国家自然科学基金(30600617)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 抗前列腺癌多肽的可溶性表达及纯化
- 2007年
- 目的:探讨抗前列腺癌多肽的可溶性融合蛋白的表达条件,并获得其纯化蛋白,为后续的体内、外活性实验奠定基础。方法:采用Phamacia公司商品化的GST融合表达载体pGEX-4T-2,向细菌培养基中加入IPTG后,诱导Ptac启动子下游的外源目的基因表达。通过对不同培养基、不同温度、不同诱导时间及不同诱导剂浓度下可溶性目的蛋白的表达量进行探索,筛选出表达量最高的组合方式,并通过GST亲合层析柱GSTrap FF对获得的可溶性蛋白进行纯化。结果:成功进行了GST-APP216融合蛋白的可溶性表达,在IPTG浓度为0.2 mmol/L,27℃条件下,诱导表达4.5h时表达量最高。经凝胶成像系统进行密度扫描显示,该可溶性蛋白的表达量约占上清总蛋白量的36.2%。并获得了纯化的APP216蛋白,经紫外分光光度计测定标准品,绘制标准曲线。测定260/280nm处吸光度的比值,得到纯化蛋白的浓度为323.1μg/ml。结论:APP216纯化蛋白的获得,为进一步检测抗前列腺癌多肽体外、体内的肿瘤杀伤作用奠定了坚实的实验基础。
- 李斌郝晓柯李立文苏明权
- 关键词：可溶性
- 特异性抗前列腺癌多肽抑制前列腺癌细胞生长的作用研究
- 2007年
- 背景与目的本实验组根据PSA具有的肿瘤定位及丝氨酸蛋白酶活性,设计并已获得了包含促细胞凋亡的BH3结构域[2-5]、抗肿瘤血管形成的VEGF拮抗肽K237[6]和bFGF拮抗肽DG2[7]结构域以及可被PSA特异性水解短肽的复合型多肽APP216的纯化蛋白,并运用细胞培养初步验证了其在体外对前列腺癌细胞的杀伤作用,本文进一步探讨该多肽对人前列腺癌肿瘤异种移植物的杀伤作用,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法利用检测荷瘤裸鼠血清PSA浓度、各组荷瘤裸鼠肿瘤体积、重量变化、各组荷瘤裸鼠治疗前后体重的变化以及病理组织学观察来评估包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系22RV1荷瘤裸鼠及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3荷瘤裸鼠的肿瘤细胞杀伤作用。结果前列腺癌细胞22RV1的荷瘤裸鼠治疗后比治疗前血清PSA浓度下降了71.1%、肿瘤体积下降51%,治疗组肿瘤重量比对照组低52%,组织病理学观察镜下可见坏死瘤组织。而前列腺癌细胞PC3的荷瘤裸鼠治疗组肿瘤重量与对照组无明显差别;治疗前后肿瘤体积变化无统计学意义,组织病理学观察癌细胞生长活跃。所有裸鼠重要脏器均未见病理损伤。结论APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠具有良好的抑制瘤细胞增殖的作用。而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠抑瘤效果不佳。并且该蛋白对其他重要脏器无毒性。
- 李斌郝晓柯李立文苏明权
- 关键词：多肽前列腺癌PSA
