福建省海洋与渔业局重点项目(201212140006)
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
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- 鱼类Cathelicidin抗菌肽的研究进展
- 2013年
- 抗菌肽作为非特异性免疫因子,在机体抵抗病原感染中发挥重要的作用.Cathelicidin是目前发现的一个最大抗菌肽家族,具有多重生物学功能.鱼类Cathelicidin的研究虽比较滞后,但国内外学者已取得了一些研究成果.综述了前人鱼类Cathelicidin的研究成果,如基因结构、蛋白酶酶切作用、体内表达状况和生物学活性,以期为后续研究提供一定的研究基础和研究思路.
- 张东玲关瑞章
- 关键词：CATHELICIDIN基因结构生物活性
- 大黄鱼碱性磷酸酶基因的克隆及表达特征分析被引量：3
- 2014年
- 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是一种广泛分布的单脂磷酸水解酶,是动物生物代谢过程中重要的调控酶。实验首次克隆了大黄鱼ALP基因cDNA全序列,命名为LcALP,其全长为2 345 bp,开放阅读框为1 629 bp,编码543个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现,LcALP在大黄鱼雌雄各组织中均有表达,其中在眼和头肾的表达量最高,雌性鳃和脑中LcALP表达量显著高于雄性,而在性腺和脾脏中的表达量则显著低于雄性;胚胎发育过程中,多细胞期、囊胚期和原肠期LcALP基因表达水平相对较低,在卵黄栓形成期明显提高,至孵出期达到峰值,而初孵仔鱼期则显著下调;大黄鱼肌肉细胞系经LPS处理后6 h LcALP表达量降低,12 h显著下调,而poly I:C处理后表达水平持续上升,24 h显著上调至峰值。研究表明,LcALP在大黄鱼胚胎发育调控以及机体免疫防御中发挥重要作用。
- 冯建军姚志刚张子平钟恩惠庄道华林鹏郭松林关瑞章王艺磊
- 关键词：大黄鱼碱性磷酸酶脂多糖胚胎发育
- Caspase细胞凋亡通路在鱼类中的研究进展
- 2016年
- 介绍了Caspase概念与分类及其在哺乳动物中的研究情况,综述了鱼类Caspases基因的组织表达、在胚胎发育中的表达、在应激状态下的表达变化及鱼类Caspases分子的蛋白功能研究进展,并展望了鱼类Caspases今后的研究方向。
- 张在鹏冯建军
- 关键词：细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶硬骨鱼类
- 噬菌体抗体库技术在水产养殖中的研究进展
- 2014年
- 噬菌体抗体库技术是将目的基因克隆到噬菌体的外壳蛋白基因组中,转染宿主菌后,使目的基因编码蛋白和外壳蛋白以融合蛋白的形式表达,呈现在噬菌体表面,通过一系列的筛选获得特异性噬菌体抗体分子。介绍了噬菌体抗体库技术在水产养殖过程中的疾病防控、水环境监测、水产品安全控制以及与抗体芯片结合研究等方面的研究进展。
- 贾圆圆冯建军关瑞章
- 关键词：噬菌体抗体库水产养殖
- 大黄鱼酪氨酸激酶基因克隆及原核表达分析
- 2016年
- 为了研究大黄鱼(Larimichthys crocea)T淋巴细胞酪氨酸激酶(lymphocyte cell kinase,LCK)的基因结构和功能,通过RT-PCR和RACE技术克隆了大黄鱼LCK(Lc LCK)基因c DNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对该基因在大黄鱼各组织器官和胚胎发育各时期的表达情况进行了检测与分析,同时构建了Lc LCK基因的原核表达载体,在大肠杆菌中进行了高效表达。结果表明,获得的Lc LCK基因全长为2 334 bp,开放阅读框为1 503 bp,编码501个氨基酸。该蛋白具有非受体酪氨酸激酶Src家族典型的SH3、SH2和Tyr Kc三个结构域,其N端含有GCXCS和CXXC基序,C末端出现2个与人类LCK基因中的Tyr394和Tyr505相一致的保守酪氨酸位点。系统发育树表明Lc LCK与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)LCK聚为一支;Lc LCK基因在雌雄大黄鱼各组织器官中均有表达,其中在主要免疫器官脾脏、头肾和鳃有高丰度表达,雌性个体的表达量要高于雄性个体;胚胎发育过程中,Lc LCK基因表达水平在多细胞期、囊胚期和原肠期较高,囊胚期达到峰值,卵黄栓形成期显著降低,眼泡出现期至孵出期持续下降,而初孵仔鱼期则有所回升;构建的原核表达载体p GEX-4T-2-LCK在大肠杆菌中成功表达,其新增Lc LCK重组蛋白条带在SDS-PAGE电泳检测中约为84 k D,与预期表达的分子量相符。大黄鱼Lc LCK在雌雄成熟个体的细胞免疫应答以及胚胎发育过程中T淋巴细胞免疫器官的形成密切相关。
- 张在鹏林鹏郭松林王艺磊张子平冯建军
- 关键词：大黄鱼胚胎发育原核表达
- 欧洲鳗鲡MyD88基因的克隆及其免疫功能分析被引量：7
- 2015年
