国家自然科学基金(30872804)
- 作品数：18 被引量：50H指数：4
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- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学南京医科大学第二附属医院更多>>
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- 小鼠干扰素调节因子3启动子质粒的构建及其启动子活性分析
- 2012年
- 目的构建包含小鼠干扰素调节因子3(mIRF-3)基因启动子的质粒,并评价其启动子活性。方法以小鼠全血细胞总DNA为模板,PCR扩增mIRF-3目的片段,亚克隆此片段至pGL3-basic荧光素酶报告基因的多克隆位点,构建含mIRF-3启动子的重组报告质粒pmIRF-3。将pmIRF-3、pGL3-basic和pGL3-control质粒分别转染小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3后,行荧光素酶活性检测,计算相对活性单位(RLU)。生物信息学分析转录因子结合位点。结果成功构建了重组报告质粒pmIRF-3。与pGL3-basic组相比,pmIRF-3、pGL3-control组RLU明显增加(0.443±0.113vs.18.907±3.335、25.704±5.850)(P<0.01)。mIRF-3启动子区域内存在AML-1a、E2F、MZF1、CdxA、OCT-x等多个转录因子结合位点。结论 mIRF-3转录起始位点附近1479bp序列在NIH3T3细胞中具有较强的启动子活性。
- 刘立飞杨婷婷徐华国周国平
- 关键词：干扰素调节因子3启动子活性
- 干扰素调节因子3与巨细胞病毒感染
- 2015年
- 固有免疫系统是人体抵抗病毒入侵的第一道防线，固有免疫系统中的多种效应细胞能快速识别病原体并产生Ⅰ型干扰素（ interferon， IFN）及细胞因子，抑制病毒复制和传播。干扰素调节因子3（interferon regulatory factor 3，IRF3）作为干扰素调节因子家族中的一员，主要负责诱导Ⅰ型IFN、干扰素刺激基因（ interferon-stimulated gene，ISG）和促炎性细胞因子的生成，在固有免疫中发挥了重要的作用。人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus，HCMV）属于β疱疹病毒家族亚科，是有包膜的线性双链DNA（ double-stranded，dsDNA）病毒，它的基因组约有250 kb，可以编码超过200个蛋白发挥逃避免疫应答的作用［1］。成人免疫力正常者初次感染HCMV后呈潜伏感染状态并且持续终身，但当免疫力低下如艾滋病或者移植手术后，病毒会大量复制，引起HCMV原发感染。此外， HCMV感染还会导致新生儿的出生缺陷，引起听力下降、脑瘫、小头畸形和智力低下等后遗症。
- 王璐璐周国平
- 关键词：干扰素调节因子3巨细胞病毒感染促炎性细胞因子抑制病毒复制免疫力低下
- 支气管哮喘易感基因血清类黏蛋白1样蛋白3的研究进展被引量：2
- 2011年
- 支气管哮喘（简称哮喘）是一种慢性气道炎症性疾病，由遗传及环境因素共同作用而形成，哮喘的遗传率高达36％。75％。哮喘全球发病率逐年上升，尤其是儿童。我国约有1500万人患有哮喘，城区儿童哮喘现患病率为0．12％。3．34％，全国平均为1．54％。
- 庄丽丽周国平
- 关键词：哮喘易感基因支气管哮喘黏蛋白1慢性气道炎症性疾病遗传率
- 维生素与哮喘关系的研究进展被引量：5
- 2015年
- 维生素缺乏是哮喘发病的危险因素之一。维生素具有拮抗气道氧化性损伤、促进气道损伤的修复、抑制气道高反应、诱导免疫耐受、调节气道炎症等功能。维生素用于哮喘防治成为研究热点，但其效益性仍存在争议。维生素的受体广泛表达、信号通路复杂，维生素与哮喘发病相关机制有待更深入的研究。目前，维生素用于哮喘防治的临床研究已有报道，但结果尚不一致。哮喘是一种由环境和遗传因素共同作用的多基因遗传病，今后维生素用于哮喘防治的基础和临床研究可结合遗传和环境的群体差异。该文就维生素与哮喘关系的研究进展进行综述。
- 庄丽丽周国平
- 关键词：维生素哮喘
