国家自然科学基金(30571829)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
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- 肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L的表达及相关性研究被引量：7
- 2011年
- 目的探讨肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测40例肝癌组织和10例良性肿瘤组织中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达,分析它们之间的关系及与肝癌临床病理参数的关系。结果 40例肝细胞癌中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为45%,75%,70%,10例肝良性病变中Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白的表达率分别为0%,30%,30%。Bcl-2,Fas,Fas-L蛋白在肝细胞癌中的表达率高于肝良性病变,差异有统计学意义(P<0.05)。其中Bcl-2蛋白的表达与Fas蛋白的表达呈正相关(r=0.390,P<0.05)。结论 HCC的Bcl-2表达上调可能通过阻断Fas/Fas-L凋亡通路和其直接抗凋亡作用导致HCC细胞得以免疫逃逸。Fas,Fas-L表达的肿瘤细胞具有更强的浸润转移能力,其极有可能作为判断肿瘤转移能力的参考指标。
- 沈浩元王炜刘猛姜开文李丰
- 关键词：BCL-2FASFAS-L
- 大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及相关性研究
- 2014年
- 目的探讨大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及其二者的相互关系。方法随机将100只SD大鼠分为模型组与对照组各50只,模型组大鼠给予0.01%DEN自由饮用18周诱导大鼠肝癌模型,对照组大鼠常规自由饮水,于4、8、12、16、18周分别处死模型组10只,对照组10只。采用免疫组化、RT-PCR、Western bolt法检测survivin和livin的表达。结果免疫组化结果显示:模型组大鼠survivin、livin表达总阳性率分别为82%(41/50)、86%(43/50),survivin与livin都表达于肝癌组织及癌旁肝组织中,且二者的表达重叠,Spearman相关分析表明,二者的表达有相关性(r=0.9027,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,肝癌组织中均有survivin mRNA和livin mRNA表达,随着肝癌程度的加重而增加,与对照组肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,survivin、livin的表达随着肝癌程度的加重而增加,对照组肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin、livin在肝癌组织中高表达,且二者的表达密切相关,为肝细胞癌的临床治疗以及预后提供理论依据。
- 李丰王炜姜开文张隆鑫
- 关键词：肝细胞癌SURVIVINLIVIN
- 肝癌组织中Bcl-2和NF-κB的表达与AFP相关性的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:观察凋亡相关基因Bcl-2、核因子NF-κB在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达,并探讨二者与AFP之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测40例HCC组织(其中AFP阳性20例,AFP阴性20例)和10例良性肿瘤组织中Bcl-2、NF-κB的表达。结果:40例HCC患者Bcl-2阳性表达率为45.0%,NF-κB阳性表达率为57.5%;其中AFP阳性细胞Bcl-2表达率为55.0%,AFP阴性细胞为35.0%;AFP阳性细胞NF-κB表达率为75.0%,AFP阴性细胞为40.0%。HCC细胞NF-kB和Bcl-2的表达呈正相关(r=0.778,P<0.01)。结论:Bcl-2、NF-κB的异常表达同HCC的抗凋亡和耐药性有一定关系,AFP阳性HCC细胞的Bcl-2、NF-κB阳性表达率更高。Bcl-2和NF-κB可以考虑作为预后的判断指标之一。
- 王炜沈浩元刘猛姜开文李丰
- 关键词：肝细胞甲胎蛋白BCL-2NF-ΚB
