国家自然科学基金(30872709)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：闾宏伟陈淑华邓昊阳国平向红更多>>
- 相关机构：中南大学中南大学湘雅三医院更多>>
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- 1-磷酸鞘氨醇2型受体调控衰老内皮细胞的功能变化被引量：1
- 2012年
- 目的:通过上调和沉默1-磷酸鞘氨醇2型受体(S1P2)的表达,探讨其对体外培养的脐静脉内皮细胞的功能影响。方法:采用转染外源S1P2受体质粒上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达;应用RT-PCR和Western印迹检测空白对照组、空载体组和过表达组细胞的S1P2受体表达;同时采用Matrigel胶种植法,观察3组脐静脉内皮细胞的体外管状样结构生成能力;划痕实验分析内皮细胞的损伤愈合能力;迁移实验分析内皮细胞的化学趋化能力。以及通过RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体的表达,观察细胞的功能改变。结果:上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达后,过表达组内皮细胞的成管能力、损伤愈合能力和细胞迁移率均明显低于空白对照组和空载体组(P<0.05)。RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体后,干扰组内皮细胞的管状样结构生成能力、损伤愈合能力和趋化能力均明显恢复,显著高于衰老内皮细胞组和干扰对照组(P<0.05)。结论:S1P2受体调控体外衰老内皮细胞的趋化、形态发生和损伤愈合反应的功能变化。
- 陈淑华向红阳国平邓昊袁洪闾宏伟
- 关键词：内皮细胞衰老RNA干扰
- S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选被引量：2
- 2009年
- 目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制,构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸(ssoligo),经变性退火为双链寡核苷酸(dsoligo)插入穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle载体,测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞(HPAEC),通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,提取质粒DNA,经双酶切,回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRNA片段,亚克隆到腺病毒表达载体(pAdeno-X),筛选出正确重组子,转染HEK293A细胞,收集重组的腺病毒,测定病毒滴度,通过Westernblot方法检测S1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒正确,并从4对dsoligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后,Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。
- 闾宏伟陈淑华阳国平朱晒红邓昊邢晓为
- 关键词：重组腺病毒短发夹RNA
- 诱导细胞衰老治疗肿瘤的研究进展
- 2010年
- 闾宏伟陈淑华肖志强
- 关键词：细胞衰老肿瘤
- 血管内皮细胞衰老过程中S1P2受体表达和细胞功能改变的相关性被引量：4
- 2009年
- 目的研究衰老血管内皮细胞的功能和S1P2受体表达的相关性。方法采用RT-PCR和Western印迹检测年轻、中年和衰老内皮细胞的S1P2受体的表达;运用细胞跨膜迁移实验分析内皮细胞的趋化性,以及采用种植在Matrigel胶上的内皮细胞的形态发生实验,评价内皮细胞体外血管新生反应。结果S1P2受体在衰老内皮细胞中的表达显著上调(P<0.05);S1P刺激能增加内皮细胞的迁移,但衰老组迁移率明显低于其他组(P<0.05);Matrigel种植方法评价内皮细胞体外血管生成实验显示,S1P能刺激内皮细胞形成管状样结构,且衰老内皮细胞形成管状样结构的能力明显减弱(P<0.05)。结论S1P通过S1P2受体介导而影响内皮细胞的功能,且衰老内皮细胞的S1P2受体表达上调与内皮细胞迁移及血管生成能力等功能下调改变相关联。
- 闾宏伟陈淑华阳国平袁洪邓昊邢晓为黄志军向红
- 关键词：血管内皮细胞衰老
- 老年胆固醇结石患者载脂蛋白E基因多态性分析被引量：1
- 2009年
- 目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性在老年胆固醇结石发病中的意义。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP),检测92例老年胆囊胆固醇结石患者和98例健康老年人的ApoE基因多态性及等位基因频率,对两组基因表型及等位基因频率进行统计学分析。结果老年胆囊胆固醇结石患者组ApoE基因型ε3/4的频率26.1%(24/92)明显高于健康老年人对照组6.1%(6/98)(P<0.05),老年胆囊胆固醇结石患者组ε4等位基因频率为32.7%,明显高于健康老年人对照组的21.4%(P<0.05)。结论ApoE基因多态性与老年人胆囊胆固醇结石的发病相关;等位基因ε4是老年胆囊胆固醇结石形成的危险因素。
- 向红胡靖陈淑华周军田韵周丽闾宏伟
- 关键词：载脂蛋白E胆固醇结石等位基因
