深圳市科技计划项目(201202200)
- 作品数：8 被引量：48H指数：5
- 相关作者：吴彤华蔡应木更多>>
- 相关机构：深圳中山泌尿外科医院深圳中山生殖与遗传研究所汕头大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金深圳市基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- G6PD缺乏症单细胞SNaPshot基因诊断方法的建立被引量：3
- 2015年
- 目的建立有效可行的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断技术。方法获取正常人及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,采用多重巢式PCR结合多重SNaPshot技术对G6PD基因突变高发的四个外显子上的12个突变位点进行基因诊断。结果共检测了58个正常和108个杂合子单淋巴细胞,扩增效率为90.97%,等位基因脱扣率为8.08%。结论所建立的多重巢式PCR结合SNaPshot技术可在单细胞水平上快速、准确地检测12个G6PD基因突变位点,可望在临床上实现G6PD缺乏症的植入前遗传学诊断。
- 吴彤华成金泉朱元昌黄菊马珍珍尹彪曾勇蔡应木
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶植入前遗传学诊断巢式聚合酶链反应
- G6PD缺乏症酶学诊断与多重SNaPshot基因诊断的比较被引量：5
- 2015年
- 目的了解葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症酶学诊断与基因诊断检出情况,并对这两种方法学进行分析比较。方法通过G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydro-genase,6PGD)比值法和多重SNa Pshot基因诊断技术对168例血样进行G6PD缺乏症酶学诊断和基因型诊断,分析各自的检出情况,比较比值法和多重SNa Pshot法的结果,并以测序结果为金标准对两种方法进行方法学评价。结果酶学诊断阳性率为4.76%。基因诊断突变率为22.02%,以c.[1311C>T(;)1365-13T>C]同义突变最常见(72.97%),错义突变率为5.35%。错义突变标本的G6PD/6PGD比值较同义突变及未检出突变低,差异有统计学意义(P<0.05);而同义突变与未检出突变间G6PD/6PGD比值无统计学差异(P>0.05)。多重SNa Pshot法基因分型结果均与DNA直接测序分析的结果完全一致。比值法无法检出同义突变,且漏检一例错义突变杂合子,其筛查错义突变的灵敏度和特异度分别是88.89%和100.00%。结论 G6PD/6PGD比值法虽可较有效地筛查错义突变但不能检出同义突变和全部的女性杂合子,而多重SNaPshot基因分型方法可有效检出多种G6PD基因突变类型。
- 范玉君尹彪朱元昌曾勇马珍珍吴彤华
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因诊断
- 褪黑素对人卵裂期胚胎发育的影响及机制研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨褪黑素对人第3天(D3)卵裂期胚胎发育成囊胚的影响及其作用机制。方法收集2012年10月至2014年10月在本中心行IVF-ET助孕治疗患者捐赠的D3玻璃化冷冻胚胎,复苏后存活率100%且未发生卵裂球溶解的胚胎纳入研究(n=143),随机分为褪黑素组(培养液中加入1×10-7 mol/L褪黑素,n=71)和对照组(不添加褪黑素,n=72)。两组胚胎均放于37℃、5%CO2培养箱中培养72h,统计囊胚及优质囊胚形成率;采用鲁米诺化学发光法检测培养液中总活性氧(ROS)水平;实时荧光定量PCR法分析抗氧化酶类基因CAT、GPx、SOD1、SOD2及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果褪黑素组的囊胚形成率(42.25%)显著高于对照组(26.38%)(P<0.05),优质囊胚形成率(30.00%)略高于对照组(26.32%),但无显著性差异(P>0.05)。培养72h后两组胚胎培养液中的ROS水平比较(513.33vs.556.67RLUs)无显著性差异(P>0.05)。褪黑素处理后,胚胎内过氧化氢酶基因CAT的相对表达量(1.68±0.43)较对照组(1.00±0.03)显著上调(P<0.05),其他基因包括Bax、Bcl-2、SOD1、SOD2、GPx的表达则没有显著性差异(P>0.05)。结论褪黑素能够促进人卵裂期胚胎继续发育形成囊胚,其机制可能与上调胚胎中过氧化氢酶基因CAT的表达有关。
- 胡晓东熊风万才云李观贵黄丽施彭月婷孙青鲍忠剑曾勇
- 关键词：褪黑素囊胚过氧化氢酶
- 精浆中锌、果糖和肉碱含量与精液参数的关系被引量：15
- 2013年
- 精子在睾丸中生成，经过附睾的成熟和储存，在射精时与精囊腺、前列腺和附睾的分泌物一起排出。因此，附睾及附属性腺的分泌功能可以影响精子的质量，对精子的生育力起到重要的作用。精浆中的锌、果糖和肉碱的含量分别作为前列腺、精囊腺和附睾的功能标志，对男性不育症的诊断和治疗有一定的参考价值。本实验对512例男性不育患者的精液常规和精浆生化结果进行回顾性分析，探讨精浆生化指标与精子浓度、活力、形态等精液参数的关系，为男性不育的诊断和治疗提供一些依据。
- 尹彪刘红杰赵明郭楚苹曾勇张定梁锦明蔡靖
- 关键词：精浆生化锌果糖肉碱精液参数
- 联合SNaPshot和单倍型分析技术建立G6PD缺乏症单细胞基因诊断体系被引量：1
- 2015年