- 大鼠肝细胞癌变过程中Survivin与Apollon的动态表达研究被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨大鼠肝细胞癌变过程中survivin和apollon的动态表达及意义。方法:以改良型间断饮用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导大鼠原发性肝癌模型,观察大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化,采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠HCC不同时期survivin和apollon的蛋白及mRNA表达。结果:改良型间断饮用DEN成功诱导了大鼠肝癌模型,诱癌结束时实验组大鼠自然死亡4只,死亡率5.88%(4/68)。实验组存活的16只大鼠15只形成肝癌,诱癌率93.75%(15/16)。免疫组化结果显示:survivin和apollon阳性表达率逐渐升高,各组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),survivin和apollon在肝癌组中表达呈正相关关系(r=0.515,p=0.003<0.05)。RT-PCR检测结果显示,survivin mRNA和apollon mRNA表达,随着肝癌程度的加重而增加,与对照组肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:survivin、apollon在肝癌组织中呈高表达,提示二者在HCC的发生发展中起重要作用,可作为肝癌早期诊断的潜在标志物。
- 张隆鑫王炜
- 关键词：肝细胞癌SURVIVINAPOLLON
- 靶向性重组腺病毒对裸鼠肝癌种植瘤的治疗作用
- 2011年
- 目的观察靶向性重组腺病毒Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3对原发性肝癌HepG2细胞及裸鼠皮下种植瘤的治疗作用。方法采用先前构建的靶向性重组腺病毒Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3感染肝癌HepG2细胞、乳腺癌MDA-MB-231细胞以及正常肝L-02细胞,观察细胞形态学改变,并通过流式细胞术检测细胞凋亡指数;采用裸鼠皮下种植瘤模型、重组腺病毒瘤内给药治疗,观察肿瘤生长情况及病理学改变。结果 流式细胞学可见HepG2细胞凋亡和明显的凋亡峰,MDA-MB-231和L-02细胞凋亡指数分别为0和7.3%,明显低于HepG2细胞(48.2%),P<0.01。种植肿瘤细胞2周后HepG2细胞组、MDA-MB-231细胞组和对照组肿瘤体积大小分别为(0.26±0.31)cm3、(0.25±0.15)cm3和(0.26±0.28)cm3,各组间差异无统计学意义(P>0.05);种植肿瘤细胞4周后HepG2细胞组、MDA-MB-231细胞组和对照组肿瘤体积大小分别为(0.53±0.12)cm3、(0.49±0.22)cm3和(0.54±0.13)cm3,各组间差异无统计学意义(P>0.05);HepG2细胞组肿瘤经重组腺病毒Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3治疗后8周时肿瘤体积为(0.65±0.13)cm3,明显小于MDA-MB-231细胞组〔(1.27±0.32)cm3〕和对照组〔(1.43±1.09)cm3〕,P<0.01,而后两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后HepG2细胞组肿瘤细胞出现坏死区,伴淋巴浸润细胞和凋亡细胞;对照组肿瘤细胞区域内未见明显坏死区;而MDA-MB-231细胞组肿瘤细胞呈实性排列,呈小腺腔样结构,异型性明显,瘤巨细胞及多核瘤细胞可见,治疗前、后未见明显变化。结论 靶向性重组腺病毒Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3具有有效靶向性凋亡诱导作用,体内、外治疗原发性肝癌有效,可能为原发性肝癌的靶向性基因治疗提供新途径。
- 王炜沈浩元刘猛
- 关键词：肝细胞性肝癌CASPASE-3种植瘤裸鼠
- 靶向性反向半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3重组腺病毒诱导肝癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察靶向性反向半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（r—caspase-3）重组腺病毒体外诱导肝癌细胞凋亡的效果和特异性。方法构建甲胎蛋白（AFP）增强子和白蛋白（ALB）启动子腺病毒载体（pAdTrack．EATP．PALB），亚克隆r—caspase-3至载体pAdTrack—EAFP-PALB,PmeI线性化pAdTrack—EAFP．PALB／r—easpase．3，电转化至BJ／AdEasy菌，获得重组腺病毒骨架pAdeasy—EnrP-PALB／r．caspase一3。PacI酶切后脂质体转染AD293细胞进行包装、扩增、获得病毒。绿色荧光蛋白（GFP）监测病毒滴度和感染效率；RT-PCR和Western印迹法检测r-caspase．3在HepG2细胞中的表达；流式细胞术检测其特异性诱导肝癌细胞凋亡的作用。结果穿梭载体pAdTrack．