中南林业科技大学青年科学基金(QJ2011008A)
- 作品数：7 被引量：18H指数：5
- 相关作者：谭晓风王建勇曾艳玲刘凯陈鸿鹏更多>>
- 相关机构：中南林业科技大学国家林业局广西林业科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中南林业科技大学青年科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2014年
- 3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料，在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上，采用RACE技术，克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长，命名为CoHCD（GenBank,登录号KJ910336）。该基因cDNA全长为1145bp，含有666bp的开放读码框，编码221个氨基酸，分子量为25．2kDa，理论等电点pI为9．4，疏水残基占整个氨基酸残基的48．9％，是亲水性蛋白，具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序“HGXXGXXRS”。在基因cDNA全长序列的基础上，分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体，其中，原核表达载体在宿主细胞BL21（DE3）上成功诱导表达，获得表观分子量约为25kDa的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明，在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8～10月，转录最高峰发生在9月，其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯
- 关键词：油茶克隆
- 油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因(CoFBA4)的分子特征与表达分析被引量：6
- 2013年
- 果糖-1，6-二磷酸醛缩酶（fructose-1，6-diphosphatealdolase，FBA，EC4．1．2．13），简称醛缩酶，是糖酵解代谢途径中第4步关键酶，催化果糖-1，6-二磷酸（Fru．1，6-BP）可逆地裂解为磷酸二羟丙酮（DHAP）和3-磷酸甘油醛（G．3-P）（Rutter，1964）。
- 曾艳玲谭晓风蒋瑶刘敏王建勇周俊琴
- 关键词：油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆基因表达亚细胞定位
- 油茶脂酰辅酶A硫酯酶基因的克隆与表达分析被引量：8
- 2014年
- 脂酰辅酶A硫酯酶是催化脂酰Co A水解成自由脂肪酸(FFA)和辅酶A(Co ASH)的一类酶,它通过维持胞内脂酰Co A、FFA和Co ASH等的水平来参与生命体内的生理过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,分离和克隆到一个油茶脂酰Co A硫酯酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACOT(Gen Bank登录号KJ910339)。该基因c DNA全长为1 588 bp,含有1 164 bp的开放读码框,编码387个氨基酸;基因编码的蛋白Co ACOT具有c NMP结合域保守序列"VVREGEAGDGVYFIWDG"和C端的保守三联肽"SKL",属于过氧化物酶体蛋白。成功构建了表达载体,其中,原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得分子量约为44 k Da的目的蛋白。荧光定量PCR分析表明,Co ACOT基因在种子不同的发育期均有表达,种子膨大期最低,经油脂合成期上调表达之后,Co ACOT基因的相对表达量维持在一个相对稳定的较高水平。结果显示Co ACOT基因可能调控着油茶种子的油脂合成。
- 谭晓风王建勇龙洪旭曾艳玲梅芳芳刘凯陈鸿鹏
- 关键词：油茶克隆
- 油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆与原核表达
- 2016年
- 油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CoMFP(Gen Bank登录号为KJ910342)。序列分析表明,该基因cDNA全长为2 541 bp,含有2 178 bp的开放读码框,编码725个氨基酸,分子量为79.033 3 kD,理论等电点pI为9.11,具有六个比较明显的跨膜区,不仅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信号序列、3羟酰Co A脱氢酶(HCDH)信号序列、ECH基序和磷酸结合基序,也具有相当保守的盐桥、活性位点及五个亚结构域。成功地构建了原核表达载体并在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为79 kD的相应目的蛋白。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯梅芳芳
- 关键词：油茶克隆原核表达
- 油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2015年
- 以国审油茶(Camellia oleifera)良种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库基础之上,采用RACE技术,克隆获得油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACAD(基因登录号KJ910338)。该基因c DNA全长为2702 bp,含有2487 bp的开放读码框,编码828个氨基酸,分子量为92.4113 k D,理论等电点p I为8.47,具有2个比较明显的跨膜区和酪氨酸蛋白激酶活性位点LVHGDFRIDNLVF,存在5个亚结构域;在Co ACAD基因c DNA全长序列的基础上构建表达载体,其中原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达,获得表观分子量约为93 k D的目的蛋白;实时荧光定量PCR分析表明,Co ACAD基因在果实膨大期和成熟期上调表达,预示着Co ACAD基因可能在种子发育过程中参与能量供应过程的调控。
- 王建勇谭晓风梅芳芳曾艳玲龙洪旭刘凯陈鸿鹏
- 关键词：油茶克隆
- 油茶丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2015年
- 【目的】油茶种仁含油率较低且易遭逆性环境等的影响,这些都严重影响和制约了油茶产业的快速发展。丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶是脂肪酸合成酶(FASⅡ)复合体的组成酶之一,在脂肪酸合成中起着装载作用,它的酶促反应产物丙二酰单酰ACP是脂肪酸合成关键组成部分。开展该基因的功能研究,能为油茶的分子遗传育种奠定基础。【方法】以油茶品种‘华硕’种子为材料,借助其种子转录组和表达谱数据库,通过RACE技术,克隆丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因并对该基因进行生物信息学分析。利用常规的酶切连接技术构建基因的原核表达载体,并利用α酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性。【结果】丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因的全长c DNA 1 867 bp,含有1 131 bp的开放读码框,编码376个氨基酸,具有58个氨基酸长度的叶绿体转运肽,该基因被命名为Co MCAT(Gen Bank登录号KJ910337)。在malonyl-Co A结合位点和ACP结合位点上分别存在高度保守的基序"GQGXQ"和"GXSXG"。原核表达载体p ET30a-Co MCAT在BL21(DE3)细胞中被成功地诱导表达,目的重组蛋白分子量约为40 k Da。酶活性分析表明,重组蛋白Co MCAT的最佳催化温度为30℃,最佳p H为7.0,比酶活性约为2.384 U·μg-1。【结论】以本实验室构建的油茶转录组数据库为基础,首次克隆获得油茶MCAT基因的全长c DNA序列,构建其原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达目的蛋白,并对重组蛋白进行初步的酶活性分析。研究结果为今后进一步深入开展和揭示油茶MCAT基因在油脂合成的代谢过程中的作用奠定基础。
- 王建勇谭晓风陈鸿鹏曾艳玲龙洪旭梅芳芳刘凯
- 关键词：油茶原核表达
- 油茶脂氢过氧化物裂解酶基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2014年
- 以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。
- 王建勇谭晓风龙洪旭陈鸿鹏刘凯朱凤云
- 关键词：油茶基因克隆
