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Bacillus methylotrophicus菌株产抗菌蛋白性质及对人参锈腐病菌抑菌作用被引量：8: 2013年; [目的]菌株Bacillus methylotrophicus是一株对人参锈腐病菌(Cylindrocarpon destructans)有较强拮抗作用的细菌,为了有效防治人参锈腐病,进行了其产生抗菌蛋白的性质研究和抑菌效果试验。[方法]通过混菌法研究抗菌蛋白对紫外、热、酸碱、有机溶剂和蛋白酶的稳定性;采用生长速率法测定抗菌蛋白对锈腐病菌菌丝生长的抑制作用;平板对峙法测定其对锈腐病菌菌丝形态的影响;液培法测定其对锈腐病菌孢子萌发的抑制影响。[结果]抗菌蛋白具有很好的抗紫外线、耐热、耐酸碱和耐蛋白酶的稳定性,当质量浓度大于62.5 mg/L时,对人参锈腐病菌菌丝生长抑制率超过63.8%;显微镜观察其对菌丝生长有强烈的抑制作用,可以导致菌丝生长过程中分支增多、断裂和菌丝空洞,500 mg/L的抗菌蛋白对锈腐病菌孢子萌发的抑制率可达到100%。[结论]为人参锈腐病的防治提供新的生物防治资源。; 姜云许鹏陈长卿田磊李桐张冠军尹望陈光; 关键词：抗菌蛋白人参锈腐病菌抑菌作用

抗肿瘤19肽在大肠杆菌中的融合表达与纯化: 2014年; 将重组载体pet32a-19肽转化到表达宿主菌大肠杆菌中,对其进行摇瓶发酵实验来优化重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件。通过Ni Sepharose 6 Fast Flow对重组蛋白进行纯化,用梯度透析的方法进行复性。结果表明:筛选出了pET32a-19肽-BL21(DE3)高效表达菌株,在发酵条件为培养基的pH7.0、接种量3%、IPTG浓度0.1mmol/L、IPTG添加时间OD600为0.7、诱导温度41℃和诱导时间5h时蛋白表达量最高,为54.57mg/L,得到纯度为95%以上的融合抗肿瘤19肽,并成功复性出融合蛋白。; 孙旸迟惠王聪陈光; 关键词：纯化复性

枯草芽孢杆菌纳豆激酶分离纯化及酶学性质被引量：5: 2012年; 利用30%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Sephadex G-50凝胶过滤层析对浅盘发酵纳豆激酶进行分离纯化并对其酶学性质进行初步研究。以纤维平板法测定纳豆激酶活力,SDS-PAGE检验纯化效果。结果表明:纯化后纳豆激酶为电泳纯,分子质量约27.518kD,纯化倍数和酶活回收率分别为19和42.1%,纳豆激酶最适温度为50℃,最适宜pH值为8.0。; 王刚郭明珠陈光; 关键词：纳豆激酶枯草芽孢杆菌纯化酶学特性

林蛙皮胶原蛋白提取工艺的优化与相关性质研究被引量：4: 2017年; 中国林蛙是集食用与药用价值于一身的名贵野生动物。以林蛙皮为原料,利用胃蛋白酶水解林蛙皮制备胶原蛋白,对酶解时间、酶用量、p H值、料液比4个因素对胶原蛋白提取率进行研究,经单因素结合正交试验优化最佳酶解条件为:酶解时间36 h,酶用量0.3%,料液比1:50,p H2.0。在此条件下,胶原蛋白提取率为80.1%。经紫外光谱扫描、傅里叶红外光谱、氨基酸组成分析,最大吸收波长符合胶原蛋白的特征吸收峰,三螺旋结构完整,氨基酸组成与Ⅰ型胶原蛋白相符。; 王萌萌刘仁杰陈光; 关键词：胶原蛋白

类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及其在大肠杆菌中的表达: 2014年; 根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2(NM058175.2),利用Primer 5设计特异性引物,以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的克隆,获得目的基因COL6A2,然后用双酶切的方法连接目的基因COL6A2和表达载体pET32a,将连接产物转化到大肠杆菌中构建原核表达载体pET32a-COL6A2。再将鉴定成功的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21(DE3)、BL21(BE3)plysS及Rosetta(DE3)中,采用1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,经12%SDS-PAGE电泳分析并筛选出重组蛋白表达量最高的菌株。利用Ni Sepharose 6 FastFlow琼脂糖树脂亲和层析柱纯化重组蛋白。结果表明:获得了大小为570 bp的COL6A2片段,经测序鉴定序列正确;成功构建了pET32a-COL6A2原核表达载体并表达出约30 kD的目的蛋白;筛选出BL21(DE3)作为高效表达菌株,其重组蛋白表达量占菌体总蛋白的23.9%;经镍离子亲和层析纯化获得了纯度>90%的目的蛋白。; 王皓徐立群陈欢孙旸王刚陈光; 关键词：胶原蛋白大肠杆菌克隆纯化

林蛙卵黑色素的提取工艺及其抗氧化活性被引量：5: 2017年; 【目的】研究盐酸水解法提取林蛙卵黑色素的最佳工艺,并分析林蛙卵黑色素的抗氧化活性。【方法】以林蛙卵为原料,通过单因素试验和正交试验,分析盐酸浓度、原料与盐酸料(g)液(mL)比、水解温度、水解时间对黑色素提取率的影响,确定林蛙卵黑色素盐酸水解法的最佳提取工艺;应用DPPH法、邻二氮菲法及邻苯三酚自氧化检测法,测定林蛙卵黑色素对DPPH、羟基自由基和O-·2的清除能力。【结果】酸水解法提取林蛙卵黑色素的最佳条件为:盐酸浓度6mol/L,料液比1∶30,水解温度70℃,水解时间2h,在此条件下,林蛙黑色素提取率达7.02%。黑色素对DPPH自由基具有显著的清除作用,清除50%DPPH自由基对应的黑色素质量浓度为0.6 mg/mL;1.0mg/mL黑色素对羟基自由基的清除率达到65%;黑色素对O-·2的清除率不佳,最高达28.3%。【结论】盐酸水解法对林蛙卵黑色素的提取效果较好,林蛙卵黑色素具有明显的抗氧化作用。; 苏玉春陈光郭会楠肖红庆; 关键词：黑色素抗氧化活性

响应面法优化胶原蛋白发酵培养基和培养条件被引量：1: 2012年; 目的利用统计学方法对重组大肠杆菌发酵培养基进行优化,提高胶原蛋白产量。方法应用Plackett-Burman试验设计法和响应面法,对发酵培养基6种组分配比和2个初始发酵条件进行优化;用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(葡萄糖、混合氮源和K2HPO4)与胶原蛋白产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行5次验证试验。结果培养基3个最佳浓度为:葡萄糖为14.69 g/L、混合氮源为15.04 g/L、K2HPO4为11.91 g/L,胶原蛋白表达率可达33.95%。5次验证试验所测得的胶原蛋白平均表达率为34.02%,与预测结果基本一致。结论优化的重组大肠杆菌发酵培养基可显著提高胶原蛋白产量。; 魏玮陈欢吴铭孙旸王刚陈光; 关键词：胶原蛋白响应面法培养基

Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2: 2013年; 用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。; 徐立群王皓孙旸王刚陈欢陈光; 关键词：胶原蛋白 PPIC9K 毕赤酵母

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吉林省自然科学基金(201115189)