国家自然科学基金(30600636)
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
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- 谷氨酸对大鼠脂肪干细胞诱导分化神经细胞的影响及机制
- 2010年
- 目的:研究谷氨酸(Glu)对大鼠脂肪干细胞Adipose-derived stem cells(ADCSs)诱导分化神经细胞的作用及机制。方法:取成年大鼠腹股沟脂肪组织进行体外细胞培养,采用免疫组化方法检测证实为ADSCs。对照组为正常培养的ADSCs并诱导分化神经细胞,谷氨酸(Glu)处理组加入不同浓度的Glu,MTT比色法观察脂肪干细胞的存活率。结果:从ADSCs诱导分化的细胞包括神经元及神经胶质细胞,免疫组化结果显示神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色阳性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性。Glu处理组给药24h后,与对照组比较ADSCs存活率明显降低,50μmol·L-1Glu组细胞存活率为83.98%,与对照组比较差异无显著性(P>0.05);100及1000μmol·L-1Glu组干细胞存活率(分别为66.82%和17.08%)低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:Glu对ADSCs有损伤作用,随着Glu剂量的增加,ADSCs的存活率逐渐降低,二者呈剂量依赖关系。
- 饶以华方加胜张明宇霍雷
- 关键词：脂肪干细胞谷氨酸细胞培养
- 三种神经细胞黏附分子在人脑星形细胞瘤中表达的差异
- 2010年
- 目的了解三种神经细胞黏附分子(120kD、140kD、180kD)在不同级别人脑星形细胞瘤中表达的差异及相关性。方法针对三种神经细胞黏附分子分别设计引物,对54例标本进行了RT-PCR、免疫组织化学和病理分级,寻找三种分子在RNA和蛋白质水平上的表达规律。结果三种mRNA中仅140kD在星形细胞瘤中存在表达下调,但在不同病理分级的组间无统计学差异;神经细胞黏附分子主要分布在胞质和胞膜,随着肿瘤恶性程度的增加,神经细胞黏附分子的合成量亦明显下降。结论在三种mRNA中140kD的作用最为关键,神经细胞黏附分子的表达程度可以作为星形细胞瘤病理分级的一个重要指标。
- 王延金向娟娟方加胜
- 关键词：星形细胞瘤
- MDR1在人脑肿瘤干细胞中的表达及意义
- 2009年
- 目的:探讨脑肿瘤干细胞(BTSCs)上多药耐药基因1(MDR1)及其编码蛋白P-gp的表达,为抗癌治疗寻找靶向分子。方法:取10例胶质母细胞瘤患者肿瘤组织标本,制成单细胞溶液,接种于含EGF、bFGF、B27的无血清培养基中培养。分离获取BTSCs,对其传代培养,期间用Dispase消化分离获取到肿瘤干单细胞。免疫荧光方法检测BTSCs特异性标志物CD133,并用免疫组织化学和荧光的方法检测MDR1的表达。Western-blotting检测MDR1编码蛋白P-gp的表达。结果:所有的标本均培养出BTSCs,可在体外增殖和扩增分化,表达特异性的标志物CD133,通过免疫组织化学和免疫荧光结果提示,BTSCs上存在MDR1,MDR1在BTSCs的表达率为(45.3±5.4)%,Western blotting结果表明BTSCs上表达P-gp。结论:BTSCs表达MDR1,并且其上表达P-gp,这可能是使BTSCs更耐受化疗的原因之一。
- 曾飞跃王延金陈风华杨转移邓永文方加胜
- 关键词：肿瘤干细胞多药耐药基因P-糖蛋白
- 乳铁蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义被引量：1
- 2013年
