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SD大鼠层粘蛋白受体基因的克隆与序列分析: 2009年; 以大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层粘蛋白受体基因,并将其克隆到pMD18-T Simple载体中进行测序,运用分子生物学软件对获得序列进行了分析。结果表明所克隆的SD大鼠层粘蛋白受体基因的ORF片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,共888个核苷酸,该基因内无内含子,编码295个氨基酸的前体蛋白,推测其相对分子质量约32.6 kD。与已报道的绵羊、家鼠、猪、牛、人相应序列作比较,发现其核苷酸序列和氨基酸序列具有较高的同源性。氨基酸序列分析表明,SD大鼠层粘蛋白受体的氨基酸点突变位点为V176M,G243E。研究结果为探讨层粘连蛋白受体基因的功能及其在疾病发生、发展过程中的作用提供了基础数据。; 宁章勇李建军罗敏意程艳芬潘家强于博; 关键词：SD大鼠

BALB/c小鼠Doppel蛋白的原核表达及其抗血清的制备: 2011年; 利用已克隆的BALB/c小鼠Doppel蛋白基因,将其成熟蛋白编码区亚克隆至表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-PRND。将重组蛋白表达载体转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot分析结果表明,BALB/c小鼠Doppel蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。对表达的蛋白进行提取和纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,初步建立了小鼠睾丸Doppel蛋白组织学分布的免疫组织化学方法。为进一步研究Doppel的结构、功能及其在TSEs发生发展中的作用提供基础材料和数据。; 程艳芬王衡宁章勇潘俊斌安玉甫吴新涛; 关键词：BALB/C小鼠原核表达多克隆抗体

SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的克隆和序列分析: 2010年; 以睾丸总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠和BALB/c小鼠的叠朊蛋白(PRND)基因,并将其克隆到pMD18-T载体中进行测序,运用生物信息学软件对这些序列进行了分析。结果表明获得的SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的完整ORF片段,基因无内含子,分别编码178和179个氨基酸的前体蛋白。与GenBank登录的其他同品种鼠相应序列进行比较,SD大鼠发生了G187C点突变,相应地引起了G63R的氨基酸改变;BALB/c小鼠发生了G12T、C13G和C528T点突变,但只发生了L5V的氨基酸改变,其余均为同义置换。氨基酸一级结构分析显示2种PRND编码的Dopple蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚定结合区组成。二级结构预测表明,Dopple蛋白由3个α-螺旋和2个β-折叠片层组成。研究结果为进一步研究Dopple蛋白的结构、功能及其在传染性海绵状脑病发生发展中的作用提供了基础数据。; 程艳芬宁章勇亓文宝于博; 关键词：SD大鼠 BALB/C小鼠

pIRES2-EGFP-LR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达: 2009年; 为探讨层黏蛋白受体的生理功能及其在疾病发生、发展过程中的作用,以培养的SD大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层黏蛋白受体基因。将其克隆到pMD18-T载体中,经酶切纯化后再将其亚克隆到带有加强型绿色荧光蛋白报告基因的pIRES2-EGFP真核表达载体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-LR进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其表达情况。结果表明,真核表达载体pIRES2-EGFP-LR构建成功并可以在293T细胞中表达。该表达载体可以作为研究层黏蛋白受体生理功能的重要工具。; 宁章勇罗敏意亓文宝李小康程艳芬; 关键词：真核表达载体转染

食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的克隆与序列分析: 2008年; 以外周血液的基因组DNA为模板,运用PCR方法扩增了食蟹猴和猕猴的朊蛋白基因,并将其克隆到pGEM-T Easy载体中进行测序,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析。结果表明,所克隆的食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的开放阅读框片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,含有762个核苷酸,该基因内无内含子,编码253个氨基酸的前体蛋白,推测其分子质量约27.6 ku。与已报道的其他多种动物朊蛋白基因序列做比较,发现其与多种哺乳动物都有较高的同源性,其中与人的同源性最高。氨基酸点突变分析除发现了已报道的多态性位点N97S、H100N外,在食蟹猴和猕猴均发现了未报道的S242L点突变位点。此外,在食蟹猴还发现了I8M、C151R点突变位点。; 宁章勇于博邓衔柏李玉谷马勇江孔小明; 关键词：食蟹猴猕猴朊蛋白

SD大鼠层黏蛋白受体组织特异性的分布和表达: 2009年; 利用RT-PCR和SABC免疫组织化学染色的方法,对SD大鼠进行了层黏蛋白受体在mRNA和蛋白2个水平上分布和表达的检测。结果表明,层黏蛋白受体mRNA和蛋白在大鼠检测组织内均有表达,表达的细胞类型为大脑、海马和小脑的神经细胞及心肌细胞、肝细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肾小管上皮细胞。为探讨层黏蛋白受体的分布、功能及在信号转导途径中的作用提供数据。; 宁章勇罗敏意于博邓衔柏郭剑英潘俊斌; 关键词：SD大鼠

大鼠大脑皮质神经元体外分离培养和纯化研究: 2008年; 为建立动物中枢神经疾病的细胞作用模型,根据大鼠大脑皮质神经元的生存特性。按照抑制筛选的原理,对大鼠大脑皮质神经元进行了体外培养、纯化和鉴定。结果表明:培养的大脑皮质神经元在体外发育良好,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色证明其纯度较高,可以用于进一步细胞作用模型的建立。; 宁章勇崔亚利; 关键词：大脑皮质神经元体外培养

SD大鼠层粘蛋白受体组织特异性的分布和表达: 层粘连蛋白受体是一个多功能蛋白,与数种类型疾病及其进程密切相关,因而引起了人们对它的巨大关注。SD大鼠是研究多种疾病发病机理的理想实验动物之一,它具有发病快、症状典型的特点,对于研究多种疾病的发生机理具有重要意义。但是,...; 宁章勇于博潘俊斌; 文献传递

pIRES2-EGFP-prnd真核表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达: 2018年; 为探讨叠朊蛋白(Doppel)在正常生理条件及相关疾病中的临床及生物学意义,构建BALB/c小鼠Doppel基因prnd的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-prnd,并转染BHK细胞,IFA检测其表达情况。结果表明,Doppel蛋白通过pIRES2-EGFP-prnd在BHK细胞中表达。试验可为进一步研究Doppel蛋白的结构、正常的生理生化功能及其与相关疾病的关系提供重要工具。; 程艳芬程艳芬宁章勇冯翠萍赵孟孟安玉甫; 关键词：真核表达载体转染 IFA

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