国家自然科学基金(30571805)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：闵军曹君商昌珍陈亚进崔罗方更多>>
- 相关机构：中山大学孙逸仙纪念医院中山大学中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
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- 多因子联合诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞样细胞被引量：2
- 2012年
- 目的建立有效的体外诱导人胚胎干细胞（hESCs）分化为肝细胞样细胞的培养体系。方法将H9hESC细胞株接种到基底膜提取物包被的培养板上，序贯加入含有下列诱导因子的分化培养基诱导分化：100μg／L细胞因子活化素A（activinA）诱导3d，20μg／L骨形成蛋白4（BMP4）和10μg／L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导4d，10μ∥L肝细胞生长因子（HGF）诱导5d，最后以含10μg／L制瘤素M（OSM）及1×10^-7moVL地塞米松（Dex）的培养液继续诱导4d。于细胞诱导分化第16天，采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫荧光检测分化细胞肝脏特异性基因和蛋白表达水平；过碘酸．雪夫反应（PAS）试验和吲哚氰绿（ICG）摄取试验检测分化细胞是否具备肝细胞功能。结果activinA、BMP4、bFGF、HGF、OSM和Dex联合诱导的分化细胞具有类似肝细胞的形态结构，呈多角形或卵圆形；RT—PCR结果显示分化第16天的细胞表达甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白7（CK7）、细胞角蛋白19（CK19）、肝细胞核因子-4a（HNF-4a）、a1-抗胰蛋白酶（AAT）等肝脏特异性基因；免疫荧光化学检测结果显示分化第16天的细胞表达AFP、ALB、CK19、CYP7A1等肝脏特异性蛋白；PAS试验及ICG试验显示分化细胞具备糖原合成和ICG摄取释放等肝细胞功能。结论体外联合多种诱导因子可诱导hESCs定向分化为肝细胞样细胞。
- 崔罗方商昌珍任萌曹君吕丽虹陈亚进闵军
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞样细胞分化
- 胚胎干细胞体外分化为功能性肝细胞过程中肝细胞生长因子诱导系统中瘀胆血清的促进作用(英文)
- 2007年
- 背景:目前各种诱导胚胎干细胞(ESC)分化为肝细胞的方法中,大多忽略了对分化细胞功能的诱导与鉴定。是否表达肝细胞功能应作为ESC向肝细胞分化的鉴定指标之一。目的:观察在肝细胞生长因子(HGF)体外诱导小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化的体系中,瘀胆血清病理环境对分化细胞表达肝细胞功能的作用。设计:观察对比,体外细胞学实验。单位:中山大学附属第二医院肝胆外科。材料:实验于2004-10/2007-02在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。小鼠E14ESC系由中山大学干细胞与组织工程中心提供;SD大鼠20只,鼠龄2周,购自中山大学动物实验中心。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。方法:对SD大鼠施以胆总管结扎切断手术,制作瘀胆模型,饲养10d后取全血制备瘀胆血清。用悬滴培养ESC发育5～7d的拟胚体,将其离散细胞种植于不同的分化体系,分别进行自主分化、20μg/L肝细胞生长因子、5%瘀胆血清+20μg/L肝细胞生长因子诱导分化。主要观察指标:①倒置显微镜下动态观察细胞形态变化。②分化4周时进行白蛋白、甲胎蛋白、CK18/19、糖原及吲哚氰绿和荧光二乙酯染色。③采用相应试剂盒每3天检测细胞合成白蛋白、三酰甘油及尿素氮功能。结果:①ESC自主分化难以控制,分化为3个胚层的细胞。肝细胞生长因子促进ESC向内脏内胚层和中胚层(心肌)分化,但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。②引入瘀胆血清的肝细胞生长因子诱导体系中ESC能分化为较为形态均一的多角形细胞,其糖原、吲哚氰绿和荧光二乙酯染色均为阳性;白蛋白、三酰甘油和尿素氮合成能力显著高于自发分化和肝细胞生长因子诱导结果(P<0.05～0.01)。结论:采用瘀胆血清体外模拟病理性微环境可促进HGF诱导的ESC源性肝细胞表达高水平的肝特异性代谢功能。
- 闵军方天翎陈亚进邓小耿商昌珍刘璐曹君陈积圣
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞生长因子肝细胞
