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钙调素蛋白磷酸酶对Slingshot-1L的调控作用: 2010年; 目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及体外实验检测PP3B对SSH-1L的活性调控作用;应用免疫共沉实验检测PP2B与SSH-1L的相互结合情况。结果Ca2+信号诱导骨肉瘤细胞形成伪叶,同时SSH-1L与F-actin移位共聚集至细胞膜伪叶,但是被PP2B有效抑制剂Cypermethrin完全阻断;在体外,SSH-1L磷酸酶活性测定实验以及SSH-1L与PP2B结合实验证实SSH-1L与PP2B在细胞内是一对相互结合的蛋白质,同时PP2B具有促进SSH-1L酶活性的作用。结论PP2B通路对细胞伪叶的形成及细胞运动具有重要调控作用,同时对SSH-1L酶具有促进其活性的作用。; 王杨王岩赵建武高忠礼

正常青年人噪声下普通话双音节词空间分离优势测试被引量：2: 2016年; 目的探讨对正常青年人进行普通话言语测听材料（mandarin speech test materials,MSTMs）中的双音节词测试时信号与噪声空间分离对其言语识别能力的影响。方法使用MSTMs中的双音节词表对50例（预测试6例,正式测试44例）听力正常青年人进行两种环境、六种信噪比（S/N）（噪声入射角为0°时信噪比为0、-2、-4、-6、-8、-10dB;噪声入射角为90°时信噪比为-10、-12、-14、-16、-18、-20dB）条件下的言语识别率测试。结果在噪声入射角为0°和90°时,随着信噪比降低,言语识别率为90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%时,0°~90°信噪比的差值分别为5、6.1、6.8、7.3、7.8、8.3、8.9、9.3。结论噪声和言语声的方向会影响言语识别率的得分,当噪声和言语声空间分离优势增大（噪声入射角0°~90°信噪比差值越小）时,言语识别率更好。; 陈静俞海英王硕李玉玲武文芳张华; 关键词：双音节词言语识别率信噪比

人LIMK1基因荧光真核表达载体的构建及在人成骨肉瘤MG63细胞中的表达被引量：1: 2009年; 目的构建并表达人LIMK1与绿色荧光蛋白(EGFP-C1)的融合蛋白EGFP-LIMK1,并监测其在人成骨肉瘤MG63细胞内的表达及活性。方法利用基因重组技术将LIMK1与绿色荧光蛋白融合并构建真核细胞表达质粒,通过脂质体介导法导入人成骨肉瘤MG63细胞内,用荧光显微镜观察LIMK1基因表达情况,通过Western blot检测其在MG63细胞中的活性。结果双酶切鉴定证实LIMK1片段已克隆到pEGFP-C1载体的KpnⅠ和NotⅠ位点之间,测序结果证实了插入片段的正确性,转染MG63细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测证实LIMK1在MG63细胞中活性上调。结论成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的LIMK1真核表达载体并检测到其在真核细胞MG63中的表达及活性。; 邢志军赵建武王岩高忠礼; 关键词：转染 LIMK1 MG63

Ca^(2+)介导的信号通路对LIMK1的调控研究: 2010年; 王杨王岩赵建武高忠礼; 关键词：信号通路苏氨酸蛋白激酶肌动蛋白 N-末端 C-末端

靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：1: 2009年; 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体(pSUPER-SSH1L)。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L,为进一步运用RNA干扰技术进行SSH1L基因功能研究奠定了基础。; 邢志军赵建武王岩高忠礼; 关键词：SIRNA 真核表达载体

体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞实验方法的建立被引量：1: 2010年; 目的:探讨体外培养并诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌细胞(CMs)的实验方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs,采用5-氮杂胞苷(5-Aza)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对hMSCs进行联合诱导,诱导3～4周,观察细胞形态学的变化,免疫组织化学方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果:hMSCs体外经5-Aza和bFGF联合诱导1～2周后,细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。诱导2～3周后细胞伸出伪足呈多爪形;诱导3～4周后细胞伪足间相互连接形成肌管样结构。联合诱导3～4周后免疫组织化学鉴定结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnⅠ)和横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)表达均呈阳性。结论:hMSCs在体外经5-Aza和bFGF联合诱导可以分化为CMs。; 张慕蕊王岩李玉林; 关键词：间质干细胞 5-氮胞苷