EAFP-PALB／r—caspase-3酶切、测序正确。穿梭载体、pAdeasy-1载体同源重组后PCR及PacI酶切鉴定结果表明pAdeasy．E＆FP-PALB／r—caspase-3重组成功。转染AD293细胞后可观察到GFP的表达。病毒感染HepG2细胞总DNA经RT—PCR和Western印迹均可检测到目的基因的表达，证实Ad-E—FP-PAL／dr—caspase-3病毒颗粒包装成功；靶向性r—easpase-3重组腺病毒感染各组细胞24h后，各组凋亡指数分别为：HepG细胞48．2％、7721细胞17．7％、L-02细胞7．3％、MDA—MB-231细胞0％。结论成功构建了靶向性Ad．EAFP-PALB／r—caspase-3重组腺病毒，体外实验表明其具有凋亡诱导靶向性，为进一步研究靶向性r—caspase-3基因治疗肝细胞肝癌及其生物学功能提供了依据。
- 王炜沈浩元丘昶儒林浩铭程卫
- 关键词：腺病毒半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3肝肿瘤靶向性
- 重组腺病毒r-caspase3的靶向性实验研究
- 2011年
- 目的:观察构建靶向性反向半胱氨酸蛋白酶3(r-caspase3)重组腺病毒对AFP表达阳性肝癌细胞凋亡诱导的效果和特异性。方法:采用AFP表达强阳性细胞HepG2、表达弱阳性细胞7721、正常肝细胞L-02以及AFP表达阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别感染构建之重组腺病毒Ad-r-caspase3、Ad-EAFPPALB/r-caspase3及Ad-PALB/r-caspase3,SRB染色测定O.D值,计算细胞死亡率和IC50;流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果:HepG2、7721细胞对各腺病毒敏感程度为Ad-EAFPPALB/r-caspase3>Ad-PALB/r-caspase3>Ad-r-caspase3;流式细胞术检测结果显示重组腺病毒Ad-EAFPPALB/r-caspase3具有极强的凋亡选择性,AFP表达越强,凋亡指数越高。结论:靶向性Ad-EAFP-PALB/r-caspase3重组腺病毒具有肝细胞性肝癌凋亡选择性,同AFP表达呈正相关。
- 王炜沈浩元刘猛
- 关键词：腺病毒靶向性
- 肝细胞肝癌靶向性r-Caspase-3重组腺病毒的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建肝细胞肝癌特异性表达反向半胱氨酸蛋白酶3(r-Caspase-3)重组腺病毒,为肝细胞肝癌的基因治疗提供新策略。方法构建甲胎蛋白(AFP)增强子和白蛋白(ALB)启动子腺病毒载体(pAdTrack-EAFP-PALB),然后将目的基因r-Caspase-3亚克隆到载体pAdTrack-EAFP-PALB上,获得重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3,经PmeⅠ酶切线性化后与pAdEasy-1同源重组,获得重组腺病毒骨架pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3;鉴定正确的pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3经PacⅠ酶切线性化后脂质体转染AD293细胞进行包装、扩增,获得病毒。绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率;RT-PCR和West-ernblot法检测r-Caspase-3在HepG2细胞中的表达;SRB染色法评估重组腺病毒对HepG2细胞的抑制作用,初步观察HepG2细胞凋亡状况。结果穿梭载体pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3酶切、测序正确。穿梭载体、pAdEasy-1载体同源重组后PCR及PacⅠ酶切鉴定结果表明pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3重组成功;经PacⅠ酶切线性化后,pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3转染AD293细胞即可观察到GFP的表达;回收病毒可重复感染AD293细胞,RT-PCR和Western blot均可检测到r-Caspase-3的表达,证实Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3病毒颗粒包装成功;SRB染色检测发现Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3具有凋亡诱导特异性。结论靶向性Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3重组腺病毒构建成功,并具有凋亡诱导靶向性,为进一步研究靶向性r-Caspase-3基因治疗肝细胞肝癌及其生物学功能奠定了基础。
- 王炜程卫丘昶儒
- 关键词：腺病毒靶向性肝细胞肝癌
