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国家科技支撑计划(2006BAD06A00): 作品数：9 被引量：45H指数：4; 相关作者：林祥梅余兴龙李润成胡森王喜军更多>>; 相关机构：中国检验检疫科学研究院湖南农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划湖南省科技重大专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>

抗埃博拉病毒VP40蛋白单克隆抗体的制备及在抗原捕捉ELISA中的应用被引量：9: 2008年; 本研究以原核表达、纯化的扎伊尔株埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)VP40蛋白片段免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得一株分泌抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以重组杆状病毒表达EBOV VP40蛋白为抗原,经Western blot和间接免疫荧光检测该单克隆抗体显示出良好的特异性免疫反应。采用该株杂交瘤细胞系经腹腔注射接种8日龄BALB/c小鼠,制备腹水,并经纯化和HRP标记,获得HRP标记的抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体。从而,初步建立一种抗原捕捉ELSIA诊断方法,以原核表达EBOV VP40蛋白片段兔抗血清为一抗,应用HRP标记的抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体检测杆状病毒表达的重组EBOV VP40蛋白显示出良好的敏感性和特异性。结果表明,初步建立的抗原捕捉ELSIA诊断方法有希望成为一种理想的检测EBOV感染的诊断方法。; 王淑杰王喜军胡森秦立廷林祥梅步志高; 关键词：单克隆抗体

副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性被引量：4: 2010年; 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。; 刘俊琦余兴龙蒋大良朱小宁李润成肖利军刘春红罗维葛猛; 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶原核表达免疫原性

口蹄疫胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立: 为建立一种快速、准确检测口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法,将兔抗口蹄疫多抗纯化后与胶体金结合形成金标抗体复合物喷涂于玻璃纤维上。兔抗口蹄疫抗体和羊抗兔IgG分别标记在硝酸纤维膜上作为检测带和质控带,制成诊断口蹄疫病原的...; 郭华梅琳韩雪清林祥梅; 关键词：口蹄疫试纸条胶体金免疫层析法; 文献传递

猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立被引量：11: 2010年; 采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFVNS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。; 蒋大良余兴龙李润成葛猛罗维颜爱李杰刘春红涂长春; 关键词：CSF NS3 基因克隆原核表达 IFA

一例母猪混合感染猪蓝耳病病毒和猪丹毒杆菌的实验室诊断被引量：1: 2011年; 本试验对一猪场疫病进行了实验室诊断以及分离细菌的药物敏感性检测,结果表明该场生猪合并感染了猪繁殖与呼吸综合征病毒(猪蓝耳病病毒)和猪丹毒杆菌。该丹毒杆菌对青霉素及几种头孢、喹诺酮类药物敏感而对卡那霉素、阿米卡星、新霉素等不敏感。; 李波李润成肖博仁余兴龙; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪丹毒杆菌药物敏感性

一例母猪混合感染猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪丹毒杆菌的实验室诊断及药物敏感性实验被引量：1: 2011年; 对一猪场疫病进行了实验室诊断以及分离细菌的药物敏感性检测,结果表明该场生猪合并感染了猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪丹毒杆菌。该丹毒杆菌对青霉素及几种头孢、喹诺酮类药物敏感而对卡那霉素、阿米卡星、新霉素等不敏感。; 李波李润成肖博仁余兴龙; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪丹毒杆菌药物敏感性

小反刍兽疫实时荧光PCR检测方法的建立及应用被引量：8: 2009年; 以小反刍兽疫病毒N基因序列为靶基因，通过设计引物及TaqMan探针建立快速检测小反刍兽疫的荧光PCR方法。在线BLAST分析结果表明：所设计的引物特异性强，可区分小反刍兽疫病毒及牛瘟病毒感染；所建立的方法检测线性范围为1—1×10^6拷贝质粒DNA，灵敏度可达10拷贝质粒DNA，是常规PCR法的100倍。应用所建立的方法对32份采自西藏疫区的组织样品进行检测，说明疫情在西藏没有扩散。; 吴绍强林祥梅刘忠清王彩霞韩雪清刘建贾广乐梅琳王建峰查成刚; 关键词：小反刍兽疫病毒荧光PCR

裂谷热病毒囊膜蛋白基因DNA免疫的研究被引量：4: 2007年; 分别将裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)囊膜糖蛋白GN、GC和G(N+C)基因亚克隆至真核表达载体pCAGGS多克隆位点鸡β-actin转录启动子下游,分别构成pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C)。免疫沉淀试验结果表明,重组RVFV蛋白GN、GC分别在pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-G(N+C)转染HeLa细胞中获得表达,并具有良好免疫反应性。pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C)质粒DNA混合物按100μg/只剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠。每隔4周用相同的剂量加强免疫,第二次加强免疫3周后采血、分离血清备用。分别以杆状病毒表达RVFV囊膜蛋白GN、GC制备的抗原液包被ELISA板,间接ELISA检测DNA免疫鼠血清中RVFV囊膜蛋白G(N+C)特异性抗体,具有良好的敏感性和特异性。另外,DNA免疫鼠血清中的特异抗体可有效中和RVFV囊膜蛋白G(N+C)介导的伪型VSV重组病毒侵入RVFV易感宿主细胞的感染性。结果表明,pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C)质粒DNA混合物作为DNA疫苗具有防制裂谷热的潜力。; 王清华王喜军胡森葛金英步志高林祥梅; 关键词：囊膜蛋白 DNA免疫

猪瘟猪伪狂犬病二联苗对仔猪免疫效果观察被引量：4: 2010年; 本文探讨了猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)活苗不同时间对仔猪免疫效果的相互影响。结果表明:同时免疫两种活疫苗(二联苗组),PR会干扰CSF前期抗体的产生。二联苗组猪瘟抗体3周后才达到阳性,而猪伪狂犬病抗体在7日时就达到阳性,两种抗体均在49日达到峰值,峰值均比单一免疫、分时免疫的峰值略低。分时免疫两种疫苗产生的抗体均比单一免疫时的抗体要低,且相互干扰不明显。; 贺卫洁高轩刘蕾申洪银胡潇谢菲李明义; 关键词：猪瘟猪伪狂犬病二联苗免疫

尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白基因DNA免疫的研究被引量：3: 2008年; 构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G。细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性。真核表达质粒pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G和pCAGG-NiV-F+pCAGG-NiV-GDNA分别按100μg/只的剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠,间隔4周加强免疫,第二次加强免疫3周后采血,分离血清备用。分别以重组杆状病毒感染Sf9细胞表达的重组NiV融合蛋白(rNF)和受体结合蛋白(rNG)为包被抗原,应用间接ELISA检测上述质粒DNA免疫血清中的特异性抗体,具有较高的敏感性和特异性。另外,中和试验结果表明,DNA免疫小鼠产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性,并且受体结合蛋白G基因DNA诱导中和抗体的滴度高于融合蛋白F基因DNA。结果表明,DNA疫苗具有防制尼帕病毒性脑炎的潜力。; 王喜军葛金英王清华胡森林祥梅步志高; 关键词：F蛋白 G蛋白

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