- 目的建立可有效监测污染和等位基因脱扣(allele dropout,ADO)的可靠的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断体系。方法获取正常G6PD基因型个体及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,在全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)的基础上,应用多重SNaPshot技术检测25个已报道的中国人群G6PD基因突变位点,同时联合针对Xq28上6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的单倍型分析技术辅助分析结果。结果共检测60个正常和96个杂合子单淋巴细胞,WGA扩增效率为94.23%,成功扩增的WGA产物在后续基因检测的总扩增效率和总ADO率分别为89.37%和13.74%;8个基因位点的扩增效率和ADO率均有统计学差异(P总<0.05);发生G6PD基因ADO的15例G6PD杂合子单淋巴细胞中,均未同时出现6个STR位点全部扩增失败或ADO现象;所有样本的STR位点检测结果除目的片段的信号峰外,均未出现其他峰信号。结论联合SNaPshot和单倍体分型技术所建立的单细胞G6PD基因诊断体系,在G6PD基因分型的同时,还可提示是否存在污染或ADO,最大程度保证诊断结果的可靠性,减少误诊率,可望取代传统的性别选择,实现真正意义上的G6PD缺乏症植入前遗传学诊断。
- 吴彤华朱元昌成金泉黄韵卢燕玲李红燕尹彪曾勇
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶植入前遗传学诊断全基因组扩增单倍型分析
- 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因诊断方法的建立被引量：10
- 2014年
- 目的建立有效可行的高通量葡萄糖．6一磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphatedehydrogenase，G6PD）基因诊断新技术。方法建立单管三重PCR扩增G6PD基因外显子2—13目的片段，构建双管25重SNaPshot反应体系检测25个已报道的中国人群的G6PD基因突变位点。用20份已知基因型的样品进行重复性试验。对60例未知样品同时用多重SNaPshot基因分型技术和DNA测序法进行双盲试验。结果建立的多重SNaPshot技术可同时检测25个G6PD基因突变位点，且可区分正常、女性杂合子与男性半合子／女性纯合子，有效检出复合突变。批内及批间的重复性均达到100％。60例未知样本检出23例突变，SNaPshot基因分型结果与测序结果完全一致，特异性和准确性均为100％。结论建立的单管三重PCR结合双管25重SNaP—shot技术是一种有效可行的G6PD缺乏症基因诊断的新方法。
- 吴彤华朱元昌陈春媚蔡靖林奇张晓庆曾勇尹彪
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变基因诊断
- 深圳不孕不育患者葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变分子流行病学调查分析被引量：9
- 2014年
- 目的探究深圳地区不孕不育患者葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）基因的突变发生率及突变类型。方法应用多重SNaPshot技术对851例不孕不育患者进行25个G6PD基因突变位点检测。结果深圳不孕不育患者G6PD基因突变发生率为17．63％，男、女性异常率分别为15．13％和20．09％，女性以杂合子为主。突变涉及10个位点11种类型，以1311C〉T／IVS-1193T〉C复合突变最常见，占异常病例的72．00%（108／150）。共检出错义突变43例：1376G〉T19例，1388G〉A9例，95A〉G和871G〉A／1311C〉T／IV孓1193T〉C各5例，202G〉A、835A〉T、1360C〉T、1376G〉T和392G〉T／1311C〉T／IVS-1193T〉C各1例。结论深圳地区不孕不育患者G6PD基因突变发生率高且突变类型多，行辅助生殖前应行G6PD基因筛查。该研究为遗传咨询、植入前遗传学诊断和产前诊断等提供了有价值的基础资料。
- 吴彤华朱元昌陈春媚林奇沈树秋卢燕玲曾勇尹彪
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变类型基因诊断分子流行病学
- 外周血单个核细胞宫腔内灌注治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响被引量：11
- 2013年
- 目的探讨自体外周血单个核细胞(PBMCs)宫腔内灌注治疗对反复种植失败(RIF)患者胚胎种植率和临床妊娠率的影响。方法按随机数字表法将纳入的39例拟行冷冻胚胎移植的RIF患者随机分为治疗组(20例)和对照组(19例),治疗组在移植前3 d抽取外周血20 ml,应用淋巴细胞分离液分离PBMC后行宫腔灌注。对照组移植前未行自体PBMC宫腔灌注。结果两组患者年龄、血清卵泡刺激激素(FSH)、取卵周期数、移植周期数、移植胚胎数和单周期移植优质胚胎数均无统计学差异(P>0.05)。两组胚胎种植率(22.8%vs.6.4%)和临床妊娠率(50.0%vs.17.6%)比较,治疗组均显著高于对照组(P<0.05)。两组单周期活婴出生率(45.0%vs.17.6%)比较无统计学差异(P>0.05)。结论自体PBMC宫腔内灌注治疗可以提高RIF患者胚胎种植率和临床妊娠率,故可作为RIF患者胚胎移植前提供可选择的处理方案。
- 林奇连若纯陈现刘翠翠刁梁辉黄春宇陈晓燕曾勇梁佩燕
- 关键词：反复种植失败外周血单个核细胞体外受精一胚胎移植
