江苏省自然科学基金(BK20130027)
- 作品数：18 被引量：91H指数：7
- 相关作者：熊爱生王枫王广龙马静徐志胜更多>>
- 相关机构：南京农业大学淮阴工学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 大蒜谷胱甘肽硫转移酶基因AsGST的克隆及其对盐胁迫的响应被引量：11
- 2019年
- 为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用实时荧光定量PCR方法,分析AsGST基因在大蒜根、鳞茎和叶片中的表达差异及其对盐胁迫的响应情况。结果表明,大蒜AsGST基因全长663 bp,编码220个氨基酸,推测蛋白质分子质量为25.58 kDa,理论等电点为6.55,属于tau类GST家族。植物GST的序列相似性较低,但在结构上相对保守。在蛋白的N端含有谷胱甘肽特异结合位点(G位点),C端含有可变性较大的疏水底物结合位点(H位点),在进化关系上AsGST与茄科作物较近。空间结构分析表明,大蒜GST的三级结构由3个β-折叠和11个α-螺旋构成。实时荧光定量PCR显示,苍山四六瓣中GST基因在根中的表达量最高,其次是叶,在鳞茎中的表达量较低,具有明显的组织特异性。盐胁迫处理4 h后,各组织内AsGST基因的表达量均升至最高,说明该基因可响应盐胁迫逆境信号。本研究结果为进一步研究大蒜GST基因的功能奠定了一定的理论基础。
- 梁志乐尚珂含王立辉周瑾王广龙熊爱生
- 关键词：大蒜盐胁迫基因克隆
- 大蒜扩展蛋白基因AsEXPA8的分离及其参与渗透胁迫响应的分析被引量：1
- 2022年
- 扩展蛋白在植物生长发育和应对环境变化等过程中发挥重要作用。为了解大蒜扩展蛋白基因的序列特征及其在渗透胁迫下的功能,利用逆转录PCR(RT-PCR)方法从大蒜中克隆得到AsEXPA8基因,采用NCBI、ExPASy、SignalP 5.0和STRING等网站以及DNAMAN和MEGA 5.1软件对其序列进行分析,并采用实时荧光定量PCR技术对AsEXPA8基因在盐胁迫和模拟干旱胁迫下的表达特征进行研究。序列分析结果表明,AsEXPA8含有1个774 bp的开放阅读框,编码257个氨基酸。AsEXPA8蛋白有1个组氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸(His-Phe-Asp,HFD)基序,N端和C端分别含有8个保守的半胱氨酸残基和4个保守的色氨酸残基,具有信号肽和跨膜结构域,参与了生长素和赤霉素等激素调控细胞壁重构的过程。AsEXPA8在大蒜不同组织中均能表达,在叶片中表达相对较高。干旱胁迫和盐胁迫在不同组织内均诱导了AsEXPA8的表达。结果表明,AsEXPA8基因可能参与了大蒜植株抵御盐胁迫和干旱胁迫的过程。本研究结果为揭示AsEXPA8基因在大蒜应对渗透胁迫过程中的功能提供了理论依据。
- 王广龙刘梦婷王云鹏任旭琴陈伯清熊爱生
- 关键词：大蒜渗透胁迫基因克隆
- 胡萝卜ACC合成酶基因DcACS的克隆与表达分析被引量：4
- 2018年
- 为分析ACS基因在胡萝卜不同组织和逆境胁迫条件下的表达情况,以胡萝卜品种黑田五寸为试验材料,克隆得到编码1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)的基因DcACS,采用DNAMAN、NCBI、ExPASy和MEGA 5.1等生物信息学软件对其序列特征进行分析,并利用实时荧光定量PCR检测其在不同胡萝卜组织和非生物胁迫条件下的表达水平。序列分析结果表明,胡萝卜DcACS基因全长1 485 bp,编码494个氨基酸;推测的氨基酸序列含有ACS特有的7个保守结构域和4个不变氨基酸残基,在进化关系上与葫芦科的黄瓜和香瓜亲缘关系最接近。实时荧光定量PCR结果表明,DcACS基因在叶片中的表达量最高,具有明显的组织特异性,并响应高温、低温、干旱和盐胁迫等非生物胁迫。本研究克隆的DcACS基因为研究胡萝卜生长发育及响应非生物胁迫等过程提供了一定的理论依据。
- 王广龙王广龙陈伯清任旭琴熊爱生
- 关键词：基因克隆非生物胁迫胡萝卜
- 芹菜水孔蛋白基因AgPIP2;1的克隆及其对非生物胁迫的响应被引量：1
- 2020年
