湖州市自然科学基金(2006YZ08)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：湖州师范学院扬州大学更多>>
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- 鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定被引量：3
- 2008年
- 以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液。在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞。对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白。建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法。
- 采克俊刘莉丁海雷张易祥丁志丽张念慈
- 关键词：鸡胚睾丸支持细胞纯化
- 鸡精原干细胞分离培养初步研究被引量：4
- 2008年
- [目的]建立禽类精原干细胞(SSCs)体外培养系统。[方法]以25日龄广西土鸡为试材,通过睾丸石蜡切片和HE染色,了解SSCs发育情况,用两步酶消化法分离获得生精上皮细胞,比较不同温度、接种密度对鸡SSCs体外培养的影响,并对SSCs的集落进行染色鉴定。[结果]结果显表明,25日龄时SSCs已经形成,但还未分化。37℃适宜作为鸡SSCs的培养温度,5×105个/ml适宜作为鸡SSCs原代混合培养的接种密度。经碱性磷酸酶和糖原染色鉴定,体外培养的鸡SSCs仍保持未分化的特性。[结论]该研究为禽类SSCs体外培养的基础资料提供参考。
- 采克俊刘莉张易祥于立颖丁海雷丁志丽谢小丹
- 关键词：精原干细胞
- 精原干细胞的分离纯化方法被引量：10
- 2008年
- 采克俊张易祥丁志丽丁海雷张念慈刘莉
- 关键词：精原干细胞分离纯化方法遗传资源保护精子细胞增殖分化生精细胞
- 睾丸组织移植研究进展被引量：1
- 2008年
- 睾丸组织移植是将同种或者异种供体的睾丸组织移植到受体的皮下、腹腔等血管丰富的部位后,检测移植物生长发育和精子发生情况。利用睾丸组织移植的方法来加速供体睾丸细胞的分化与增殖,在较短的时间内得到大量的生殖细胞,这对于种质资源保存、精子发生研究和男性不育症的治疗都是一有效的技术手段。本文对睾丸组织移植的供体选用、受体准备、移植的部位、移植物处理和检测以及移植技术的应用作一综述。
- 于立颖刘莉采克俊
- 关键词：睾丸组织精原干细胞
- 禽类原始生殖细胞的研究进展被引量：1
- 2008年
- 丁海雷刘莉丁志丽张易祥王杏龙采克俊
- 关键词：原始生殖细胞禽类PGCS生殖腺性细胞鸡胚
- 鸡睾丸组织移植初步研究
- 2008年
- 本文对鸡睾丸组织的自体移植和异体移植作了初步的研究。将50日龄广西土鸡睾丸组织(0.3mm3)自体移植到腹腔和腹部皮下,将30日龄竹丝鸡的睾丸组织(0.2mm3)异体移植到新生广西土鸡的腹部皮下,在不同时间段(自体移植分为3周、1个月、2个月和3个月,异体移植定为3个月)取出移植物,检测移植组织的体积和重量,并通过组织切片观察曲精细管形成和精子发生情况。结果表明,自体和异体移植组织分别在移植后1个月和3个月内都保持生长状态,体积和重量明显增加。其中自体移植组织切片观察发现移植后3周、1个月时都有形态正常的精子形成,在异体移植组织切片中发现组织中有明显的曲精细管形成,但没有完整的精子发生。这初步证明,在鸡中进行睾丸组织自体或者异体移植是可行的。
- 于立颖刘莉张易祥王杏龙采克俊
- 关键词：睾丸组织自体移植异体移植
- 鸡胚睾丸支持细胞的传代培养与鉴定被引量：2
- 2009年
- 以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液(PBS)处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞进行了鉴定。结果显示,睾丸支持细胞生长良好,已传至第4代;经低渗处理,可去除绝大部分的生精细胞,获得的支持细胞纯度可达95%;鉴定结果显示,支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内有双极小体;丫啶橙染色证明支持细胞的细胞质中富含RNA,细胞核内的DNA含量也较高;罗丹明123染色证明支持细胞含有丰富的线粒体。结论:经两步酶消化法以及低渗处理后能得到纯度较高的鸡胚睾丸支持细胞;37℃、5%CO2的培养条件适宜支持细胞的生长;AKP染色、油红O、丫啶橙和罗丹明123等方法简单易行,适用于鸡胚睾丸支持细胞的鉴定。
- 丁海雷刘莉张易祥王杏龙采克俊
- 关键词：睾丸支持细胞
- 鸡睾丸生精上皮细胞冷冻保存研究被引量：1
- 2009年
- 以广西土鸡为试验材料，利用两步酶解法从出壳后20～30日龄公鸡睾丸中获取生精上皮细胞，以含20％胎牛血清的DMEM为基础培养液，比较了不同浓度DMSO和蔗糖对生精上皮细胞冷冻保存效果的影响。结果表明：DMSO的最佳浓度为10％，添加蔗糖对冻存有害。以10％DMSO为防冻剂，复苏后生精上皮细胞原代混合培养可形成典型的精原干细胞集落，集落呈碱性磷酸酶（AKP）阳性，说明以10％DMSO为防冻剂的冷冻体系适合鸡睾丸生精上皮细胞的冷冻保存。
- 采克俊张易祥丁志丽谢小丹周源刘莉
- 关键词：精原干细胞冷冻保存体外培养
