国家自然科学基金(30700673)
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
- 相关作者：杨淋清庄志雄龚春梅刘庆成刘建军更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心中山大学深圳市慢性病防治院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1在苯并（a）芘诱导人支气管上皮细胞DNA甲基化改变中的作用被引量：7
- 2011年
- 目的 观察苯并（a）芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]诱导体外细胞DNA甲基化水平改变,探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly（ADP-ribose）polymerase 1,PARP1]在该过程中的作用.方法 以1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、30.0 μmol/L浓度B（a）P分别处理人支气管上皮细胞（16HBE）及其PARP1缺陷细胞（16HBE-shPARP1）72 h.采用免疫荧光和高效毛细管电泳检测其基因组DNA整体甲基化水平改变,同时动态监测PARP1和DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferases 1,DNMT1）表达的变化.结果 16HBE和16HBE-shPARP1细胞基因组整体甲基化百分比（mCpG%）分别为（4.04±0.08）%和（9.69±0.50）%.经5-氮杂脱氧胞苷（DAC）处理72 h后,mCpG%值分别下降为（3.15±0.14）%、（6.07±0.54）%.经B（a）P染毒72 h后,16HBE细胞基因组mCpG%值[B（a）P浓度由低到高]分别为（5.10±0.13）、（4.25±0.10）、（3.91±0.10）、（4.23±0.27）、（3.70±0.15）、（3.08±0.07）;16HBE-shPARP1细胞基因组mCpG%值（浓度由低到高）分别为（10.63±0.60）、（13.08±0.68）、（9.75±0.55）、（7.32±0.67）、（6.90±0.49）、（6.27±0.21）.两种细胞不同处理组间mCpG%差异有统计学意义（F值分别为61.67、60.91,P值均＜0.01）.16HBE细胞各剂量组[B（a）P浓度由低到高]PARP1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的141.0%、158.0%、167.0%、239.0%、149.0%、82.9%,差异均有统计学意义（t值分别为11.45、17.32、32.24、33.44、20.21、9.87,P值均＜0.01）;16HBE-shPARP1细胞各剂量组（浓度由低到高）PARP1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的169.0%、217.0%、259.0%、323.0%、321.0%、256.0%,差异有统计学意义（t值分别为9.06、15.92、22.68、26.23、37.19、21.15,P值均＜0.01）.当B（a）P染毒剂量达5.0 μmol/L后,16HBE细胞各剂量组（浓度由低到高）DNMT1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的125.0%、162.0%、275.0%、233.0%,差异有统计学意义（t值分别为12.74、24.92、55.1
- 陶功华龚春梅杨淋清刘庆成刘建东吴德生胡辛楠黄海燕刘建军柯跃斌庄志雄
- 关键词：DNA甲基化
- Comparison of global DNA methylation profiles in replicative versus premature senescence
- DNA methylation is considered to play an essential role in cellular senescence. To uncover the mechanism under...
- 文献传递
- 过氧化氢诱导细胞早衰过程中p66Shc的表观遗传修饰机制
- 目的:近年来研究表明,p66Shc在多种细胞中表达,参与细胞生长与氧化应激的信号转导途径,敲除该基因可以延长动物的寿命,这将机体衰老与信号转导联系起来,成为衰老机制研究的新热点。本研究主要观察体外培养的人胚肺成纤维细胞在...
- 张文娟纪卫东杨淋清杨建平许玉玲徐薇庄志雄
- 文献传递
- 长期低剂量甲醛染毒对永生化人支气管上皮细胞16HBE部分癌症相关基因启动子区甲基化的影响
- 目的探讨低剂量甲醛长期染毒对永生化人支气管上皮细胞16HBE癌症相关基因启动子区甲基化水平的影响。方法 16HBE细胞每周染毒甲醛10μmol·L24 h,连续24周,分别于染毒3,6,9,12,15,18,21和24周...