- 为了研究芹菜质膜内在蛋白基因的序列特征及其在非生物胁迫条件下的表达特性,探讨其抗逆功能,以芹菜品种六合黄心芹为试验材料,通过RT-PCR技术克隆AgPIP2;1基因,通过生物信息学软件分析其核苷酸和氨基酸序列特征,并采用荧光定量PCR技术检测其在不同组织的表达及其对非生物胁迫的响应。结果表明,AgPIP2;1基因含有1个861 bp的开放阅读框,编码286个氨基酸,其编码的蛋白属于PIP2类蛋白。氨基酸序列分析显示,AgPIP2;1含有高度保守的NPA基序以及高等植物PIP蛋白的保守序列,与其他物种PIP2类蛋白具有较高的同源性,与胡萝卜DcPIP2;1的氨基酸序列同源性达到97.90%。在亲缘关系上与大豆GmPIP2;1、胡萝卜DcPIP2;1和绿豆VrPIP2;1较为接近。实时荧光定量PCR技术分析表明,AgPIP2;1基因在芹菜根、叶柄和叶片中均有表达,其中在叶片中的表达量最高,在根中的表达量最低,呈现比较明显的组织特异性。此外,AgPIP2;1基因受到高温、低温、干旱和盐等非生物胁迫的诱导,说明该基因可能参与芹菜抵御非生物胁迫的过程。本研究为进一步了解AgPIP2;1基因的功能及其在非生物胁迫中的作用奠定了基础。
- 尚珂含杨舒婷卞诗村刘梦婷安亚虹王广龙熊爱生
- 关键词：芹菜非生物胁迫基因克隆
- 室温贮藏过程中胡萝卜口感及部分营养成分含量变化被引量：7
- 2014年
- 胡萝卜（Daucus carota var．sativaDC．）别名红萝卜，为2年生草本植物，原产于中亚、西亚和非洲北部，于13世纪末传人中国；其根部营养物质丰富，特别是胡萝卜素及维生素等含量较高。胡萝卜在中国南北方栽种广泛，主要种植在长江以北地区，特别是高寒地区，是该地区主要冬贮蔬菜之一。中国是胡萝卜栽种和产量大国，栽种面积占全球栽种面积的40％，产量占全球总产量的30％左右。
- 谭国飞王枫马静田畅陈逸云熊爱生
- 关键词：胡萝卜室温贮藏口感VC可溶性糖
- 胡萝卜WRKY69基因(DcWRKY69)的克隆及其对不同植物生长调节剂的响应被引量：1
- 2019年
- 以胡萝卜品种‘黑田五寸’(Daucus carota var.sativa‘Heitian Wucun’)为研究对象,采用RT-PCR技术从叶片cDNA中克隆获得DcWRKY69基因片段,并对该基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;同时,采用RT-qPCR技术比较了0.1 mmol·L^-1茉莉酸甲酯(MeJA)、1.0 mmol·L^-1水杨酸(SA)、0.1 mmol·L^-1赤霉素(GA3)和0.1 mmol·L^-1脱落酸(ABA)处理12 h内叶中DcWRKY69基因相对表达量的差异。结果表明:DcWRKY69基因包含1个长度为783 bp的开放阅读框(ORF),编码260个氨基酸;DcWRKY69转录因子氨基酸序列在第52至第110位含有1个WRKY结构域,其锌指结构类型为C2 H2型,理论相对分子质量为30030,理论等电点为pI 4.78;该转录因子含有34个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,亲水性氨基酸较多,且酸性氨基酸比例最高(27%);该转录因子的二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和随机卷曲组成,比例分别为21.92%、4.23%、11.92%和61.92%。序列比对和系统进化树分析结果表明:WRKY转录因子在植物进化过程中具有高度的保守性。RT-qPCR分析结果表明:经MeJA、SA、GA3和ABA处理后,DcWRKY69基因相对表达量的变化趋势不同,分别在处理后8、12、1和4 h达到峰值,且显著高于对照(处理0 h)。研究结果显示:DcWRKY69转录因子属于Ⅱ类WRKY转录因子,为亲水性蛋白,且可能属于非分泌蛋白;DcWRKY69基因可能参与胡萝卜对不同植物生长调节剂的响应过程,但其对不同植物生长调节剂的响应模式存在差异。
- 张榕蓉王雅慧李彤丁旭徐志胜熊爱生
- 关键词：胡萝卜基因克隆植物生长调节剂
- 番茄2个ERF-B1亚族转录因子基因的克隆及其对生物和非生物胁迫响应被引量：11
- 2019年
- 为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669 bp的开放阅读框,编码225和222个氨基酸,各含有1个保守的AP2结构域,属于亲水性蛋白。进化分析表明,这2个ERF转录因子均属于AP2/ERF家族中ERF亚族的B1组。SlERF83和SlERF109三级结构都含有1个α-螺旋和3个β-折叠。酵母单杂交及β-半乳糖苷酶活性测定结果证明SlERF83转录因子可以与GCC-box结合。番茄2个ERF蛋白启动子含有多种逆境相关的顺式作用元件。采用荧光定量PCR检测SlERF83和SlERF109在非生物和生物胁迫下的表达,结果表明,高盐和干旱胁迫下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制;水杨酸处理能够诱导SlERF83和SlERF109基因的表达;茉莉酸甲酯处理下SlERF83表达水平提高,SlERF109表达量降低;番茄黄化曲叶病毒侵染下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制。SlERF83和SlERF109转录因子可能参与了番茄对生物及非生物胁迫的响应过程。本研究结果为进一步深入开展ERF转录因子调控番茄抗逆分子机制研究提供了一定的理论依据。
