国家质检总局科技计划项目(2009IK212)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：广东出入境检验检疫局广州军区广州总医院广东省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 输入性甲型H1N1流感病毒HA基因进化特征被引量：1
- 2014年
- 目的分析输入性甲型H1N1流感病毒的HA基因进化特征,及早发现变异株。方法选取广东口岸入境人群中检出的53份输入性甲型H1N1流感阳性样本,扩增其病毒HA基因并测序,与2009年甲型H1N1流感代表株A/California/04/2009/H1N1比较,对甲型H1N1流感病毒的HA基因进行系统进化分析。结果 HA基因进化树可分为4个分支,2009年、2010年病毒共同位于第Ⅰ、Ⅱ分支,2011年病毒位于第Ⅲ、Ⅳ分支,其中第Ⅰ、Ⅱ分支与Ⅲ、Ⅳ分支距离较远。HA核苷酸序列有11个碱基位点变异较为显著。HA蛋白5个抗原决定簇位点S202T、A203T、D204N、S220T和R222K发生变异,受体结合位点、糖基化位点氨基酸较保守。通过三维构象看出,大部分氨基酸变异位于HA1分子表面。结论甲型H1N1流感病毒HA基因已发生一定程度的变异。随着突变的不断积累,病毒极可能会通过改变其抗原性,从而引起新的流行。
- 刘丽珊黄吉城师永霞郑夔李小波洪烨
- 关键词：甲型H1N1流感病毒HA基因
- 抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选
- 2009年
- 目的利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞，构建人源化Fv段单链抗体（scFv）噬菌体文库，并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA，逆转录成cDNA，以其为模板，利用家族特异性IgG基因的引物，扩增重链和轻链的可变区基因，并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后，重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中。将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1，酶切和PCR鉴定抗体库的重组率，通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容，用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体。结果构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库，库容为3．75×10^4；筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。结论成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库，并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体，为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据。
- 黄吉城武婕郭波旋张宏斌相大鹏师永霞李小波洪烨郑夔幸芦琴杨晓
- 关键词：噬菌体文库
- 埃博拉出血热疫苗研究进展被引量：3
- 2010年
- 埃博拉出血热(Ebola Hemorrhagic Fever,EHF)是一种烈性的传染病,病死率很高,最高可达90%。EHF自1976年首次在前扎伊尔和苏丹发生流行至今,共发生人间较大规模流行6次,暴发、流行或散发病例多次。据WHO统计从1976年至今,已有2000多确诊病例,1300多人死于不同亚型的EHF。虽然目前还没有特效的抗病毒药物和有效的疫苗可用于人体预防和治疗EHF,但近年来国际上在疫苗的研究方面取得了较大的进展。本文对EHF疫苗的相关研究进展进行综述。
- 夏文英黄吉城郑夔
- 关键词：埃博拉出血热疫苗
- 特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定
- 2011年
- 目的从人源化噬菌体抗体库（human single fold scFv libraries I＋J）中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体，为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素（hemagglutitin，HA）蛋白和核蛋白（nucleoprotein，NP）为目的蛋白，对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选，经过3轮筛选富集后，随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养，ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆，并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达，ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性，PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段，并对阳性单链抗体分子测序和序列分析。结果经过3轮筛选，分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体，PCR扩增都得到了长为300、302和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段，测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同，而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同，而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段，可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础，也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息。
- 武婕张宏斌柯昌文陈秋霞李晖周杰黄吉城张欣邹丽容
- 关键词：噬菌体文库
