博士科研启动基金(801100010122)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
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- 转PcRS基因拟南芥的抗炭疽病研究被引量：3
- 2014年
- 为确定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)白藜芦醇合酶基因PcRS(Polygonum cuspidatum resveratrol synthase)提高植物抗病性的有效性,以转PcRS基因拟南芥为材料,对其进行了分子鉴定和抗炭疽病(Colletotrichum higginsianum)研究。利用Southern blot和Northern blot验证了外源PcRS基因在转基因拟南芥基因组中的整合和表达。对经过选育得到的T3代纯合株系进行离体的抗病性试验。转基因拟南芥甲醇提取物对炭疽病菌具有明显抑制作用。进一步采用点滴法接种生长4周的转基因拟南芥离体叶片,与野生型植株相比,转基因植株叶片坏死斑直径和坏死斑上的孢子数目都显著减少,表明转基因拟南芥通过抑制孢子的繁殖来限制炭疽病菌的定植,从而提高转基因植株对炭疽病的抗性。
- 柳忠玉赵树进
- 关键词：虎杖白藜芦醇合酶转基因拟南芥炭疽菌
- 虎杖PcPKS1基因RNAi载体的构建
- 2015年
- 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKS1的功能,分别选取Pc PKS1基因的编码区保守序列(574 bp)和3′端非编码区特异序列(209 bp)作为干扰片段。将选定的干扰片段,分别以正向和反向插入到p YLRNAi载体中GUS基因内含子的两侧,以形成hp RNA表达盒,成功构建了以组成型Ca MV35S为启动子,以潮霉素抗性为筛选标记的RNA干扰表达载体p YLRNAi-CDS和p YLRNAi-UTR,并将载体导入农杆菌LBA4404中。
- 柳忠玉赵树进
- 关键词：查尔酮合酶
- 虎杖查耳酮合酶基因RNAi载体的构建及其遗传转化被引量：6
- 2015年
- 目的构建虎杖查耳酮合酶(Pc CHS1)基因的RNA干涉(RNAi)表达载体,获得Pc CHS1表达下调的转基因虎杖植株。方法根据Gen Bank中已知的Pc CHS1基因序列(EF090604),设计相应引物,克隆Pc CHS1基因核心保守序列。以Pc CHS1基因为靶基因,将长度574 bp保守序列片段通过正、反2个方向插入表达载体p YLRNAi中,构建RNAi表达载体p YLRNAi-Pc CHS1。通过根癌农杆菌介导法将其导入虎杖茎尖组织。对获得的转基因植株,利用Northern blotting检测Pc CHS1基因表达水平,并应用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇苷的量。结果成功构建Pc CHS1基因RNA干涉表达载体,获得了5株转Pc CHS1基因干涉载体的阳性植株。转基因虎杖Pc CHS1基因表达水平显著下调,并且转基因植株中白藜芦醇苷量均得到显著提高,其中最高量是对照植株的3.8倍(P<0.05)。结论成功获得了干涉Pc CHS1基因表达下调的转化植株,抑制Pc CHS1基因的表达显著增加了转基因虎杖中白藜芦醇苷的量,为有效利用该基因提高虎杖白藜芦醇苷量奠定基础。
- 柳忠玉赵树进
- 关键词：虎杖白藜芦醇苷RNA干扰转基因
- GST-SUMO-MT融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达被引量：3
- 2016年
- 旨在考察在大肠杆菌中自诱导表达GST-SUMO-MT融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。采用摇瓶培养,利用单因素和正交实验对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母粉、甘油、葡萄糖、乳糖)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量。结果表明,自诱导培养基碳氮源的最优配比为:2%蛋白胨、2%酵母粉、0.3%甘油、0.05%葡萄糖和0.3%乳糖。重组菌自诱导表达最优发酵条件为:采用两阶段温度控制,37℃培养3 h,25℃继续培养13 h。此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的2.2倍和2.3倍。
- 彭冬杨威王昭王席柳忠玉
- 关键词：金属硫蛋白融合蛋白可溶性表达
- 根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究被引量：5
- 2014年
- 为了建立根癌农杆菌介导的虎杖茎尖遗传转化体系,以虎杖的茎尖为转化受体,研究了携带白藜芦醇合酶基因(PcRS)的根癌农杆菌载体介导的虎杖遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2 d,农杆菌菌液(OD600值为0.6)侵染10 min,共培养3 d,在含8 mg/L潮霉素的培养基上诱导不定芽。利用该体系从300块茎尖外植体中共转化获得15株抗性再生植株,经PCR和Southern杂交检测,有6株虎杖的基因组中已整合进了目的基因。
- 柳忠玉赵树进
- 关键词：虎杖茎尖根癌农杆菌
- 转PcRS基因拟南芥植株表型分析被引量：1
- 2014年
- 为了研究虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)白藜芦醇合酶基因Pc RS的功能,以转Pc RS基因拟南芥为材料,对其进行分子鉴定和表型研究。利用Southern blot和Northern blot验证了外源Pc RS基因在转基因拟南芥基因组中的整合和表达。对经过选育得到的T3代纯合株系(L4、L6、L15)进行性状观察。在体视显微镜下观察野生型和转基因拟南芥植株表型;采用分光光度法测定低氮培养基上的子叶花青素含量。结果显示,与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥的种皮颜色发生改变呈浅黄褐色,并且子叶中花青素含量显著减少。这表明Pc RS基因可能导致转基因拟南芥的黄酮类物质合成受阻。
- 柳忠玉赵树进
- 关键词：白藜芦醇合酶转基因拟南芥花青素种皮