逆转录病毒介导的靶向人Slingshot-1L基因的稳定转染细胞系的建立被引量：1: 2010年; 目的应用Slingshot(SSH)-1L重组逆转录病毒载体,建立过表达该基因的稳定转染细胞系。方法用脂质体法将含SSH-1L的重组逆转录病毒载体pLNCX-SSH-1L转染PA317包装细胞,G418筛选,滴度测定。收集病毒上清感染MG63细胞,G418筛选。结果应用pLNCX-Slingshot-1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108 CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH-1L基因的MG63细胞。结论应用SSH-1L重组逆转录病毒载体,成功建立了过表达该基因的稳定细胞系。; 张慕蕊王岩赵东旭李新娜李群李玉林; 关键词：逆转录病毒稳定转染

超声介导微泡造影剂在临床诊断及治疗中的作用被引量：4: 2011年; 超声介导靶向微泡造影属于＂超声分子影像学＂的范畴,是指将微泡造影剂通过血管途径进入靶组织,应用超声造影技术来观察靶区在组织水平、细胞及亚细胞水平的成像,借以反映病变区组织在分子基础方面的变化。特异性靶向超声微泡表面携带有对靶分子具有特异识别能力的分子探针（单克隆抗体或其他配体）,; 王岩张汉阳杨宇丹王辉; 关键词：微泡造影剂超声介导靶向超声微泡亚细胞水平超声造影技术

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ调控SSH-1L活性的作用: 2010年; 目的探讨钙(Ca2+)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含Myc-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经不同浓度的钙离子载体A23187诱导10min,蛋白印迹实验,观察P-cofilin、P-SSH1L、P-CaMKⅡ水平的变化;体内及体外实验检测CaMKⅡ对SSH-1L的磷酸化及活性调控作用。结果当A23187浓度为1μmol/L时CaMKⅡ活性达到了最大,同时此浓度下P-cofilin水平以及SSH-1L的978位点丝氨酸的磷酸化水平升高。体外实验证实CaMKⅡ可使SSH-1L(WT)磷酸化,但是对其突变体SSH-1L(2SA)无作用;同时CaMKⅡ明显抑制了SSH1L(WT)的活性,但对SSH-1L(2SA)的活性无作用。结论CaMKⅡ对SSH-1L的活性具有明显调控作用,且与SSH-1L的丝氨酸位点密切相关。; 王杨王岩赵建武高忠礼; 关键词：骨肉瘤

LIMK1调控骨肉瘤细胞耐药的实验研究及机制分析被引量：4: 2018年; 目的探索LIMK1(LIM Kinase1)基因表达上调对人成骨肉瘤细胞耐药的影响,分析其可能的机制。方法应用阳离子脂质体介导的方法,将含有LIMK1激酶活性的重组质粒CFP-LIMK1-WT cDNA按不同浓度梯度瞬时转染人骨肉瘤细胞MG63,通过RT-PCR验证转染效率;采用CCK-8法检测上述细胞对不同浓度长春新碱的耐药情况,并通过Multi Experiment Matrix(MEM)和The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery(DAVID)数据平台筛选LIMK1共表达基因及其富集信号通路,分析可能的耐药机制。结果随着转染浓度梯度增加,LIMK1及multidrug resistance protein 1(MDR1)基因表达呈明显上调趋势,人骨肉瘤细胞MG63的耐药程度增强。LIMK1及其共表达基因主要富集的信号通路有Rap1signaling pathway、TNF signaling pathway等。结论LIMK1基因表达上调促进人骨肉瘤细胞耐药,上述作用可能通过Rap1signaling pathway、TNF signaling pathway等信号通路来调节。; 陈瑞高奕瑶杨建增荣小丽王岩; 关键词：LIMK1 骨肉瘤多药耐药

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国家自然科学基金(30772488)

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