- 利克飞龙对大鼠肾小球系膜细胞白细胞介素-18诱导的趋化因子Fractalkine表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究新的非甾体类抗炎药利克飞龙(Licofelone)对大鼠肾小球系膜细胞IL-18诱导的趋化因子Fractalkine表达的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞。设立IL-18刺激组(加入10μg/LIL-18刺激肾小球系膜细胞24h)、Licofelone干预组(先用10、50、100μmol/L的Licofelone处理肾小球系膜细胞30min,再加入10μg/LIL-18刺激肾小球系膜细胞24h)、正常对照组(无IL-18刺激和Licofelone干预,加等量的9g/L盐水作为对照)。反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)测定各组FractalkinemRNA表达量。ELISA法测定各组细胞培养上清液中Fractalkine蛋白量。结果正常对照组FractalkinemRNA的相对表达量为179.0±21.0,IL-18刺激24h后,肾小球系膜细胞中趋化因子FractalkinemRNA表达上调为1220.1±185.7,与正常对照组比较有显著性差异(t=9.646P<0.01)。10、50、100μmol/L的Licofelone呈剂量依赖性拮抗IL-18诱导的FractalkinemRNA表达上调,FractalkinemRNA的相对表达量依次为899.7±85.3、369.6±36.7、236.6±35.6,与IL-18刺激组比较有显著性差异(t=2.798、7.780、9.006Pa<0.05)。IL-18刺激24h,肾小球系膜细胞中趋化因子Fractalkine蛋白表达量为(2097.4±293.8)ng/L,显著高于正常对照组(380.4±31.1)ng/L(t=10.068P<0.01)。10、50、100μmol/L的Licofelone呈剂量依赖性拮抗IL-18诱导的Fractalkine蛋白表达上调,细胞培养上清中Fractalkine蛋白量依次为(1257.9±245.6)、(908.2±155.3)、(650.7±126.6)ng/L,与IL-18刺激组比较有显著性差异(t=3.798、6.199、7.834Pa<0.05)。结论Licofelone拮抗肾小球系膜细胞中IL-18诱导的趋化因子Fractalkine基因表达。Licofe-lone在治疗免疫性肾损伤方面有一定的应用前景。
- 陈辉吴元俊周国平
- 关键词：白细胞介素-18肾小球系膜细胞
- 干扰素调节因子-5的研究进展被引量：1
- 2015年
- 干扰素调节因子-5能诱导IFN-β、IFN-产生，也能促进IL-6、IL-12、IL-17、IL-23、NF等细胞因子的分泌，从而参与机体的免疫反应、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡、肿瘤发生和细胞信号转导等过程。干扰素调节因子15在人体许多疾病的发生、发展中起重要作用。深入研究干扰素调节因子-5有助于我们可以更好地阐明相关疾病的发病机制并为治疗这些相关疾病提供理论依据和相应的靶点。
- 束进周国平
- 关键词：干扰素系统性红斑狼疮肿瘤
- ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的鉴定
- 2012年
- 目的构建表达血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因第一内含子中新启动子区的质粒,并研究其功能特征。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增ORMDL3基因第一内含子内新转录起始位点上下游776bp启动子区片段,酶切并连接此片段至pGL3-basic载体,构建含有ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的基因重组体,并转染人胚肾293细胞。荧光素酶检测报告基因启动子的活性,计算相对活性单位。生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果成功构建含有新启动子的重组质粒。与pGL3-basic空载体相比,新启动子活性明显增强,并定位于转录起始位点-363bp至-63bp之间,且该区域存在Sp1、GATA-1等转录因子的结合位点。结论 ORMDL3基因第一内含子中新转录起始位点上游具有启动子活性,在-363bp至-63bp区域存在转录调控元件,且Sp1、GATA-1等转录因子可能参与其转录调控。