- 目的:通过对乳铁蛋白生物学特性的研究,分析其在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法:通过免疫组化方法测定10例非肿瘤脑组织和46例胶质瘤(其中低级别胶质瘤27例(Ⅰ级和Ⅱ级)和高级别胶质瘤19例(Ⅲ级和Ⅳ级)中乳铁蛋白的表达情况并分析二者的相关性。用RT-PCR技术及Western-blot方法测定非肿瘤脑组织、低级别组胶质瘤和高级别胶质瘤组乳铁蛋白的表达量并分析二者的相关性。结果:乳铁蛋白在非肿瘤脑组织及不同级别胶质瘤中的表达情况不同,其在低级别胶质瘤中有表达,略低于非肿瘤脑组织;而在高级别胶质瘤中表达显著减少或者表达不明显,明显低于低级别胶质瘤和非肿瘤脑组织(免疫组化、RT-PCR及Western-Blot的P值分别为P=0.001、P=0.003、P=0.004)。结论:乳铁蛋白在非肿瘤脑组织和不同级别胶质瘤中的表达有差异,提示乳铁蛋白参与了人脑胶质瘤发生与发展的过程。高级别胶质瘤的高度恶性和高侵袭性可能与乳铁蛋白表达的下调从而丧失对肿瘤细胞的抑制作用相关。
- 周振海方加胜谭泽明张明宇王延金
- 关键词：乳铁蛋白胶质瘤
- Fe_3O_4磁性纳米颗粒/CD/5-FC系统对U251细胞化疗作用被引量：1
- 2009年
- 目的:建立以Fe3O4磁性纳米颗粒(Fe3O4,MNP)/胞嘧啶脱氨酶(CD)/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统为基础的神经系统胶质瘤治疗方法.方法:利用高温分解铁有机物法以2-吡咯烷酮和乙酰丙酮铁为原料制备出Fe3O4 MNP,用γ-氨丙基三乙氧基硅烷对磁性材料进行表面修饰.以Fe3O4 MNP为载体将CD基因转染U251胶质瘤细胞,检测Fe3O4 MNP对质粒pCMVCD的结合与保护能力.通过RT-PCR,Western Blot法和免疫荧光等方法检测CD基因在U251细胞的表达.噻唑蓝(MTT)法检测5-FC化疗后U251-CD细胞生长曲线的变化.结果:制备出粒径为(10±2)nm的Fe3O4 MNP;使用Fe3O4 MNP作为载体将CD基因成功转染U251细胞;脂质体转染组转染率为(39.23±12.12)%,而示Fe3O4 MNP转染组转染率为(67.35±11.19)%,2组相比较差异显著(P<0.01).Fe3O4 MNP作为载体转染的U251-CD细胞CD基因稳定表达,并呈时间相关性增强表达模式;U251-CD细胞加入5-FC后能显著抑制U251细胞生长.结论:Fe3O4 MNP可作为胶质瘤基因治疗的理想载体;Fe3O4 MNP/CD/5-FC系统可作为脑胶质瘤辅助治疗手段之一.
- 谭泽明张明宇王俊李文章顾宏晨方加胜王延金
- 关键词：基因载体胞嘧啶脱氨酶神经胶质瘤化疗
- 人类神经上皮肿瘤中Nestin^+细胞的分离培养和表达被引量：1
- 2009年
- 目的:检测巢蛋白(Nestin)在神经上皮肿瘤组织、细胞中的表达,评价Nestin+细胞体外生物学特性并探讨其意义.方法:采用免疫组化法检测神经上皮肿瘤组织中Nestin的表达情况,免疫磁珠法分选肿瘤组织中的Nestin+细胞,悬浮细胞培养法进行Nestin+细胞的增殖、分化与鉴定,RT-PCR法检测Nestin蛋白在其中的活性表达情况.结果:Nestin在肿瘤内皮细胞中均有阳性染色,而在神经上皮肿瘤细胞中阳性染色比例为9.5%～96.2%,且Nestin+细胞比例及染色强度与肿瘤的恶性程度正相关.Nestin+细胞能在无血清培养基中形成典型的脑肿瘤球,在含血清培养基中分化为成熟的神经细胞系.Nestin蛋白在Nestin+细胞中活性表达强度约为阴性细胞的18.5倍,其表达强度取决于细胞的来源.结论:Nestin表达检测有助于正确评价神经上皮肿瘤的生物学行为和恶性程度,并可作为判断肿瘤病理级别和患者预后的重要依据.