- 王雅慧李彤黄莹刘洁霞王枫熊爱生
- 关键词：番茄转录因子酵母单杂交
- 紫色与非紫色芹菜花青素和芹菜素含量及合成基因表达分析被引量：8
- 2017年
- 高等植物中花青素合成与芹菜素合成之间存在共同的前体物质。利用非紫色芹菜‘六合黄心芹’和紫色芹菜‘南选六合紫芹’(从‘六合黄心芹’中选择而来)的叶柄为花青素和芹菜素代谢研究材料,利用荧光定量PCR方法检测花青素和芹菜素合成相关基因的表达水平。研究结果表明,‘六合黄心芹’叶柄中未检测到花青素积累,而‘南选六合紫芹’叶柄中的花青素含量呈现较高水平(0.0523 mg·g^(-1)FW)。‘六合黄心芹’叶柄芹菜素含量(0.0172 mg·g^(-1) FW)显著高于‘南选六合紫芹’(0.0124 mg·g^(-1) FW)。荧光定量PCR结果表明,除了AgFNS之外,其余花青素和芹菜素代谢相关基因(AgPAL、AgC4H、AgCHS、AgCHI、AgFNS、AgF3H、AgF3’H、AgDFR、AgANS和Ag3GT)在‘南选六合紫芹’叶柄中的表达量显著或者极显著高于‘六合黄心芹’;黄酮合成酶基因AgFNS在‘六合黄心芹’叶柄中的表达量为‘南选六合紫芹’的11.69倍。
- 谭国飞王枫马静张馨月熊爱生
- 关键词：芹菜花青素芹菜素合成基因
- 芹菜NAC转录因子基因AgNAC1的克隆及其对非生物胁迫的响应被引量：11
- 2018年
- 通过RT-PCR方法,从芹菜‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆获得编码NAC转录因子的基因AgNAC1。利用生物信息学方法分析其编码氨基酸序列组成、蛋白质理化性质、亲缘关系、空间结构等,采用荧光定量PCR技术检测基因在不同非生物胁迫下的表达水平。结果表明:‘六合黄心芹’和‘文图拉’AgNAC1开放阅读框长度均为957bp,编码318个氨基酸,其蛋白质相对分子量分别为36.89和36.77 kD,理论等电点分别为5.94和5.78。AgNAC1蛋白与不同植物中NAC家族成员同源性比对和进化树分析表明,其与胡萝卜Dc NAC属于同一个分支,进化距离最近。蛋白功能域预测显示,AgNAC1有多个α螺旋和β转角二级结构单元。荧光定量PCR结果表明,AgNAC1在芹菜叶中表达量最高,具有组织特异性,同时对高温、低温、干旱和盐胁迫均有响应。‘六合黄心芹’中AgNAC1的表达水平在高温处理24 h达到最高。‘文图拉’中AgNAC1的表达水平在高温、低温及盐处理后2h和8h高于对照,呈现先下降后上升的趋势,在干旱处理4 h时表达水平最高。
- 段奥其冯凯刘洁霞徐志胜熊爱生
- 关键词：芹菜NAC转录因子非生物胁迫
- 芹菜赤霉素氧化酶基因AgGA2ox的克隆及非生物逆境下表达分析被引量：6
- 2016年
- 赤霉素(GAs)对植物生长发育有重要影响,赤霉素氧化酶基因(GA2ox)在GAs合成过程中起重要调控作用。本文从不同芹菜(Apium graveolens)品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆得到编码赤霉素氧化酶的基因AgGA2ox,序列分析显示两个品种AgGA2ox基因均包含一个全长996 bp的开放阅读框,编码331个氨基酸,在核苷酸水平上有8个碱基位点的差异,氨基酸水平上有2个位点的差异。AgGA2ox蛋白在‘六合黄心芹’和‘文图拉’两个品种中的相对分子质量分别为37 044.6和36984.5,理论等电点均为8.31。进化分析表明,芹菜Ag GA2ox在植物进化间具有高度保守性,与西洋参(Panax quinquefolius)进化关系最为接近。实时定量PCR显示,AgGA2ox基因表达具有组织特异性,在芹菜叶柄中表达量最高;另外,AgGA2ox基因在4种非生物逆境条件[4°C低温、38°C高温、20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)及0.2 mol·L^(-1)NaCl]下均有响应,低温处理下AgGA2ox基因表达为明显上调,高温、干旱和盐处理下AgGA2ox基因表达为下调。‘六合黄心芹’与‘文图拉’AgGA2ox基因在逆境下的表达差异可能与不同品种抗逆性有关。
- 冯凯王广龙黄莹徐志胜黄蔚熊爱生
- 关键词：芹菜赤霉素非生物逆境
