吉林省科技发展计划基金(20060929)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：孙红朱平岳玉环张国利吴广谋更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人ICAM-1单链抗体表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单链抗体(ScFv)的表达载体,并在大肠肝菌中表达。方法从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA,用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因,重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因,将其连接到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化及复性后,检测特异性及活性。结果序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744bp,编码247个氨基酸,其中含357bp的VH基因片段和342bp的VL基因片段。表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的32%。经变性和复性后,纯度达80%以上,复性率达25%。Western blot和ELISA检测,ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合。细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附,其作用稍弱于亲本mAb。结论已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体,其表达产物具有抗体特异性和活性。
- 孙红万忠海张国利吴广谋朱平岳玉环
- 关键词：细胞间黏附分子-1单链抗体活性
- 单克隆抗体人源化的进展及应用被引量：6
- 2008年
- 鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所代替,本文介绍了几种人源化抗体构建的策略和表达系统以及人源化抗体在临床方面的应用。
- 孙红岳玉环朱平
- 关键词：单克隆抗体人源化抗体
- 抗ICAM-1单克隆抗体的制备及其活性被引量：4
- 2008年
- 目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1（ICAM-1）单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化，筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株，并对McAb进行纯化。用ELISA间接法测定效价并鉴定其亚类，Westerm blot鉴定其抗原特异性，细胞黏附试验检测其中和活性。结果筛选出1株可稳定分泌抗人ICAM-1抗体的杂交瘤细胞株3F2，杂交瘤染色体众数为98～104。纯化后的单抗蛋白浓度为1．253mg／ml，纯度达83．6％，效价可达2．56×10^5。其分泌的抗体亚型为IgG1，腹水效价达5．12×10^5，可与ICAM-1特异性结合，可抑制ICAM-1与淋巴瘤细胞间的黏附，具有明显的中和ICAM-1的活性。结论已成功制备出抗ICAM-1的McAb，为其进一步的研究和应用奠定了基础。
- 孙红万忠海张国利吴广谋朱平岳玉环
- 关键词：细胞间黏附分子-1单克隆抗体杂交瘤细胞活性
