【目的】了解近年来我国商品蛋鸡群中以血管瘤为主要表型的J亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus subgroup J,ALV-J）的分子生物学特性,为控制ALV-J在鸡群中流行提供基础资料。【方法】采用PCR扩增和序列分析技术,对分离自血管瘤或者血管瘤与髓样细胞瘤（Myeloid Leukosis,ML）并存的3株蛋鸡ALV-J毒株前病毒DNA的全序列及3株商品蛋鸡血管瘤型分离毒和1株商品蛋鸡ML型分离毒的致瘤关键性序列进行研究。【结果】来自血管瘤或者血管瘤与ML并存的商品蛋鸡分离毒株与来自肉鸡分离毒株的全序列差异明显,在遗传进化树上分属两个大的分支;研究发现商品蛋鸡血管瘤及ML混合病例分离毒JS09GY3与JS09GY6株的引物结合位点（Primer Binding Site,PBS）-Leader中出现极为罕见的连续19bp的插入突变,其与劳斯相关病毒1（Rous Associated Virustype1,RAV-1）、劳斯相关病毒2（Rous Associated Virustype2,RAV-2）及劳斯肉瘤病毒施密特-鲁宾二氏[Rous sarcoma virus（strain Schmidt-RuppinB）,RSV-SRB]毒株序列相同;通过对U3区调控元件的分析,发现血管瘤商品蛋鸡病例分离毒NHH与JS09GY5的U3区各发生1处连续序列缺失,出现了极为独特的c-Est-1、TCF11及C/EBP结合位点,这些调控元件可能与病毒的致肿瘤特性相关;所测的5株血管瘤商品蛋鸡分离毒均保留完整E元件,而所有肉鸡分离毒的E元件均发生了几乎相同的大部分序列缺失;首次发现血管瘤商品蛋鸡分离毒JS09GY3的E元件中有11bp的连续插入序列。【结论】商品蛋鸡血管瘤型ALV-J与肉鸡分离毒在全序列上差异明显,U3、DR1和E元件等区域有一部分特殊的突变与毒株的宿主类型和肿瘤表型有一定关系,其功能尚需进一步研究。而血管瘤型、髓细胞瘤型ALV-J可能是ALV-J与其它反转录病毒的重组毒。
- 吴晓平秦爱建钱琨金文杰邵红霞朱钰峰沈海玉
- 关键词：血管瘤蛋鸡J亚群禽白血病病毒全基因序列分析
- 猪圆环病毒2型生物学特性与致病特征研究进展被引量：13
- 2010年
- 综合分析猪圆环病毒2型(PCV2)的病原生物学和临床致病特征。PCV2病原生物学研究表明,PCV2在猪的不同生长发育阶段的易感细胞存在差异,可调节单核细胞和巨噬细胞的细胞因子分泌;PCV2存在2个基因亚型,并在ORF2中存在可区分两型的特异性核苷酸序列,PCV2b型为1486-TcAaacCCCGG,PCV2a型为AcC aacAAAAT;我国PCV2分离株与国外分离株同源性不高,推测PCV2在我国存在的时间也比较长,经过多年的流行,病毒发生了变异。在致病特征研究方面,PCV2与多种病原混合感染导致多系统衰竭、呼吸困难、繁殖障碍并可加重腹泻病毒的毒性。
- 史岩秦爱建
- 关键词：猪圆环病毒2型生物学特性
- 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌的分离与16SrDNA的鉴定被引量：6
- 2011年
- 从鹅卵黄性腹膜炎临床病例中采集样品,分离病原进行一系列生化鉴定,共分离得到7株致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌,编号为E0238、E0239、E0240、E0453、E0454、E0241、E0245。O血清型鉴定分属于O2、O21、O37、O1、O24、O24、O148。利用16SrDNA扩增试剂盒对随机选取的3株细菌进行PCR扩增,并将PCR产物序列与GenBank中的E.coli16SrDNA进行序列比对,结果显示分离细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。
- 钱琨张永志金文杰邵红霞秦爱建
- 关键词：鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌
- 野鸭源新城疫病毒的分离及其F基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 用RT—PCR方法扩增从野鸭体内分离到的3株新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）（JS-1／06／wd、JS-2／06／wd和JS-3／06／wd）F基因，并对其序列进行了测定和分析。结果表明该分离株的F基因长1662bp，编码553个氨基酸；F基因裂解位点的氨基酸序列为^112。R-R-Q—K／R—R-F^117，符合NDV强毒株的特征。这些毒株间核苷酸同源性为99．8％～99．9％，与鹅源NDVQY971株和ZJ1株的核苷酸同源性也高达96．7％～97．5％；氨基酸同源性为96．8％～97．5％；而与我国标准强毒株F48E9及疫苗株LaSota的核苷酸同源性分别为86．9％和84．5％；氨基酸同源性分别为94．5％和87．0％。系统发育树分析结果表明，野鸭源NDV与鹅源NDV的遗传关系较近，同属于基因Ⅶ型。
- 蔡丽娅王桂军秦爱建陈建霞崔平福邵红霞金文杰
- 关键词：野鸭新城疫病毒F基因
- 马立克氏病病毒超强毒感染鸡羽髓蛋白质组分析被引量：3
- 2011年
- 【目的】羽毛是细胞游离马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)释放的部位,为了解感染MDV后鸡羽中宿主基因表达的变化及对病毒感染的应答,进行了MDV感染鸡的羽髓蛋白质组学分析。【方法】1日龄无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡人工感染MDV超强毒RB1B株(1000PFU),感染后21d采集鸡羽毛,提取羽髓蛋白,以17cm,pH5-8的IPG胶条进行二维电泳,以未感染病毒的SPF鸡羽髓蛋白为对照,使用PDQuest软件对二维电泳图谱进行差异蛋白分析,并选取部分差异斑点进行质谱鉴定。【结果】PDQuest软件分析发现攻毒组和对照组表达差异大于两倍的蛋白点有41个,其中攻毒组表达上调的蛋白点25个,下调的蛋白点7个,新出现的蛋白点有9个。质谱分析共成功鉴定了21个斑点,对应于20个蛋白。如载脂蛋白AI(apolipoprotein AI)、14-3-3 sigma(两个斑点均为该蛋白)、癌蛋白18(stathmin)等。【结论】功能预测表明这些蛋白涉及到宿主的抗病毒应答、物质代谢、细胞骨架成分、细胞增殖相关等方面。
- 陈欣虹卢占军钱琨金文杰王友秦爱建
- 关键词：马立克氏病病毒蛋白质组
- 地方蛋鸡群中A亚群禽白血病病毒的分离与全基因组序列分析被引量：10
- 2011年
- 利用DF1细胞培养、ELISA和多聚酶链式反应(PCR)从地方蛋鸡群中分离并鉴定了1株A亚群禽白血病病毒(ALV-A),命名为AH10。依据GenBank中已发表的序列分段扩增获得AH10株的全基因序列。序列对比分析发现,AH10株基因全长7 458 bp,其中gp85与国内另一蛋鸡A亚群SDAU09C3株同源性最高,氨基酸同源性达到96.5%。此外,AH10株在非编码区5′-LTR区域存在蛋鸡群A亚群禽白血病所共有的19个碱基的插入突变。研究结果进一步完善了我国地方蛋鸡群中禽白血病的流行病学信息。
- 钱琨朱钰峰沈海玉金文杰秦爱建
- 关键词：禽白血病病毒全基因序列分析
