国家自然科学基金(30772572)
- 作品数：16 被引量：59H指数：5
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- 一种新型的生物标记—内皮祖细胞被引量：4
- 2009年
- 内皮祖细胞是一类能增殖分化为血管内皮细胞的前体细胞。不仅参与血管形成,而且在内皮修复及维持内皮组织自身平衡中起关键作用。生物标记是一种能够对正常生物过程、病理过程或者治疗反应进行评测的客观指标,可用于判断预后,展示疾病活动性并指导治疗。近几年研究表明循环中内皮祖细胞具有诊断疾病,评测疗效和判断预后的潜能。本文就内皮祖细胞生物学特性及其作为生物标记的意义进行综述。
- 高玉芳哈小琴
- 关键词：内皮祖细胞血管形成生物标记
- 人Notch1受体shRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:构建人特异性受体Notch1短发夹RNA重组腺病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞中Notch1表达的影响,以便进一步研究Notch1的生物学功能。方法:设计合成Notch1序列干扰序列,插入到pGenesil-1.1上构建重组质粒,取阳性克隆进行酶切及DNA测序鉴定。通过同源重组,构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体pGsadeno-Notch1-shRNA。经Pac I线性化后脂质体介导转染到HEK 293细胞,包装后得到腺病毒颗粒。产生的重组腺病毒体外转染人脐带间充质干细胞,RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA对人脐带间充质干细胞中Notch1蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果:经酶切及DNA测序重组腺病毒质粒构建正确。重组腺病毒转染人脐带间充质干细胞3 d后,RT-PCR及Western blot检测,可显著下调细胞内Notch1的转录及蛋白表达水平。对Notch1 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为70.31%和86.97%,具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了表达人Notch1受体shRNA的重组腺病毒载体,为研究Notch1在肿瘤学中的生物学作用及机制奠定基础。
- 王晓辉罗芸吕同德杨宵鹏唐瑜哈小琴
- 关键词：NOTCH1腺病毒载体RNA干扰基因治疗
- 人源性Notch-1胞内段腺病毒载体构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建携带人Notch-1胞内区基因的腺病毒载体(Ad-GFP-NICD),观察其在真核细胞中的表达。方法:通过PCR从pIRES2-EGFP-NICD质粒中扩增目的片段Notch-1胞内区,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV-EGFP中,经酶切及测序鉴定后,将Notch-1胞内区定向克隆至重组腺病毒骨架载体pAdxsi,构建携带人Notch-1胞内区基因表达盒及绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-NICD)。酶切鉴定正确后,转染人胚肾细胞系293细胞,进行重组腺病毒的包装、生产及纯化,半数组织感染量法测定病毒滴度。用重组腺病毒转染人脐静脉内皮细胞,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达,并通过PCR扩增观察细胞Notch-1胞内区的表达。结果:成功构建了携带人Notch-1胞内区的重组腺病毒,纯化后病毒滴度达1.6×1010pfu/mL。腺病毒载体转染人脐静脉内皮细胞后24 h在荧光显微镜下即可观察到绿色荧光蛋白,48 h更为强烈,PCR扩增证实细胞表达Notch-1胞内区。结论:成功构建了携带Notch-1胞内区的重组腺病毒载体,为进一步研究Notch信号通路促进动脉形成的机制研究奠定了实验基础。
- 董芳哈小琴吕同德
- 关键词：腺病毒
- 肝细胞生长因子对冠心病患者内皮祖细胞功能的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的影响,为HGF在冠心病治疗方面的应用提供研究基础。方法选择冠心病患者(冠心病组)和非冠心病患者(对照组)各15例,每组再随机分为重组人HGF(rhHGF)干预组和非rhHGF干预组,ELISA法检测血浆中HGF水平。流式细胞仪检测EPCs数量,并体外选择培养EPCs,检测rhHGF对EPCs增殖、迁移和黏附能力的影响。结果与对照组比较,冠心痛组患者外周血EPCs数量明显减少,血浆HGF含量明显升高(P<0.01);EPCs增殖、黏附和迁移能力明显下降(P<0.05,P<0.01)。在冠心病组,与非rhHGF干预组比较,rhHGF干预组能明显促进冠心病患者FPCs增殖、黏附和迁移(P<0.05,P<0.01);在对照组,与非rhHGF干预组比较,rhHGF干预组仅促进对照组患者EPCs增殖,对黏附和迁移虽有促进作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HGF可增强冠心病患者EPCs的各项生物学功能,有望将HGF刺激EPCs的生物学活性的作用应用于冠心病的治疗。
- 董芳李富军哈小琴吕同德贾庆华
- 关键词：肝细胞生长因子内皮细胞细胞计数细胞运动
- 内皮祖细胞:一个新的肿瘤标志物
- 2011年
- 研究显示骨髓和外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)参与肿瘤新生血管生成,并与肿瘤的生长、转移、预后密切相关。最近研究发现卵巢癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤患者外周血中EPCs升高。外周血EPCs作为一个新的生物标志物在肿瘤的诊断、治疗方案的设计、评估肿瘤预后方面有很大的潜力。全文就EPCs在肿瘤新生血管生成中的重要作用以及EPCs是否可以作为肿瘤标志物应用于肿瘤治疗预后判断作一综述。
- 赵曼哈小琴他维玮居军
- 关键词：内皮祖细胞血管新生生物学标志物
- 内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力与端粒酶活性的关系被引量：3
- 2009年
- 目的观察体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移和黏附能力与EPCs端粒酶活性之间的关系。方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞(MNCs),接种至明胶包被的培养板上,培养7d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs,采用MTT比色法、Transwell小室和黏附能力测定实验,观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。TRAP-PCR银染法检测EPCs端粒酶活性。结果从人外周血能成功分离EPCs细胞。从冠心病患者分离的EPCs增殖、迁移、黏附能力较非冠心病患者下降。冠心病患者EPCs端粒酶活性较非冠心病患者低。结论冠心病患者EPCs功能显著减弱,可能与EPCs端粒酶活性降低有关。
