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犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达被引量：2: 2012年; 将克隆质粒pMD-18T-H和pMD-18T-F分别进行双酶切,获得纯化的H基因和F基因,在T4DNA连接酶的作用下,亚克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得原核重组质粒pET28a-H和pET28a-F.将原核重组质粒转化大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta2(DE3)中进行表达,SDS-PAGE结果显示H基因和F基因分别表达相对分子质量约为31 400和38 200的融合蛋白,Western-blot检测结果显示,表达蛋白均可与CDV标准阳性血清呈阳性反应,表明原核表达的CDV H蛋白和F蛋白在反应原性上具有与天然H蛋白和F蛋白同样的特性,可作为CDV诊断用抗原,为CDV的免疫预防研究奠定基础.; 苏凤艳温铁峰宗颖王全凯; 关键词：犬瘟热病毒 H基因 F基因原核表达

梅花鹿IFN-α基因的克隆与原核表达研究被引量：3: 2015年; 为研究梅花鹿IFN-α的抗病毒功能和分子机制,根据GenBank中牛IFN-α基因序列(A00145),设计并合成1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-α全基因核苷酸序列。序列分析表明梅花鹿IFN-α基因全长570 bp,编码189个氨基酸,其中含18个氨基酸的信号肽和169个氨基酸的成熟多肽,存在1个潜在跨膜区,基因随不同物种发育进化地位表现出种属间的差异性。在此基础上,合成1对引物,扩增梅花鹿IFN-α成熟肽核苷酸序列,构建pET28a-IFNα原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在24 kd左右出现特异性蛋白带,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的34.04%,且表达产物与抗His标签抗体可发生特异性反应。将Ni柱纯化的pET28a-IFNα诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具抗病毒活性。研究结果为梅花鹿IFN-α蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。; 苏凤艳李哲王晓霞刘存发曾范利宗颖王全凯; 关键词：梅花鹿原核表达

梅花鹿IFN-β1基因的克隆与分子进化分析被引量：3: 2014年; 根据GenBank中牛干扰素-β1（IFN-β1）基因序列（E00137）,设计并合成了1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-β1全基因,并克隆、测序。结果表明：梅花鹿IFN-β1基因全长561 bp,编码186个氨基酸,含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸,3个糖基化位点,成熟蛋白含有4个α螺旋,3个β折叠区,7个β转角。序列比较分析发现,梅花鹿IFN-β1基因序列与GenBank发表的23种IFN-β1基因核苷酸序列同源性为3.2%~91.1%,氨基酸序列同源性为21.9%~79.7%。梅花鹿与其他23种动物的IFN-β1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFN-β1基因存在种属特异性。梅花鹿INF-β1基因的成功克隆,为进一步研究梅花鹿INF-β1基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。; 苏凤艳李哲刘存发宗颖曾范利王全凯; 关键词：梅花鹿分子进化

鹿茸生长发育及其再生调控机制的研究进展被引量：2: 2013年; 鹿茸是一种名贵中药,具有补肾壮阳、生精益血、补髓健骨、延缓衰老和增强免疫功能的作用。作为唯一能够完全再生的哺乳动物器官,鹿茸的生长发育及再生有其特殊的机制。文章对鹿茸的生长规律、再生机制以及激素、生长因子对鹿茸生长发育和再生的影响进行了简要综述,以期对鹿茸生产提供一定的指导。; 苏凤艳宗颖温铁峰; 关键词：鹿茸激素

梅花鹿IFN-β1的原核表达及活性鉴定: 为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素-β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pETIFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受...; 苏凤艳李哲刘存发宗颖曾范利王全凯; 关键词：梅花鹿原核表达活性鉴定; 文献传递

梅花鹿α干扰素全基因的克隆与分子进化分析被引量：4: 2013年; 根据GenBank中牛干扰素-α(IFN-α)基因序列(A00145),设计并合成了一对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-α全基因,并克隆、测序。结果表明,梅花鹿IFN-α基因全长570bp,编码189个氨基酸,含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸;序列比较分析发现,梅花鹿IFN-α基因序列与GenBank发表的17种IFN-α基因核苷酸序列同源性为29.6%～93.7%,氨基酸序列同源性为18.4%～91.1%;梅花鹿与其他17种动物的IFN-α基因序列分析和系统进化树分析表明,IFN-α基因存在种属特异性,亲缘关系越近,同源性越高。梅花鹿INF-α基因的成功克隆,为进一步研究梅花鹿INF-α基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。; 苏凤艳宗颖魏吉祥曾范利王全凯; 关键词：梅花鹿基因克隆

梅花鹿鹿茸表皮生长因子基因原核表达载体的构建及鉴定被引量：3: 2012年; 通过T-A克隆技术,成功地构建了克隆载体pMD-18T-EGF,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切克隆质粒pMD-18T-EGF后,回收EGF基因,并将此基因定向克隆至相同双酶切回收后的pET32a原核表达载体中,获得重组质粒pET32a-EGF。经限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明:成功地构建了原核重组质粒。; 苏凤艳宗颖何忠梅; 关键词：梅花鹿原核表达载体

梅花鹿IFN-β1的原核表达及活性鉴定被引量：4: 2015年; 为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组质粒p ET-IFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后,得到高效表达。SDS-PAGE与western blot分析结果表明,梅花鹿IFN-β1重组蛋白的分子量大小约为24 ku,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的59.02%。将Ni柱纯化的p ET-IFNβ1诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具有抗病毒活性,其抗病毒活性可以达到10×53.81U/0.1 m L。梅花鹿INF-β1的表达为梅花鹿INF-β1的应用奠定了基础。; 苏凤艳李哲刘存发宗颖曾范利王全凯; 关键词：梅花鹿原核表达活性鉴定

梅花鹿α干扰素基因在MDBK细胞中表达及抗BVDV活性检测被引量：1: 2016年; 采用基因工程技术克隆出梅花鹿α干扰素(IFN-α)成熟肽基因序列,并将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.0(+),经酶切、PCR及测序鉴定,成功构建了pcDNA3.0-IFN-α真核重组表达质粒。将鉴定正确的阳性重组质粒经非脂质体法转染至MDBK细胞,间接免疫荧光试验检测其具有较高转染效率;Western blot法检测IFN-α蛋白在MDBK细胞中得到有效表达;病变抑制试验检测转染后的MDBK细胞具有明显抗BVDV活性;抗BVDV活性的定量试验表明转染pcDNA3.0-IFN-α质粒的MDBK细胞与感染未转染的MDBK细胞相比抗BVDV活力提高了66192倍。本试验在MDBK细胞中成功表达了梅花鹿IFN-α,并检测出其具有明显抗BVDV作用,这为梅花鹿IFN-α活性机理研究以及开发更高效的抗梅花鹿病毒性疾病干扰素制剂提供物质和理论基础。; 李哲李俊峰刘千辉曾范利王全凯苏凤艳; 关键词：梅花鹿 Α干扰素真核表达

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吉林省自然科学基金(201115194)