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缺氧及血管内皮生长因子对视网膜色素上皮细胞Opticin蛋白表达的影响: 2011年; 目的探讨缺氧及血管内皮生长因子（VEGF）对视网膜色素上皮（RPE）细胞Opticin蛋白表达的影响及其内在机制。方法实验研究。原代培养人眼RPE细胞，取生长良好的第3～6代细胞，接种于含DMEM培养液的6孔板中，于缺氧条件下或加入不同浓度（1、10、50及100μg／L）VEGF进行培养。逆转录聚合酶链反应（PCR）检测缺氧后RPE细胞中VEGFmRNA的表达。蛋白印迹法检测细胞内和细胞培养液中Opticin蛋白含量。明胶酶谱法检测细胞培养液中明胶酶活性。组间检测数据比较采用单因素方差分析。结果蛋白印迹法检测，显示缺氧组RPE细胞内Opticin蛋白含量无明显变化；而RPE细胞培养液中，缺氧组Opticin蛋白含量明显下降。逆转录PCR检测，缺氧组12、24hVEGFmRNA表达灰度值分别为0．81±0．04、0．67±0．07，均较正常对照组VEGFmRNA表达灰度值（0．21±0．03）明显升高，差异有统计学意义（F=483．60，P〈0．05）。添加不同浓度的外源性VEGF后，RPE细胞内Opticin蛋白表达无明显变化；添加1、10、50及100μg／L的外源性VEGF后，RPE细胞培养液中，Opticin蛋白表达灰度值分别为0．65±0．02、0．52±0．04、0．23±0．03、0．30±0．03，均较正常对照组Opticin蛋白表达灰度值（0．73±0．04）明显下降（F=141．38，P〈0．05）。明胶酶谱法分析，显示与基质金属蛋白酶-2相对应的位置出现明显的消化条带，且酶的活性随VEGF浓度的增加而递增。低浓度的乙二胺四乙酸可抑制由VEGF引起的RPE细胞培养液中Opticin蛋白含量减少。结论缺氧及VEGF作用可影响RPE细胞培养液中Opticin蛋白分泌，可能与增多的基质金属蛋白酶-2对Opticin蛋白的酶解作用有关。; 马进朱铁培张倩茹欧会林; 关键词：蛋白聚糖类细胞外基质蛋白质类色素上皮血管内皮生长因子A

玻璃体细胞的研究现状: 2011年; 玻璃体细胞（hyalocytes）位于玻璃体后皮质部，作为网状内皮系统的一部分，发挥着重要作用，例如维持玻璃体的透明以及无血管。目前人们对玻璃体细胞知之甚少，但玻璃体细胞与眼的生理以及病理生理密切相关。近年玻璃体细胞成为研究热点，发现其在多种眼内疾病尤其是玻璃体视网膜疾病的发生发展中起重要作用，本文对玻璃体细胞的来源、形态、细胞生理、功能、以及临床应用的研究现状等作一综述。; 欧会林马进

大鼠opticin表达基因小发夹RNA真核表达质粒的构建及鉴定: 2011年; 目的构建针对大鼠opticin表达基因（OPTC）的特异性小发夹RNA（shRNA）真核表达质粒.方法用DNA重组技术将针对大鼠OPTC基因不同位点所设计的4个shRNA序列克隆到真核表达质粒中.根据构建的4对质粒设置shRNA-1组、shRNA-2组、shRNA-3组、shRNA-4组,同时只加转染试剂不加质粒的细胞设为正常对照组,转染阴性质粒的细胞为阴性对照组.用脂质体lipofectimine 2000将4个shRNA质粒分别转染至体外培养的原代大鼠睫状体非色素上皮（NPE）细胞,转染后采用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测OPTC基因的mRNA及opticin蛋白的相对表达量和抑制率.结果各组质粒转染大鼠NPE细胞后,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组细胞OPTC mRNA相对表达较正常对照组均明显下调（F=10.239,P=0.000）,各组OPTCmRNA抑制率为85.7%、62.87%、54.87%、48.77%.各质粒干扰组细胞opticin蛋白表达较正常组均有不同程度下降（F=17.870,P=0.000）,各组opticin蛋白抑制率为78.7%、34.6%、31.1%、16.8%.结论 OPTC基因干扰质粒shRNA-1可以有效抑制大鼠睫状体NPE细胞opticin的表达.; 马进朱铁培张倩茹; 关键词：基因转移技术动物实验

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国家自然科学基金(30872824)

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