- 袁文霄金蕊庄丽丽徐华国任伟周国平
- 关键词：哮喘
- 低氧诱导因子1α对钾-氯协同转运子1启动子调控作用的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:钾-氯共同转运子1(KCC1)启动子中有一推断的低氧诱导因子1α(HIF-1α)的结合位点,通过表达HIF-1α,探索该位点是否为真正的低氧诱导因子结合位点。方法:分别用KCC1野生型启动子和HIF-1α位点变异的KCC1启动子,与HIF-1α质粒或对照载体共转染HEK293细胞,用荧光素酶功能分析的方法观测HIF-1α对KCC1启动子活性的影响,用RT-PCR方法比较转染与不转染HIF-1α对KCC1表达水平的差异。结果:转染HIF-1α后野生型KCC1启动子荧光素酶活性为对照Z组的2.39倍,而变异的HIF-1α位点的KCC1启动子荧光素酶活性则在转染与不转染HIF-1α条件下差异无统计学意义,在HIF-1α转染条件下KCC1表达水平高于对照组的水平,HIF-1α转染条件下是HIF-1α不转染条件下表达量的3.19倍。结论:首次证实了HIF-1α可直接增强KCC1启动子的活性,HIF-1α可调节KCC1的表达水平。
- 唐利群周国平
- 关键词：协同转运子低氧诱导因子-1Α启动子
- 鞘氨醇-1-磷酸在支气管哮喘中作用的研究进展
- 2013年
- 鞘类脂质是一类广泛存在于各种真核细胞膜上的分子类物质。鞘脂类最初被认为是细胞膜的结构组成部分，随着研究的深入发现此类物质同时也是重要的信号分子。鞘氨醇1-磷酸（sphingosine-1-phosphate，SIP）是鞘脂类的代谢产物，在细胞的变异、增殖、凋亡以及血管生成的过程中是重要的生物活性信号。SIP在支气管哮喘的发病机制中扮演了重要角色。近期研究表明在肥大细胞中鞘氨醇激酶的激活通过FcεRI信号通路使鞘氨醇转变为S1P，参与诱导了气道平滑肌的收缩和气道重塑。这些新发现的信号途径为支气管哮喘患者提供了潜在的治疗靶点。
- 蒋莉周国平
- 关键词：鞘氨醇激酶支气管哮喘
- 氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞中促凋亡基因细胞周期和凋亡调控蛋白1表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞中促凋亡基因细胞周期和凋亡调控蛋白1(CCAR1)表达的影响。方法常规培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞。分为正常对照组(无过氧化氢处理的A549细胞)、0.1mmol/L过氧化氢处理的A549细胞组、0.5mmol/L过氧化氢处理的A549细胞组和1.0mmol/L过氧化氢处理的A549细胞组。利用DNA梯状电泳检测细胞凋亡。免疫荧光细胞化学检测CCAR1蛋白在A549细胞中的表达和分布。Western blot检测过氧化氢对A549细胞中CCAR1蛋白表达的影响。比色法测定半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的活性。结果DNA梯状电泳检测显示,1.0mmol/L过氧化氢处理A549细胞24h,电泳出现反映细胞凋亡的梯形条带。免疫荧光细胞化学检测显示CCAR1主要定位在细胞核,但胞质中也有分布。Western blot结果显示过氧化氢呈剂量依赖性地诱导A549细胞中CCAR1蛋白表达上调(Pa<0.05)。CCAR1蛋白的表达与促凋亡的Caspase-3的活性呈显著正相关(r=0.7212P<0.05)。结论氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞中促凋亡基因CCAR1蛋白表达上调。CCAR1可能参与了氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的调控,其机制可能涉及到Caspase-3活性改变。
- 邵小松陆超周国平胡毓华
- 关键词：氧化应激