- 韩娟萍哈小琴吕同德张卫泽尹强
- 关键词：内皮祖细胞端粒酶冠心病
- Effects of hepatocyte growth factor-mediated activation of Dll4-Notch-Hey2 signaling pathway被引量：2
- 2011年
- 由支持 arteriogenesis 的背景 Hepatocyte 生长因素(HGF ) 享受 ischemic 疾病然而，它行动的机制不被知道。表明小径的槽口在 neovascularization 起一个重要作用。在增长和在 arteriogenesis 的过程表明小径的动脉 endothelial 房间和 Dll4-Notch-Hey2 的迁居能力之间的关系作为基于前期学习房间的 HGF.Methods 的行动的机制被调查，在人的大腿骨的动脉 endothelial 房间( HFAEC )被感染以后，上层清液在显示的时间被收获与在 200 pfu/cell 的 adenovirus-HGF ( Ad-HGF )。房间为 HGF 被分析由 ELISA 和反向的 transcription-PCR (RT-PCR ) 的表示和 Notch1， Dll4 和 Hey2 表示。在增长和 HFAEC 的移植能力的变化被 MTT 观察， Transwell 移植 experiments.Ad-GFP-infected HFAEC 与控制组相比被用作 control.Results Ad-HGF 组的 HGF 表达式没被 Notch1 的 HGF 与时间，和正式就职增加， Dll4 和 Hey2 基因抄写没随 HGF 的增加被提高。Ad-HGF-transduced HFAEC 的增长能力被提高，他们的迁居能力也通过激活表明小径的 Dll4-Notch-Hey2 面对 HGF.Conclusions 被提高， HGF 间接地支持增长和房间的迁居能力，以便后代动脉分支被形成。
- GAO Yu-fangHA Xiao-qinLU Tong-deHAN Juan-ping
- 关键词：NOTCH信号途径逆转录聚合酶链反应增殖能力
- 人脐带间充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究被引量：6
- 2013年
- 目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CD105,阳性率为96.73%和96.10%,整合素受体CD29阳性率为99.53%;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0.80%和1.91%,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1.41%。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0/G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白(Nestin)呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论 hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。
- 王晓辉惠玲杨霄鹏王鲲杨雯哈小琴
- 关键词：间质干细胞脐带细胞分化
- Notch1对人脐带间充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨Notch1基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组(AdNotch1)、阴性对照组(Ad-GFP)与空白对照组。以最佳MOI转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较3组细胞增殖能力、细胞周期、黏附能力及迁移能力。Western Bolt检测3组细胞Notch1蛋白的表达水平。结果荧光下观察腺病毒成功感染细胞,阴性对照组和实验组均出现了GFP的表达,且随培养时间的延长表达量增高,可见光下观察实验组细胞增殖速度较快。实验组细胞的增殖能力(48、72、96 h)、黏附能力(12、16、20 h)及迁移能力均较阴性对照组及空白对照组增强(P<0.05)。Western Bolt检测实验组细胞Notch1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 Notch1能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。
- 王晓辉罗芸贾庆华杨霄鹏王鲲哈小琴
- 关键词：间质干细胞脐带NOTCH1细胞黏附细胞运动
- 肝细胞生长因子基因对BMSCs的修饰及活性观察被引量：12
- 2010年
- 目的观察携带肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的重组腺病毒对BMSCs的转染表达及活性,为研制稳定表达高生物活性细胞因子的创伤修复细胞基因药物奠定基础。方法Percoll分离液体外分离、培养成年Wistar大鼠BMSCs,取第3～5代细胞进行实验。用免疫细胞化学法检测BMSCs中HGF受体c-Met是否表达;以转染强度(multiplicity of infection,MOI)分别为0、25、50、100、200pfu/cell携带绿色荧光蛋白(green?uorescent protein,GFP)基因的重组腺病毒(adenovirus GFP,Ad-GFP)转染BMSCs,流式细胞仪测定转染效率,MTT法检测细胞存活情况,以筛选出最佳MOI;并以最佳MOI将携带HGF基因的重组腺病毒(adenovirus HGF,Ad-HGF)体外转染BMSCs,ELISA法检测转染后HGF表达水平,MTT法检测上清对BMSCs增殖影响。结果BMSCs胞膜表达HGF受体c-Met。MOI为0、25、50、100及200pfu/cell的Ad-GFP转染BMSCs48h后,流式细胞仪测定转染效率分别为0.34%±0.04%、40.72%±0.81%、61.72%±1.04%、85.33%±0.83%及17.91%±0.63%,MOI为100pfu/cell时对BMSCs的转染效率最高(P<0.05);MTT法检测示MOI为200pfu/cell时,BMSCs损伤程度最大。以MOI为100pfu/cell的Ad-HGF转染BMSCs48h后,ELISA法检测示HGF表达量达高峰;MTT法检测显示BMSCs增殖活性随加入上清中HGF含量的增加逐渐增强,加入10%(320pg)时达高峰,之后剂量加大活性不再增加。结论Ad-HGF可有效转染BMSCs并表达HGF蛋白,HGF蛋白可刺激BMSCs增殖,BMSCs可作为一种理想的基因载体细胞用于创伤修复。
- 哈小琴董芳吕同德
- 关键词：BMSCS重组腺病毒肝细胞生长因子基因基因转染细胞治疗