- 髓样分化因子（myeloid differentiation factor88，MyD88）是TLR（toll-like receptor）信号通路的关键接头蛋白，在先天性免疫中发挥重要作用。实验首次克隆了欧洲鳗鲡MyD88基因cDNA全长序列，命名为AaMyD88，其全长为1539bp，开放阅读框为846bp，编码282个氨基酸。该蛋白三维丝带空间结构图与人类的MyD88十分相似，具有MyD88家族典型的死亡结构域和TIR（toll-1ike／IL-1receptor）结构域，其中TIR结构域中含有3个序列高度保守的boxl、box2和box3。同源性分析显示，欧洲鳗鲡MyD88氨基酸序列与斑点叉尾鲴相似性最高，为76．3％，与其他鱼类相似性为67．5％～73．2％，与哺乳动物相似性较低，为61．6％～62．6％。欧洲鳗鲡MyD88在系统进化树中与其他鱼类MyD88聚为一支，哺乳类以及两栖类MyD88分别聚为一支。实时荧光定量PCR检测发现，AaMyD88基因在欧洲鳗鲡各组织器官中均有表达，其中在肝脏中的表达量最高，心脏、肠、脾脏以及肾脏中也有较高的表达，而肌肉和鳃中的表达水平较低；欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后，肾脏AaMyD88基因在第7天表达量有显著性提高，14d后恢复至正常水平，而脾脏AaMyD88基因表达水平从第7～21天持续显著上调，于第7天达到峰值，其表达量为肾脏的1．7倍；欧洲鳗鲡鳍细胞系经polyI：C处理后，AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6-48h均有显著升高，于12h达到峰值。LPS处理后的欧洲鳗鲡鳍细胞系AaMyD88基因表达水平在3h显著降低，6和12h显著升高，于12h达到峰值，24h后恢复至正常水平。polyI：C处理组MyD88基因表达水平在12～48h均显著高于LPS处理组。研究表明，MyD88在欧洲鳗鲡抵御外源微生物的免疫应答反应中发挥重要作用。
- 姚志刚冯建军王艺磊郭松林林鹏张子平张在鹏
- 关键词：欧洲鳗鲡基因克隆荧光定量免疫功能
- 嗜水气单胞菌与迟顿爱德华氏菌二联外膜蛋白的表达及其初步免疫原性被引量：7
- 2015年
- 在构建鳗鲡病原性嗜水气单胞菌与爱德华氏菌二联外膜蛋白重组表达载体的基础上,采用不同的诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达条件进行探讨。结果表明,不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对该载体的表达无明显影响。在菌液浓度D600nm=0.8时,采用0.25mmol/L的IPTG经16℃诱导培养过夜后表达。表达产物采用KTApurifier-100蛋白质纯化仪,结合His标签柱亲和层析后获得分子质量87.1ku的高纯度蛋白。蛋白经透析复性后免疫鳗鲡以初步研究其免疫原性。结果表明,免疫后第28天,重组蛋白不同剂量注射组的鳗鲡血清中抗体效价均显著高于PBS注射对照组,初步表明该重组表达蛋白具有良好的免疫原性。
- 王玉冯建军郭松林林鹏
- 关键词：迟钝爱德华氏菌鳗鲡免疫原性
- 血红蛋白源抗菌片段的研究进展被引量：1
- 2013年
- 抗菌肽也称宿主防御肽，通常是指一类具有2—9个正电荷，由12—100个氨基酸组成的阳离子肽，它们由单独的基因编码，发挥着独特的抗菌作用。迄今，从哺乳动物、鸟类、两栖类、鱼类、昆虫和植物等各类生物中均分离得到抗菌肽，已鉴定或推导并登陆的抗菌肽序列有2170条（2013年2月APD：http：//aps.unmc.edu/AP/about．php）。
- 张东玲关瑞章黄文树熊静
- 关键词：血红蛋白抗菌机制
- 欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析被引量：1
- 2015年
- 通过RT-PCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)Ig轻链基因cDNA全长序列,命名为AaIgL,其全长为1 016bp,开放阅读框为714bp,编码238个氨基酸。将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明新增的27ku蛋白条带与预期值相符,且与兔抗欧洲鳗鲡IgM血清发生特异性显色反应,证实了AaIgL基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;实时荧光定量PCR检测结果发现:AaIgL在欧洲鳗鲡各组织中均有表达,其中脾脏的表达量最高,肾脏和心脏中也有较高的表达水平,而肝脏、肌肉、鳃以及肠中的表达量较低;欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后脾脏和肾脏的AaIgL表达水平明显上升,其峰值分别为第7天和第14天,AaIgL在脾脏的表达量显著高于肾脏,但是第21天后均恢复至正常水平。以上结果表明,AaIgL在欧洲鳗鲡机体免疫防御中发挥重要作用,脾脏是AaIgL基因的主要表达器官。
- 冯建军郭松林林鹏
- 关键词：欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链原核表达荧光定量PCR
