国家自然科学基金(30772514)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：许于飞范东升彭清林许雪梅张婷更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- HPV 58 L1改造基因的表达及其VLP产物抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)慢性持续性感染是诱发宫颈癌的主要病因.体外表达的HPV主要衣壳蛋白(L1)可自组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),免疫后可诱导产生型别特异性中和抗体,有效保护机体免受同型病毒的感染,因此可望预防病毒感染及感染相关的宫颈癌等病变.HPV58是诱发我国妇女宫颈癌的主要高危型病毒之一,目前尚无针对HPV58的疫苗问世.本研究联合采用多种策略对HPV 58 L1野生型基因进行改造,获得HPV 58 L1改造基因,命名为HPV 58 mL1,用杆状病毒-昆虫细胞表达系统进行HPV 58 mL1的表达,CsCl密度梯度离心法纯化获得HPV58 mL1重组蛋白,电镜分析结果显示,重组蛋白形成直径约55 nm的VLP.皮下免疫新西兰兔和豚鼠,ELISA检测显示,免疫动物产生高滴度针对HPV 58 mL1 VLP的抗血清,免疫斑点印迹检测显示,抗血清是针对VLP表面表位的.本研究表达了均一性好的HPV 58 mL1 VLP,并获得两个种属的HPV 58 mL1 VLP抗血清,为进一步研究有效预防HPV 58感染的疫苗打下基础.
- 范东升张婷彭清林杨丽君许于飞张然许雪梅
- 关键词：病毒样颗粒基因改造抗血清
- HPV 18 L1病毒样颗粒的表达纯化及其豚鼠抗血清制备被引量：1
- 2009年
- 目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV18L1VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清。结果HPV18L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV18L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50nm的VLP,豚鼠免疫血清中HPV18L1VLP特异性抗体滴度达5.12×105。结论HPV18L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV18L1VLP疫苗的进一步研究打下基础。
- 彭清林张婷范东升郑伟谢喜秀许于飞许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒杆状病毒表达系统抗血清