- 毕长龙方加胜朱桂英陈风华王延金霍雷
- 关键词：神经系统肿瘤病理级别脑肿瘤干细胞
- 磁珠分选U251细胞系中的CD133^＋细胞及其生物学特性
- 2012年
- 背景:脑肿瘤干细胞理论认为,脑肿瘤干细胞是脑肿瘤细胞中"种子"细胞,是脑肿瘤发生、浸润和复发的关键细胞。目的:观察人多形性胶质母细胞瘤U251细胞系中CD133+细胞的增殖、分化及体内致瘤性等生物学特性。方法:运用磁珠分选技术分选U251细胞系中的CD133+和CD133-细胞亚群;MTT法绘制两个亚群细胞的生长曲线;单克隆形成率实验检测2个亚群细胞的增殖能力;免疫荧光检测CD133+细胞亚群的多向分化能力;裸鼠移植实验检测2个亚群细胞在裸鼠体内致瘤性的差异。结果与结论:U251细胞系中只有约4.5%的CD133+细胞;分选后的CD133+细胞能增殖形成典型的脑肿瘤干细胞球,生长曲线显示CD133+细胞增殖能力明显强于CD133-细胞;单克隆形成率实验显示CD133+细胞能形成脑肿瘤干细胞球的细胞比率达到78.5%~92.4%,而CD133-细胞仅有0.8%~2.4%;CD133+细胞能分化为具有GFAP和NeuN成熟表型的肿瘤细胞;CD133+的致瘤率为71.42%,而CD133-细胞无致瘤性。提示U251细胞系中存在少量具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD133+细胞,CD133+细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。
- 邓永文黄萌异舒毓高杨转移张明宇方加胜
- 关键词：脑肿瘤干细胞磁珠分选分化致瘤性干细胞
- U251细胞系中脑肿瘤干细胞耐药性的初步研究
- 2011年
- 目的探讨脑肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的耐药性及其机制。方法通过磁珠分选(MACS)将U251细胞中的CD133+与CD133-细胞进行分选,用MTT法和流式细胞技术比较CD133+与CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷(Vm-26)、卡莫司汀(BCNU)和顺铂(DDP)的敏感性、细胞凋亡率及细胞内药物蓄积的差异性,通过RT-PCR检测CD133+与CD133-细胞耐药基因谱的差异。结果 U251细胞系中,CD133+细胞约占5.4%,分选后的CD133+细胞的阳性率可达92.4%,CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷、卡莫司汀和顺铂的敏感性明显高于CD133+细胞;流式细胞仪试验显示,在中等浓度的替尼泊苷作用下,CD133-细胞的凋亡明显,并出现明显的"亚G1峰",而CD133+细胞并未受到明显抑制和杀灭;流式细胞仪检测显示CD133+细胞内的药物蓄积明显低于CD133-细胞;RT-PCR实验显示MDR1、BCRP、MRP、MGMT和Bcl-2表达在CD133+明显高于CD133-细胞。结论 CD133+是U251细胞系中的耐药细胞亚群,高表达ABC转运体,DNA修复和抗凋亡基因可能是CD133+细胞耐药的重要机制。
- 邓永文周向阳张明宇方加胜黄萌异舒毓高
- 关键词：肿瘤干细胞磁珠分选耐药性
- 人脑星型细胞瘤神经细胞黏附分子基因突变分析
- 2009年
- 目的:了解神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)基因突变在人脑星型细胞瘤发生中的作用。方法:对NCAM基因的外显子进行聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerasechain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP),找出可疑突变,回收PCR产物纯化测序及序列分析,ORF finder软件分析蛋白质序列。结果:43例星型细胞瘤中有1例胶质母细胞瘤NCAM7号外显子1126号核苷酸由A颠换为C,导致369号氨基酸由赖氨酸变为谷氨酰胺,该病人1年后死于复发。结论:NCAM基因点突变导致的蛋白质结构改变在星型细胞瘤的发生中可能有重要意义。
- 王延金向娟娟方加胜
- 关键词：星型细胞瘤神经细胞黏附分子点突变
- Wt—p53／p16基因联合CD／5-FC系统对U251细胞化疗效果的研究被引量：1
- 2009年
- [目的]研究p53、p16基因联合胞嘧啶脱氨酶（CD）／5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗神经胶质瘤的可行性。[方法]体外试验以Fe3O4磁性纳米颗粒（Fe3O4 magneticna noparticles，Fe3O4 MNP）为基因载体将质粒pCDNA3．1-p16、pYD5-p53，及pCMVCD转染入U251人胶质瘤细胞，给以不同浓度的5-FC，以MTT法检测细胞生长抑制率。[结果]成功以Fe3O4MNP为载体将wt-p53、wt-p16及CD基因转染U251细胞，并稳定表达。体外转染wt-p53、wt-p16基因都能明显提高CD／5-FC人对胶质瘤细胞的化疗效果。[结论]基于Fe3O4磁性纳米基因载体的p53、p16基因和CD／5-FC系统的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择，可以明显提高治疗效果。
- 谭泽明张明宇方加胜王俊李文章顾宏晨王延金
- 关键词：基因疗法