- 杨淋清吴德生刘庆成龚春梅张文娟胡恭华周丽黄新凤刘建军庄志雄
- 关键词：甲醛亚甲基四氢叶酸还原酶基因
- 文献传递
- 低剂量双酚A与乳腺癌关系研究进展被引量：13
- 2010年
- 杨淋清庄志雄
- 关键词：双酚A乳腺癌雌激素受体DNA损伤表观遗传
- 细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究被引量：3
- 2008年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用。方法在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/LH_2O_2处理,每天用H_2O_2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol/L H_2O_2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组。荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其启动子区-846639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在P16启动子区,第一外显子上游-1000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-846～-639 bp之间,长度为208 bp。中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、047,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79。在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16IP2启动子区(-229～-60 bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主。结论细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。
- 张文娟纪卫东杨淋清杨建平许玉玲徐薇庄志雄
- 关键词：细胞衰老基因P16甲基化乙酰化
- 毛细管胶束电动色谱测定基因组DNA甲基化水平被引量：6
- 2010年
- DNA甲基化作为表遗传学的重要研究内容,是哺乳动物表达调控的主要表遗传学形式.研究表明,DNA甲基化与肿瘤关系密切[1-2],全基因组DNA低甲基化是肿瘤细胞基本特征之一[3-4],在肿瘤的发生和发展中存在DNA甲基化水平和模式的混乱.DNA甲基化改变能否作为生物标志用于临床早期诊断已成为当前研究的热点.目前,用于DNA整体甲基化水平检测方法有多种,但能真正从定量的角度进行快速、精确分析的方法却很少.笔者采用毛细管胶束电动色谱（miceller electrokinetic capillary chromatography,MECC）法同时分离DNA酶解后5类单核苷酸（包括mdC）,建立了一种快速检测基因组DNA整体甲基化水平的方法.
- 张慧敏陶功华杨建平庄志雄杨淋清柯跃斌
- 关键词：毛细管胶束电动色谱基因组DNA甲基化水平DNA甲基化肿瘤细胞表遗传学
- 长期低剂量甲醛染毒对永生化人支气管上皮细胞16HBE部分癌症相关基因启动子区甲基化的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨低剂量甲醛长期染毒对永生化人支气管上皮细胞16HBE癌症相关基因启动子区甲基化水平的影响。方法 16HBE细胞每周染毒甲醛10μmol·L-1 24h,连续24周,分别于染毒3,6,9,12,15,18,21和24周提取RNA或DNA,应用DNA甲基化相关酶消化结合荧光定量PCR的方法观察24个癌症相关基因启动子区甲基化水平的变化;应用荧光定量PCR的方法观察染毒对亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和成对盒基因(PAX5)基因表达的时间-效应关系。结果与正常对照组16HBE细胞相比,甲醛染毒细胞4个基因甲基化水平显著改变,2个基因甲基化程度升高,2个基因甲基化程度降低;而在阳性对照人非小细胞癌上皮细胞A549细胞中有9个基因甲基化水平发生显著变化,其中3个基因甲基化水平升高,6个基因甲基化水平降低;甲醛染毒16HBE细胞和A549细胞MTHFR基因均发生高甲基化改变,PAX5基因均出现低甲基化改变。与正常对照组相比,甲醛染毒24周的细胞中,MTHFR基因启动子区甲基化水平升高,非甲基化DNA含量降低58.2%,而PAX5基因启动子区甲基化水平降低,非甲基化DNA含量升高27.1%;随着甲醛染毒时间延长,MTHFR基因表达逐渐降低,而PAX5基因表达逐渐升高。结论低剂量甲醛长期染毒可以使MTHFR基因和PAX5基因启动子区甲基化水平异常,进而引起基因表达水平改变。
- 杨淋清吴德生刘庆成龚春梅张文娟胡恭华周丽黄新凤刘建军庄志雄
- 关键词：甲醛亚甲基四氢叶酸还原酶基因
- DNA甲基转移酶1基因低表达的人支气管上皮细胞基因组甲基化水平的体外试验
- 2011年
- 目的观察人支气管上皮细胞（16HBE）的DNA甲基转移酶1（DNMT1）基因低表达细胞株细胞周期和基因组整体甲基化水平的改变。方法用慢病毒介导的RNA干扰方法将4个不同的短发夹RNA片段转染16HBE细胞，并用免疫印迹法（Western blotting）检测该细胞DNMT1蛋白表达水平，用流式细胞仪和5．甲基胞嘧啶（5-mC）免疫荧光法检测该细胞的细胞周期和细胞基因组整体甲基化水平。结果16HBE-shDNMT1—4细胞株的DNMT1蛋白表达与对照组相比平均降低约44％，差异有统计学意义（P〈0．05），但细胞周期和基因组整体甲基化水平无明显改变。结论成功建立DNMT1基因低表达的16HB细胞株，其细胞周期和基因组整体甲基化水平无明显改变。
- 杨淋清刘庆成龚春梅陶功华刘建军胡恭华黄海燕王昆鹏庄志雄
- 关键词：DNA甲基化
- 毛细管胶束电动色谱测定基因组DNA甲基化水平
- DNA甲基化作为表遗传学的重要研究内容,是哺乳动物表达调控的主要表遗传学形式。研究表明,DNA甲基化与肿瘤关系密切,全基因组DNA低甲基化是肿瘤细胞基本特征之一,在肿瘤的发生和发展中存在DNA甲基化水平和模式的混乱。DN...
- 张慧敏陶功华杨建平庄志雄柯跃斌杨淋清
- 文献传递
